广西猪瘟病毒变异株分离鉴定及其E2基因遗传特性分析

【目的】明确猪瘟病毒(CSFV)广西分离株的分子流行病学特点和病原学特性,为科学使用CSF疫苗及有效防控广西CSFV流行提供参考依据。【方法】2019年12月—2020年10月,从广西南宁、隆安、柳州、百色及北海等地采集疑似CSFV感染的流产胎儿、死胎、木乃伊胎和弱仔猪的组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和淋巴结等)进行CSFV检测,通过PK-15细胞进行病毒分离,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)进行鉴定,克隆CSFV分离株E2基因,经DNASTAR进行核苷酸序列及推导氨基酸序列同源比对分析后以MEGA 6.0构建遗传进化树;同时以Shimen标准株为对照,检测感染PK-15细胞后分离株的生长曲线、病毒mRNA和E2蛋白水平。【结果】从104份疑似CSFV感染样品中分离出1株CSFV,命名为GXNN2019-13,接种至PK-15细胞后并未出现细胞病变。GXNN2019-13株与我国Shimen标准株(强毒)和HCLV株(弱毒)的E2基因核苷酸序列相似性较低,分别为84.6%和83.5%,而与日本CSF0745株及德国CSF0496和Alfort Tuebingen株的相似性分别为93.9%、92.2%和91.5%;GXNN2019-13株与Shimen和HCLV株的E2氨基酸序列相似性分别为89.3%和88.7%,与日本CSF0745株及德国CSF0496和Alfort Tuebingen株的相似性分别为95.5%、94.6%和93.8%;以HCLV株为参照进行多序列比对,发现GXNN2019-13株E2蛋白较Shimen标准株的变异程度更高。感染PK-15细胞后,GXNN2019-13株的病毒复制能力弱于Shimen标准株,生长曲线上各时间点的病毒效价及mRNA水平均低于Shimen标准株。【结论】从疑似CSFV感染病料分离获得的GXNN2019-13株属于2.3亚型中的独立小分支,与之前的广西分离株亲缘关系较远,可能是新的变异毒株,其复制能力弱于Shimen标准强毒株。