华支睾吸虫致肝胆管纤维化的免疫学机制研究进展

华支睾吸虫主要寄生于人的肝胆管内,虫体在胆管内的长期寄生会导致肝胆管慢性炎症,引起胆管上皮增生,进而导致胆管周围纤维化。本文通过从虫体的固有免疫、适应性免疫对华支睾吸虫感染所致纤维化在免疫学方面的研究进展进行阐述。

华支睾吸虫感染对小鼠肝纤维化和免疫调节功能的影响

为进一步了解小鼠感染华支睾吸虫过程中的肝纤维化情况和免疫调节变化,将BALB/c小鼠随机分成感染组和对照组,每组30只,感染组小鼠胃饲200μl含150个华支睾吸虫囊蚴的生理盐水,对照组小鼠灌胃同体积生理盐水,于感染后第1、2、4、8和16周随机各取6只,称体质量后取肝、脾和血清。取小鼠肝组织,石蜡切片后进行苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色,观察胶原纤维沉积情况。小鼠肝组织总RNA逆转录后qRT-PCR检测肌成纤维细胞标志α-肌动蛋白(ACTA2)基因的相对转录水平,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测肝组织ACTA2蛋白的相对表达量。取小鼠脾组织,称重并计算每10 g体质量的脾质量(脾脏指数,mg/10 g)。流式细胞术分析小鼠脾CD4+T细胞、辅助性T1(Th1)细胞、Th2细胞、Th17细胞和调节性T(Treg)细胞的动态变化。取小鼠血清,使用流式细胞术检测肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-2、IL-4、IL-10和IL-17A等细胞因子的分泌水平。使用GraphPad Prism 9.0软件进行数据分析。组间比较采用双向方差分析,两两比较采用t检验。结果显示,小鼠感染华支睾吸虫囊蚴后体质量降低、脾指数升高,感染后各时期肝组织皆可见炎症病灶。HE染色结果显示,小鼠感染华支睾吸虫囊蚴后第1周,肝胆管周围可见华支睾吸虫幼虫,幼虫周围出现炎症细胞浸润。Masson染色结果显示,小鼠感染华支睾吸虫囊蚴后各时期,胶原纤维沉积相对面积均高于对照组(F=20.190,P<0.05)。qRT-PCR结果显示,感染后第2、4和16周,感染组小鼠肝组织ACTA2基因相对转录水平均高于对照组(t=2.042、2.475、1.634,均P<0.01);第8周低于对照组(t=2.758,P<0.05)。Western blotting检测结果显示,感染后各时期,感染组小鼠肝脏ACTA2蛋白相对表达量均高于对照组(F=3.225,P<0.01)。流式细胞术结果显示,感染组小鼠脾CD4+T细胞占比在感染后第2周降低至(13.4±1.8)%,16周升高至(22.4±1.5)%;Th1细胞占比在感染后第2周升至(16.9±5.3)%,第16周降低至(3.9±2.6)%;Th2细胞占比在感染后第4周降低至(2.3±0.6)%,第4周后逐渐升高;Th17细胞占比在第8周时升至(5.3±3.4)%,第16周下降至(2.4±1.4)%;Treg细胞占比在第4周降至(7.3±1.5)%,第16周升至(13.9±1.2)%。感染组小鼠血清TNF水平在感染后第1周时升至(35.16±11.28)pg/ml,第8周起降至正常水平[(8.98±1.66)pg/ml];血清IL-6水平在感染后各时期均高于对照组(t=2.095,P<0.05);血清IL-2水平在感染后第8周降至(0.09±0.18)pg/ml,但在第16周升高至(3.81±2.79)pg/ml;感染组小鼠血清IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-17A水平随着感染时间延长而逐渐升高(F=8.726、8.068、6.795、14.840,均P<0.05)。本研究结果提示,CD4+T细胞和血清细胞因子的动态变化与华支睾吸虫诱导肝纤维化的发生发展密切相关。