二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中癌前病变阶段差异表达蛋白质的筛选

目的通过比较二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝细胞癌发生过程中不同阶段的蛋白质表达谱，筛选在大鼠肝癌前病变阶段起重要作用的蛋白质分子。方法大鼠分为DEN组和正常对照组，诱癌过程中定期处死动物并取其肝组织；以γ-谷氨酰转肽酶染色阳性的肝细胞增生灶为标志，识别和获取肝癌前病变的组织标本。用双向电泳及基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法对大鼠正常肝组织、癌前病变组织和肝癌组织的全蛋白质组表达谱进行比较和鉴定。用Western blot和RT—PCR方法对部分差异表达蛋白质（如层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶）进行表达水平的验证。结果筛选出表达水平差异≥2倍的蛋白质共82种，其中在癌前病变阶段即发生明显改变的差异表达蛋白质有47种，包括在正常对照组、癌前病变组、肝癌组呈现依次上调的层黏连蛋白受体1等8种蛋白质和在上述组织中呈现依次下调的鲱精胺酶等22种蛋白质。Western blot和RT—PCR方法对层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶表达水平的验证结果与双向电泳的结果相似。结论大鼠肝癌形成过程中不同阶段的蛋白质表达谱有所不同；对癌前病变的差异表达蛋白质如层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶等进行深入探讨，有望为人类肝癌的早期诊断和治疗提供线索。