基于十八年跨度的乙型肝炎病毒基因型I分子进化研究

目的 探索乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因型I长期进化特征。方法 从广西隆安研究队列中选取已明确感染基因型I的HBsAg无症状携带者作为研究对象,检测其血清HBV标志物和病毒载量。使用酚氯仿法提取HBV DNA,采用巢式PCR扩增HBV全基因组,进行克隆测序,运用BioEdit、Mega等软件对测序结果进行生物信息学分析。结果 共纳入9名研究对象,获得279条全长基因序列。系统进化树分析结果显示,22.2%(2/9)的研究对象HBV基因型发生了转换,从基因型I1转换成基因型C1。2004年所有研究对象HBV毒株均发生X基因核心基因启动子(BCP)双突变(nt1762A→T/1764 G→A);88.9%(8/9)的研究对象HBV毒株发生PreC基因nt1896(G→A)终止密码突变。多数研究对象发生免疫逃避突变和耐药突变,共检出18种免疫逃逸突变和6种多重耐药突变。研究对象GD056、XW511、GA135、XX55、CZ647、TX119、WX058和YF201携带的毒株免疫逃逸突变率分别为:69.6%、7.5%、96.7%、94.4%、11.8%、4.7%、100.0%和100.0%;研究对象GA135、XW511、WX058、XX55、YF201、CZ647和TX119携带的毒株耐药突变率分别为:6.7%、2.5%、3.8%、50.0%、4.5%、2.9%和4.7%。66.7%、55.6%和44.4%的研究对象2004年和/或2022年携带的HBV毒株分别在PreS/S基因、X基因和PreC/C基因受到正向选择压力,所有研究对象携带的HBV毒株在P基因以负向选择压力占主导。结论 在自然感染进程中,HBV基因型I可以发生基因型转换,基因型I在一些常见的临床相关热点突变上突变率较高,部分毒株可出现免疫逃避突变和耐药突变,HBV基因组各个开放读码框所受的选择压力不相同。

2004—2015年广西甲型肝炎流行病学特征分析

目的了解广西甲型肝炎（简称甲肝） 的流行病学特征.方法采用描述性流行病学方法对广西2004-2015 年甲肝疫情监测资料进行分析.结果广西2004-2015 年甲肝发病率呈下降趋势,由2004 年的4.56/10 万,下降至2015 年的1.53/10 万,平均发病率2.90/10 万.发病率排前5 位的城市为贺州市、河池市、防城港市、桂林市、百色市.全年均有发病,5 月、6 月是发病高峰.15～50 岁人群病例较多,男女性别比2.23∶1,病例职业构成主要为农民、学生等.结论广西2004-2015 年甲肝发病率呈下降趋势,但仍需重视甲肝疫情,采取以切断传播途径为主的综合防控措施,有效遏制甲肝流行.

血清骨桥蛋白和肝癌的关系可能归因于乙型肝炎病毒慢性感染

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)感染是否增加血清骨桥蛋白(OPN)浓度及OPN与肝癌之间的关系。方法按病例对照研究原理,研究对象分为6个组:HBsAg无症状携带者组(ASC组)、HBsAg阳性慢性肝病组、HBsAg阳性肝癌组、HBsAg阴性其他肿瘤组、HBsAg阴性肝癌和慢性肝脏病组、健康对照组。用化学发光微粒子免疫检测法检测血清HBsAg浓度,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清OPN浓度,用Mann-Whitney U检验和线性回归分析法进行统计分析。结果6组研究对象共241名。HBsAg阳性肝癌组与HBsAg阴性其他肿瘤组、健康对照组血清OPN浓度差异均有统计学意义(P值均=0.0001)。在HBsAg阳性肝癌组与ASC组、HBsAg阳性慢性肝病组间,以及在HBsAg阴性肝癌和慢性肝脏病组与健康对照组间,血清OPN浓度差异均无统计学意义(P值分别为0.360、0.588和0.075)。多元线性回归分析结果显示,血清HBsAg浓度是与OPN浓度有关的唯一变量(P=0.0001)。结论血清OPN浓度可能与肝癌本身无关,而与HBV慢性感染有关,在HBV感染者中,可以用血清HBsAg浓度预测血清OPN浓度。

广西那坡县发现乙肝病毒新基因亚型D11

目的 2011年,在广西那坡县发现一例HBsAg阳性携带者,其所携带的HBV利用S基因序列分型法无法分型,本研究意在用全基因组分型法对其进行分型。方法为便于前后对比,除2011年血清标本外,还收集该携带者2018年的血清标本。检测前后2份标本HBV血清标志物和病毒载量,使用酚氯仿法提取HBV DNA,巢式PCR扩增HBV全基因组,将扩增产物进行克隆并测序。利用软件Mega 6.0、 Bioedit 7.0对测序结果进行分析。结果 2011年和2018年的2份标本HBsAg均为阳性, 2份标本的PCR产物分别获得15个克隆株。对获得的克隆株进行生物信息学分析发现, 2011年该携带者体内乙肝病毒基因型为B型、 D型以及未知基因型; 2018年该携带者体内乙肝病毒基因型仅为D型。30个克隆株中有23个单独聚集成簇, bootstrap值为100%,与D1-D10亚型间核苷酸的差异>4%。结论该携带者体内的HBV基因型为新基因亚型D11。

基于长期研究队列的广西隆安县乙型肝炎病毒准种研究

目的明确广西隆安县队列HBsAg无症状携带者感染的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)准种序列长期演化特征。方法收集9名广西隆安县队列HBsAg无症状携带者2004年、2007年、2013年、2019年或2020年4个不同时间点血清样本。酶联免疫吸附测定法检测HBV血清学标志物;聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)荧光探针法检测HBV病毒载量;试剂盒提取HBV DNA;PCR法扩增HBV全基因组,进行二代测序;利用Mega等软件对所获得的序列进行生物信息学分析。结果共获得23份血清样本,309条全长基因准种序列,每份标本平均获得(0.18±0.07)G测序数据量。55.55%(5/9)的研究对象携带的HBV毒株基因型在长期进化过程中发生了基因型转换,PreS/S区系统进化树基因分型结果与全基因组分析结果完全一致;发现B/C、I/C重组体;各研究标本的Sn值范围为0~0.37,D值范围为0~0.11;共检出21种特殊单核苷酸/氨基酸突变位点(S区7种,X区2种,PreC区3种,BCP区9种)和6种缺失突变,发现多联突变组合形式,未发现任何耐药突变,77.8%(7/9)研究对象在2004年携带的HBV毒株发生了BCP区nt1762(A→T)/1764(G→A)双突变和PreC区1896位(G→A)点突变,HBV基因可在无抗病毒药物压力下由突变型可恢复为野生型和(或)野生型转变为突变型;HBV基因组进化率为2.03×10^(-5)~3.50×10^(-3)。结论在HBV自然感染进程中,HBV基因型和重组体、准种复杂性和多样性可随时间发生改变;HBV基因突变型和野生型可相互转换,一定程度上降低了利用基因型和相关突变来预测临床结局的价值;隆安县乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)无症状携带者HBV基因组进化率很高。

Toll样受体(TLR)基因多态性与华支睾吸虫易感性的关联研究

目的探索人类Toll样受体(TLR)基因多态性与华支睾吸虫易感性的关系。方法按照成组病例对照研究原理,采用单纯随机抽样方法,分别从宾阳县华支睾吸虫常规监测中发现的华支睾吸虫感染者和正常人群选取研究对象纳入华支睾吸虫感染组和正常对照组。采集研究对象静脉血5 mL,提取外周血基因组DNA,采用PCR扩增TLR2 rs3804099和rs3804100、TLR4 rs4986790和rs49867914个位点所在基因序列并测序。结果共纳入57名研究对象,其中华支睾吸虫感染组31名、正常对照组26名。TLR2基因rs3804099位点CC、CT、TT 3个基因型频率在华支睾吸虫感染组和正常对照组的差异均无统计学意义。TLR2基因rs3804100位点,华支睾吸虫感染组CT基因型频率(25.8%)低于对照组(72.7%)(χ^(2)=7.406,P=0.006),华支睾吸虫感染组TT基因型频率(71.0%)高于对照组(27.3%)(χ^(2)=6.068,P=0.014)。TLR2基因rs3804100位点TT基因型感染者大多数属于轻度感染(81.8%,18/22)。TLR4基因rs4986790位点、rs4986791位点在华支睾吸虫感染组和正常对照组基因型均完全相同,前者为AA基因型,后者为CC基因型。结论未发现TLR4基因rs4986790位点、rs4986791位点多态性与华支睾吸虫易感性有关。TLR2基因rs3804100位点多态性可能与华支睾吸虫易感性有关;该位点TT基因型者可能对华支睾吸虫更易感,CT基因型则可能对机体华支睾吸虫感染具有保护作用。

不同HBeAg状态血清HBsAg滴度与HBV病毒载量相关关系的纵向分析

目的探讨不同HBe Ag状态下血清HBs Ag滴度与病毒载量之间的相关关系。方法从由2 258名慢性乙肝病毒感染者组成的研究队列中随机抽取89名研究对象进行血清HBs Ag滴度与病毒载量相关关系的横断面和纵向分析。结果 HBe Ag阳性组HBs Ag滴度、病毒载量均显著高于HBe Ag阴性组(P<0.001);第一轮血清标本HBs Ag滴度与病毒载量呈正相关关系(r=0.642,P<0.001),这种相关关系均见于HBe Ag阳性组(r=0.449,P=0.013)和HBe Ag阴性组(r=0.300,P=0.018);且这种相关关系也见于第三轮HBe Ag阳性组和阴性组(r=0.782,P<0.001;r=0.279,P=0.028);在第二轮标本中,HBe Ag阳性组HBs Ag滴度与病毒载量呈正相关关系(r=0.625,P=0.001),而这种关系在HBe Ag阴性组接近显著性(r=0.229,P=0.078)。多因素分析表明病毒载量、HBe Ag状态和性别与血清HBs Ag滴度有关。结论血清HBs Ag滴度和HBV病毒载量之间的相关关系在HBe Ag阳性和阴性组之间没有差异。

广西2005—2014年戊型肝炎流行病学分析

目的了解广西戊型病毒性肝炎（戊肝）的发病趋势及流行病学特征,为制定防控措施提供科学依据。方法采用描述性流行病学方法对广西2005—2014年戊肝疫情监测资料进行分析。结果广西2005—2014年戊肝发病率逐年上升,2005年发病率为0.35/10万,2014年上升至3.29/10万,平均发病率1.74/10万。发病率较高的地区为梧州市、玉林市、桂林市、南宁市、防城港市等市。病例主要集中于冬春季（1—5月）。40~60岁病例较多,男女性别比3.01∶1,病例职业构成主要为农民、离退人员、家务及待业、工人等。结论广西2005—2014年戊肝发病率逐年上升,南宁等市是高发区,中老年男性、农民是发病高危人群。应重视戊肝疫情形势,采取以切断传播途径为主的综合防控措施,有效遏制戊肝流行。

广西柳州市丙型肝炎病毒的基因型和基因亲缘性分析

目的分析近年来广西柳州市丙型肝炎病毒(HCV)的基因型和基因亲缘性。方法用巢式RT-PCR法对HCV NS5B区进行扩增,通过测序和构建进化树进行基因分型并分析基因亲缘性。结果对182株HCV基因分型:1a型占3.3%,1b型占50.5%,3a型占17.0%,3b型占4.9%,6a型占26.4%,6c/d型占2.7%,6型未分亚型(6un)占0.5%。6株1a型HCV与美国参照株属不同分支。2.2%(2/92)的1b型与日本参照株属同一分支;29.3%(27/92)的1b型与来源于上海的参照株属于同一分支,其余67.4%(62/92)的1b型则独立分支;另外1株独立于上述各分支外。95.2%(20/21)的3a型以及77.8%(7/9)的3b型与日本和澳大利亚参照株属同一分支或并列分支。4.8%(1/21)的3a型和22.2%(2/9)的3b型则独立分支。97.9%(47/48)的6a型与越南、香港和英国参照株属同一分支或并列分支;2.1%(1/48)的6a型独立于上述分支外。5株HCV与6c和6d参照株并列分支,1株6型病毒未能区分亚型。结论近年来广西柳州市HCV流行的主导基因型是1b、6a和3a。1b型的大部分具有独立的本地亲缘性特征;而6a和3a型的绝大部分则无此特征。

广西隆安县2006-2014年原发性肝癌回顾性调查研究

目的探讨广西隆安县原发性肝癌流行病学特征及危险因素。方法回顾性调查隆安县2006-2014年发病的原发性肝癌患者共2 170例,通过查阅纸质报告表、病案、肿瘤直报系统等方法收集其基本人口学资料、诊断与报告情况、乙肝病毒和丙肝病毒感染以及免疫接种情况,并对上述资料进行统计分析。结果病例以35岁以上中老年男性为主,平均年龄(57.22±14.61)岁,男女性别比为3.50∶1,壮族占绝大多数。2 170名研究对象中,457例(21.06%)患者乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBs Ag)阳性,10例(0.46%)抗-丙肝病毒抗体(anti-hepatitis C virus Ig G,anti-HCV Ig G)阳性,3例HBs Ag和抗-HCV Ig G均为阳性。HBs Ag感染率为65.76%(457/695),丙肝病毒(hepatitis C virus,HCV)感染率为1.79%(10/558)。除24例研究对象乙肝疫苗接种史不详以外,其余均无乙肝疫苗接种史。2006-2014年粗发病率为60.50/10万,中国人口标化发病率为32.11/10万,世界人口标化发病率为43.60/10万。2012-2014年发病率出现逐年上升趋势。结论隆安县是肝癌高发区,且近年发病上升。乙肝病毒感染是隆安县肝癌发病主要危险因素之一。

华支睾吸虫排泄-分泌产物对小鼠巨噬细胞一氧化氮产生和核转录因子κB活化的影响

目的研究华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)排泄-分泌产物(ESPs)对小鼠巨噬细胞系RAW264.7一氧化氮(NO)产生与核转录因子κB(NF-κB)活化的影响。方法用20μg/ml华支睾吸虫ESPs水溶性浓缩物及其有机溶剂提取物(ESPs-ex)和0.1μg/ml明尼苏达沙门氏杆菌脂多糖(LPS-SM)分别刺激RAW264.7细胞,未刺激对照组加入等量Hank’s平衡盐缓冲液(HBSS)。实验同时用0.3 mmol/L诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)抑制剂SMT作为干预。细胞培养18 h后,用Griess法检测各组细胞培养上清液NO2-浓度。将p Ni Fty2-SEAP质粒转染至4组刺激后RAW264.7细胞,培养18 h后,检测培养上清液中可溶性胚胎碱性磷酸酶(SEAP)的吸光度(A620值),倒置显微镜观察细胞内SEAP催化显色情况。结果经ESPs-ex和LPS-SM刺激后,细胞培养上清液中NO2-浓度分别为(14.30±1.62)和(14.10±2.17)μmol/L,均较未刺激对照组[(7.70±0.95)μmol/L]显著增加(P<0.05);加入SMT后,两组NO2-浓度显著下降,分别为(8.97±0.81)和(4.96±1.36)μmol/L(均P<0.05)。经ESPs刺激后,上清液中NO2-浓度为(4.06±0.62)μmol/L,较未刺激对照组显著降低(P<0.05);加入SMT后,NO2-浓度为(3.99±0.87)μmol/L,无明显变化(P>0.05)。ESPs刺激后,上清液SEAP的A620值为0.836±0.005,显著高于未刺激对照组(0.097±0.009)(P<0.05);镜下可见细胞内出现广泛、强烈的蓝色显色反应。ESPs-ex和LPS刺激后,上清液SEAP的A620值分别为0.112±0.004和0.116±0.009,略高于未刺激对照组(P>0.05);镜下见部分细胞内出现蓝色显色反应。结论华支睾吸虫ESPs能够促进RAW264.7细胞活化NF-κB,其水溶性浓缩物可抑制NO产生,ESPs-ex和LPS-SM可促进NO产生。