GPC3真核表达载体的构建及其对肝癌细胞功能的影响

目的:通过构建GPC3增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,研究磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3,GPC3)促细胞增殖效应的影响,探讨GPC3基因对肝癌细胞侵袭和转移能力的影响。方法:应用基因重组技术及限制性内切酶酶切构建并鉴定pEGFP-IRES-N1-GPC3增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,经脂质体LipofectamineTM2000介导转染BEL-7404后,通过G418筛选出抗性克隆,应用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测GPC3 mRNA在真核细胞中的表达,并在激光共聚焦显微镜下观察目的蛋白在真核细胞内的表达情况,采用免疫荧光法和流式细胞仪检测GPC3对细胞增殖效应的影响。Transwell小室实验检测BEL-7404肝癌细胞的侵袭能力。结果:限制性内切酶酶切分析、重组质粒测序鉴定表明为正确重组子,荧光显微镜下可见转染的真核细胞胞膜区发出强绿色荧光,RT-PCR法表明GPC3在真核细胞中成功表达,转GPC3的BEL-7404肝癌细胞与对照组相比有促细胞增殖及侵袭和转移效应。结论:构建完成真核表达重组质粒pEGFP-IRES-N1-GPC3;GPC3基因在BEL-7404中成功表达;GPC3可促进肝癌细胞的增殖,其通过增加细胞的侵袭能力而促进肝癌的转移。

肝叶、肝段切除治疗肝内胆管结石46例体会

目的探讨肝叶、段切除术治疗肝内胆管结石的临床疗效。方法回顾性分析我院2000年1月至2011年8月行肝叶、段切除术的46例肝内胆管结石患者临床资料,手术方式分别为左肝外叶切除、左半肝切除、右肝前叶切除、右肝后叶切除、肝叶(段)切除术+胆管空肠Roux-en-Y吻合术。结果本组无手术死亡病例,术后发生并发症12例,分别为切口感染或裂开、胆漏、膈下脓肿、上消化道出血、肺部感染等,经保守治疗均治愈;术后残留结石率8.7%(4/46),随访期间复发3例,复发率为7.3%,再手术率13.0%(6/46)。结论选择合理的肝叶、段切除手术治疗肝内胆管结石可取得良好效果。