表达猪流行性腹泻病毒N蛋白Vero细胞系的构建及初步鉴定

【目的】构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的Vero细胞系,将有助于PEDV的进一步深入研究。【方法】本研究将N基因克隆到慢病毒载体中,构建重组质粒pLenti-CMV-N,利用慢病毒载体包装系统转染293T细胞,包装表达N蛋白的慢病毒颗粒,将慢病毒颗粒转导至Vero细胞,用潮霉素B初步筛选阳性细胞,采用终点稀释法,筛选表达PEDV N蛋白的Vero细胞系,最后进行鉴定。【结果】RT-PCR结果表明构建的细胞系基因组中存在N基因序列,Western blot和IFA试验验证了N蛋白在细胞系中的表达。【结论】本研究成功构建了表达PEDV N蛋白的Vero细胞系。