期刊文献+
共找到17篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
IAV绝对定量PCR构建及其在体外感染巨噬细胞中的实验研究
1
作者 阙婷 蓝利 +6 位作者 张潇剑 袁江浪 孔星星 樊晓晖 张增峰 唐深 罗小玲 《广西医科大学学报》 CAS 2022年第4期637-642,共6页
目的:构建实时荧光定量PCR(RT-qPCR)绝对定量法检测甲型流感病毒(IAV),研究其在检测IAV体外感染巨噬细胞(Mφ)中病毒复制动态变化的应用效能。方法:佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞刺激活化为Mφ,分为Mφ组和Mφ感染组[IAV的感染复数(MOI)为0.... 目的:构建实时荧光定量PCR(RT-qPCR)绝对定量法检测甲型流感病毒(IAV),研究其在检测IAV体外感染巨噬细胞(Mφ)中病毒复制动态变化的应用效能。方法:佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞刺激活化为Mφ,分为Mφ组和Mφ感染组[IAV的感染复数(MOI)为0.1、0.5、1、1.5、2、5、10、15、20,共9个感染剂量组]。构建RT-qPCR绝对定量检测法检测IAV体外感染Mφ模型中细胞内和培养上清病毒核酸拷贝数;CCK-8法检测24 h内不同MOI的流感病毒对Mφ细胞活性的影响,选取10^(5)~10^(6) TCID50的最佳MOI作为感染模型剂量;采用红细胞凝集实验(HA)检测感染模型细胞内和培养上清的病毒生物合成水平。结果:构建RT-qPCR的标准曲线为Y=-3.345X+38.454,具有良好的线性关系,检测下限为10^(2) copies/μL,10倍稀释梯度在10^(3)~10^(8)区分度和重复性良好;与Mφ组相比,随着MOI增加,Mφ活性下降(P<0.05),感染后贴壁Mφ形态出现变圆悬浮、胞质内大量颗粒、胞体模糊和细胞破裂等变化,且MOI越大,病变程度越严重;以105~106TCID50为依据,选取MOI=0.5、1、2、5、10作为Mφ体外感染的剂量;体外感染的细胞内和培养上清病毒核酸浓度随MOI增大而升高;Mφ感染组细胞内病毒标本HA效价均为1∶64,培养上清的HA效价在1∶32~1∶64。结论:构建RT-qPCR绝对定量法成功检测到体外感染Mφ细胞内和培养上清病毒核酸拷贝数呈逐渐增加趋势,并与细胞病变程度呈正相关关系;HA结果无法准确区分病毒复制趋势,RT-qPCR绝对定量法的敏感度和区分度均较HA高。 展开更多
关键词 荧光定量PCR IAV 巨噬细胞 体外模型
下载PDF
胶质瘤中LINC01152的表达及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响 被引量:1
2
作者 李鑫 刘畅 +7 位作者 薛春红 王平 李枫 葛盈盈 农蔚霞 张庆梅 谢小薰 罗彬 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第4期622-629,共8页
目的 探讨长链非编码RNA LINC01152在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法 应用LncSpA V2.0和GEPIA数据库分析LINC01152在胶质瘤中的表达;qRT-PCR检测10例正常脑组织、40例胶质瘤组织和5株胶质瘤细胞系中LINC0115... 目的 探讨长链非编码RNA LINC01152在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法 应用LncSpA V2.0和GEPIA数据库分析LINC01152在胶质瘤中的表达;qRT-PCR检测10例正常脑组织、40例胶质瘤组织和5株胶质瘤细胞系中LINC01152 mRNA的表达。使用DAVID数据库对LINC01152共表达基因进行GO和KEGG富集分析,预测其功能。通过AnnoLnc2、TargetScan、LinkedOmics和miRDB数据库预测并筛选LINC01152相关miRNA和靶基因,构建ceRNA调控网络。利用小干扰RNA在胶质瘤细胞系下调LINC01152表达,通过CCK-8法测试、划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验、流式细胞术、Western blot等检测LINC01152对胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等功能的影响。结果 数据库分析显示,与其他肿瘤类型相比,LINC01152在胶质母细胞瘤(GBM)和低级别胶质瘤(LGG)中高表达,且高于正常脑组织。qRT-PCR结果显示LINC01152 mRNA在胶质瘤组织中的表达显著高于正常脑组织(P<0.01)。LINC01152的表达与Ki-67相关(P<0.05),但与胶质瘤患者的性别、年龄、肿瘤大小、P53蛋白、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)和WHO分级等临床参数无关。共表达基因的功能富集分析表明,LINC01152主要参与细胞黏附和突触信号传导等生物学过程。根据预测的靶基因构建LINC01152-miRNA-mRNA调控网络。LINC01152表达下调后,A172和U87细胞的增殖、迁移、侵袭能力降低(P<0.01),而凋亡细胞数量增加(P<0.001)。结论 LINC01152在胶质瘤中高表达,通过促进胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和抑制凋亡等途径促进胶质瘤的恶性生物学行为。 展开更多
关键词 LncRNA 胶质瘤 恶性生物学行为
下载PDF
黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体的制备和应用 被引量:5
3
作者 贺菽嘉 顾永耀 +5 位作者 肖绍文 张庆梅 陈芳 罗彬 付骏 谢小薰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期104-108,共5页
目的制备兔抗人黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体,鉴定其免疫学特性,并进行初步应用。方法对构建的p MAL-C2/MAGE-D4重组质粒进行原核表达及纯化,获得MBP/MAGE-D4融合蛋白,并以此蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。抗体经蛋白A凝胶... 目的制备兔抗人黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体,鉴定其免疫学特性,并进行初步应用。方法对构建的p MAL-C2/MAGE-D4重组质粒进行原核表达及纯化,获得MBP/MAGE-D4融合蛋白,并以此蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。抗体经蛋白A凝胶柱亲和层析法纯化后,通过SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA、Western blot法检测抗体的效价及特异性;免疫组织化学染色法检测肺癌组织中MAGE-D4的表达及定位。结果获得纯度较高的抗MAGE-D4多克隆抗体,ELISA检测抗体的效价为1∶256 000,Western blot法分析显示MAGE-D4多克隆抗体可特异性识别MAGE-D4重组蛋白,免疫组织化学结果表明,该抗体能识别肺癌组织中的内源性MAGE-D4蛋白,表达的阳性率为69.6%(17/23)。结论制备的MAGE-D4多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度。 展开更多
关键词 黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4) 多克隆抗体 肿瘤相关抗原
下载PDF
人胶质瘤中HIF1A和MAGED4的表达及调控关系初探 被引量:2
4
作者 王平 闭水清 +7 位作者 刘畅 农蔚霞 邹小琼 薛春红 王燕靖 李枫 张庆梅 谢小薰 《中国临床新医学》 2022年第10期945-950,共6页
目的探讨缺氧诱导因子1A(HIF1A)和黑色素瘤相关抗原D4(MAGED4)在人胶质瘤中的表达情况,并分析HIF1A对MAGED4表达的影响。方法通过基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库收集人胶质瘤组织样本数据681例,正常脑组织样本数据207例,比较其MAGED... 目的探讨缺氧诱导因子1A(HIF1A)和黑色素瘤相关抗原D4(MAGED4)在人胶质瘤中的表达情况,并分析HIF1A对MAGED4表达的影响。方法通过基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库收集人胶质瘤组织样本数据681例,正常脑组织样本数据207例,比较其MAGED4 mRNA和HIF1A mRNA表达水平。通过中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中下载693例胶质瘤患者的mRNA-seq_693数据集及相应的临床信息,分析MAGED4 mRNA和HIF1A mRNA表达的相关性,以及二者与患者临床特征指标的关联性。应用氯化钴模拟体外缺氧环境,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印记(WB)实验探讨沉默胶质瘤细胞HIF1A表达对MAGED4表达变化的影响。结果基于GEPIA数据库的分析结果显示,低级别胶质瘤(LGG)和胶质母细胞瘤(GBM)组织的HIF1A mRNA和MAGED4 mRNA水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05)。基于CGGA数据库的分析结果显示,MAGED4 mRNA表达水平与HIF1A mRNA表达水平呈正相关(r=0.322,P=0.000)。MAGED4 mRNA高表达组年龄<40岁、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变型的人数比例大于MAGED4 mRNA低表达组,差异有统计学意义(P<0.05),两组性别、肿瘤类型、世界卫生组织(WHO)肿瘤分级,O6-甲基鸟瞟-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化状态、1p/19q共缺失情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。将HIF1A siRNA转染至U87-MG和U251细胞,并在缺氧条件下培养48 h,RT-qPCR和WB实验结果显示,HIF1A下调后,MAGED4的表达水平也显著下降。结论HIF1A和MAGED4均高表达于胶质瘤,且两者呈正相关。胶质瘤细胞中HIF1A可调控MAGED4的表达。 展开更多
关键词 胶质瘤 缺氧诱导因子1A 黑色素瘤相关抗原D4 氯化钴
下载PDF
在NF2中Merlin蛋白与Hippo信号通路的相互作用 被引量:3
5
作者 龚范勇 李希圣 +1 位作者 张庆梅 肖绍文 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第12期1927-1930,共4页
多发性神经纤维瘤病(neurofibromatosis,NF),根据其临床及遗传学特征分为1型和2型。1930年,Gardner和Frazier证实神经纤维瘤病Ⅱ型(neurofibro—matosis type2,NF2)为常染色体显性遗传性疾病,临床上通常把NF2分为Wishart型和Ga... 多发性神经纤维瘤病(neurofibromatosis,NF),根据其临床及遗传学特征分为1型和2型。1930年,Gardner和Frazier证实神经纤维瘤病Ⅱ型(neurofibro—matosis type2,NF2)为常染色体显性遗传性疾病,临床上通常把NF2分为Wishart型和Gardner型2个亚型。 展开更多
关键词 MERLIN蛋白 NF2 相互作用 信号通路 常染色体显性遗传性疾病 多发性神经纤维瘤病 神经纤维瘤病Ⅱ型 遗传学特征
下载PDF
绿原酸抑制糖酵解及脂肪酸代谢调控M1型巨噬细胞极化 被引量:9
6
作者 蓝春花 孟玲 +6 位作者 陈成英 蓝利 王新航 常升搏小吉 陆彩玲 李习艺 唐深 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第20期2440-2444,共5页
目的:探讨绿原酸对脂多糖(LPS)和干扰素γ(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞炎症反应的调控,并初步探索糖酵解及脂肪酸代谢在其中的作用机制。方法:THP-1细胞经佛波酯(PMA)处理24 h极化为M0型巨噬细胞;M1型极化组:经10 ng/ml LPS和20 ng/ml I... 目的:探讨绿原酸对脂多糖(LPS)和干扰素γ(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞炎症反应的调控,并初步探索糖酵解及脂肪酸代谢在其中的作用机制。方法:THP-1细胞经佛波酯(PMA)处理24 h极化为M0型巨噬细胞;M1型极化组:经10 ng/ml LPS和20 ng/ml IFN-γ刺激48 h,M0型巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞;绿原酸处理组:M1型巨噬细胞极化诱导开始时,分别加入50μg/ml、100μg/ml绿原酸培养48 h。倒置显微镜观察细胞形态的变化,实时荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞极化和脂肪酸合成的相关基因:IL-6、TNF-α、环加氧酶2(COX-2)、CXC趋化因子配体-10(CXCL-10)、固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)、氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)的mRNA表达水平;微量法试剂盒检测糖酵解相关酶——己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:M0极化为M1时,细胞伪足增多,呈梭形或不规则形,M1型极化相关基因IL-6、TNF-α、COX-2、CXCL-10和脂肪酸合成相关基因PPAR-γ、SREBP-1 mRNA表达水平明显升高,HK、PK、LDH活性增加;50μg/ml绿原酸处理组梭形细胞和伪足明显减少,其极化相关基因IL-6、TNF-α、COX-2、CXCL-10和脂肪酸合成相关基因PPAR-γ、SREBP-1的mRNA水平明显降低,HK、PK、LDH的活性下降,100μg/ml绿原酸处理较50μg/ml作用更强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:绿原酸可能通过抑制巨噬细胞糖酵解和脂肪酸代谢途径,下调M1型巨噬细胞极化相关标志物的表达,调控M1型巨噬细胞炎症极化。 展开更多
关键词 绿原酸 M1型巨噬细胞 糖酵解 脂肪酸代谢 极化
下载PDF
人脑胶质瘤中OIP5和CTCFL的表达及临床意义 被引量:2
7
作者 石蕾 张庆梅 +6 位作者 付骏 罗彬 彭亚 陈芳 李希圣 肖绍文 谢小薰 《中国癌症防治杂志》 CAS 2016年第2期88-91,共4页
目的检测癌-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)OIP5和CTCFL mRNA在人脑胶质瘤(以下简称胶质瘤)中的表达,探讨OIP5和CTCFL作为胶质瘤免疫治疗靶抗原的可能性。方法用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reac... 目的检测癌-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)OIP5和CTCFL mRNA在人脑胶质瘤(以下简称胶质瘤)中的表达,探讨OIP5和CTCFL作为胶质瘤免疫治疗靶抗原的可能性。方法用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,检测92例胶质瘤组织中OIP5和CTCFL mRNA的表达水平;分析其表达与胶质瘤患者临床病理特征的相关性。结果在92例胶质瘤组织中,OIP5和CTCFL mRNA的阳性表达率分别为18.47%(17/92)和20.65%(19/92);DNA测序结果证实RT-PCR产物为OIP5和CTCFL基因c DNA的扩增片段。OIP5和CTCFL mRNA的表达与胶质瘤患者的性别、年龄、病理分级、组织学类型和卡氏评分等临床指标均无关(P>0.05)。结论OIP5和CTCFL mRNA在胶质瘤组织中的阳性表达率不高,能否作为胶质瘤免疫治疗的新靶点有待进一步评估。 展开更多
关键词 胶质瘤 癌-睾丸抗原 OIP5 CTCFL 肿瘤免疫治疗
下载PDF
2-DG抑制糖酵解和线粒体自噬调控M1型巨噬细胞极化 被引量:6
8
作者 蓝春花 陈成英 +7 位作者 蓝利 王新航 常升搏小吉 袁江浪 孔星星 陆彩玲 李习艺 唐深 《广西医科大学学报》 CAS 2021年第4期704-709,共6页
目的:研究2-脱氧-d-葡萄糖(2-DG)对M1型巨噬细胞炎症极化的调控作用,初步探索糖酵解及线粒体自噬在其中的作用机制。方法:将THP-1细胞分为3组:M0组[100 nmol/L佛波酯(PMA)刺激48 h极化为M0型]、M1组(M0组基础上用10 ng/mL LPS和20 ng/mL... 目的:研究2-脱氧-d-葡萄糖(2-DG)对M1型巨噬细胞炎症极化的调控作用,初步探索糖酵解及线粒体自噬在其中的作用机制。方法:将THP-1细胞分为3组:M0组[100 nmol/L佛波酯(PMA)刺激48 h极化为M0型]、M1组(M0组基础上用10 ng/mL LPS和20 ng/mL IFN-γ共刺激48 h诱导极化为M1型)、M1+2-DG组(M1组基础上加入10 mmol/L 2-DG)。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测M1型巨噬细胞极化相关基因肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6、CXC趋化因子配体-10(CXCL-10)、环加氧酶(COX)-2mRNA表达水平,微量法酶活性试剂盒检测糖酵解限速酶己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。Western blotting法检测Beclin-1、PTEN诱导激酶1(PINK1)表达水平。并比较3组溶酶体、线粒体荧光信号强度及细胞内活性氧(ROS)含量。结果:与M0组比较,M1组TNF-α、IL-6、CXCL-10、COX-2mRNA表达水平明显升高,HK、PK和LDH活性增加,溶酶体荧光信号增强,线粒体荧光信号降低,细胞内ROS升高,线粒体自噬相关蛋白Beclin-1、PINK1表达升高(均P<0.05)。与M1组比较,M1+2-DG组TNF-α、IL-6、CXCL-10、COX-2mRNA水平明显降低,HK、PK和LDH活性下降,溶酶体荧光信号降低,线粒体荧光信号增强,细胞内ROS降低,Beclin-1、PINK1蛋白表达降低(P<0.05)。结论:2-DG可能通过抑制M1型巨噬细胞糖酵解和ROS产生,降低细胞线粒体自噬水平,下调M1型巨噬细胞极化相关标志物的表达,负调控M1型巨噬细胞炎症极化。 展开更多
关键词 2-DG M1型巨噬细胞 糖酵解 线粒体自噬 极化
下载PDF
4-辛基衣康酸抑制糖酵解调控M2型巨噬细胞极化 被引量:1
9
作者 陈成英 蓝利 +7 位作者 袁江浪 孔星星 王新航 刘彧冰 李菡 陆彩玲 李习艺 唐深 《广西医科大学学报》 CAS 2022年第4期577-582,共6页
目的:研究4-辛基衣康酸(4OI)对M2型巨噬细胞(Mφ)极化的干预作用,初步探讨糖酵解及脂肪酸氧化在其中的作用机制。方法:将Mφ分为M0组(100 nmol/L佛波酯刺激48 h诱导为M0型)、M2组[M0组基础上用20 ng/mL白细胞介素4(IL-4)刺激48 h诱导为M... 目的:研究4-辛基衣康酸(4OI)对M2型巨噬细胞(Mφ)极化的干预作用,初步探讨糖酵解及脂肪酸氧化在其中的作用机制。方法:将Mφ分为M0组(100 nmol/L佛波酯刺激48 h诱导为M0型)、M2组[M0组基础上用20 ng/mL白细胞介素4(IL-4)刺激48 h诱导为M2型]、M2+4OI-L组(M2组基础上用100μmol/L 4OI处理12 h)、M2+4OI-H组(M2组基础上用200μmol/L 4OI处理12 h)。实时荧光定量PCR检测M2型Mφ极化相关标志物白细胞介素10(IL-10)、甘露糖受体(MRC-1)、细胞趋化因子(CCL-22)、DC特异性细胞间黏附分子3结合非整合素(CD209)、细胞因子信号抑制物(SOCS1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、脂肪酸氧化限速酶碱棕榈酰基转移酶-1α(CPT-1α)的mRNA表达水平;微量法酶活性试剂盒检测糖酵解限速酶己糖激酶(HK)和丙酮酸激酶(PK)活性,刃天青法检测细胞内呼吸链代谢酶活性。结果:M0极化为M2时,与M0组比较,伪足伸出细胞和梭形细胞占比和M2型极化相关标志物CCL-22、IL-10、MRC-1、CD209、SOCS1和PPAR-γmRNA表达水平上升(P<0.01);HK和PK活性升高(P<0.05);CPT-1αmRNA水平和线粒体呼吸链代谢酶活性升高(P<0.01)。4OI干预后,与M2组比较,伪足伸出细胞和梭形细胞占比和M2型极化相关标志物CCL-22、IL-10、MRC-1、CD209、SOCS1和PPAR-γmRNA表达水平下降(P<0.05);HK和PK活性降低(P<0.05);CPT-1αmRNA水平进一步升高(P<0.01);线粒体呼吸链代谢酶活性无明显变化。结论:4OI可能通过抑制M2型Mφ糖酵解降低M2型Mφ极化相关标志物的表达,通过进一步促进脂肪酸氧化水平,维持M2细胞内线粒体呼吸链代谢酶活性和细胞氧化磷酸化稳定。 展开更多
关键词 4-辛基衣康酸 M2型巨噬细胞 糖酵解 代谢
下载PDF
胶质瘤中hsa_circ_0021350的表达情况及临床意义研究 被引量:2
10
作者 邹小琼 薛春红 +9 位作者 王平 王燕靖 李鑫 刘畅 农蔚霞 李枫 陈芳 张庆梅 罗彬 谢小薰 《中国临床新医学》 2022年第12期1135-1139,共5页
目的探讨hsa_circ_0021350在胶质瘤中的表达及临床意义,初步评价其应用于胶质瘤诊断和治疗的潜力。方法选择2016年1月至2022年5月在广西医科大学第一附属医院神经外科经手术获取的胶质瘤组织标本40例(高级别胶质瘤22例,低级别胶质瘤18... 目的探讨hsa_circ_0021350在胶质瘤中的表达及临床意义,初步评价其应用于胶质瘤诊断和治疗的潜力。方法选择2016年1月至2022年5月在广西医科大学第一附属医院神经外科经手术获取的胶质瘤组织标本40例(高级别胶质瘤22例,低级别胶质瘤18例),正常脑组织标本10例。通过RNase R消化联合逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证hsa_circ_0021350的环状特性。通过TA克隆测序法鉴定实时荧光定量PCR(qRT-PCR)扩增产物。比较高级别胶质瘤、低级别胶质瘤和正常脑组织hsa_circ_0021350的表达水平。分析hsa_circ_0021350表达与胶质瘤患者临床病理指标的关联性。结果该研究所设计的发散引物可有效特异扩增hsa_circ_0021350。经验证,hsa_circ_0021350呈环状,且能耐受RNase R消化。qRT-PCR实验结果显示,高级别胶质瘤和低级别胶质瘤hsa_circ_0021350的表达水平均高于正常脑组织,且高级别胶质瘤hsa_circ_0021350的表达水平较低级别胶质瘤更高,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa_circ_0021350的表达与胶质瘤分级和ki67阳性率具有显著关联性(P<0.05)。结论hsa_circ_0021350在胶质瘤,尤其是高级别胶质瘤中呈高表达,且与肿瘤增殖因子ki67相关,是胶质瘤诊断和治疗的潜在分子靶点。 展开更多
关键词 环状RNA Hsa_circ_0021350 胶质瘤 分子靶点
下载PDF
绿原酸干预HepG2肝癌细胞诱导肿瘤相关巨噬细胞极化的体外研究 被引量:1
11
作者 张潇剑 蓝利 +4 位作者 阙婷 唐立博 杨子叶 唐深 罗小玲 《广西医科大学学报》 CAS 2022年第4期552-556,共5页
目的:研究绿原酸(CGA)对人肝癌细胞HepG2诱导的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化的影响。方法:人单核巨噬细胞THP-1经100 mmol/L佛波酯(PMA)刺激48 h诱导分化为M0巨噬细胞,与HepG2细胞共培养,并用不同浓度CGA干预。倒置显微镜下观察细胞形态... 目的:研究绿原酸(CGA)对人肝癌细胞HepG2诱导的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化的影响。方法:人单核巨噬细胞THP-1经100 mmol/L佛波酯(PMA)刺激48 h诱导分化为M0巨噬细胞,与HepG2细胞共培养,并用不同浓度CGA干预。倒置显微镜下观察细胞形态学变化,CCK-8法检测细胞活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测TAM相关标志物CD206、白细胞介素(IL)-10、IL-6和环氧化合酶2(COX-2)mRNA表达水平。结果:与HepG2共培养后贴壁M0巨噬细胞形态由扁平圆形转变为不规则圆形,并有伪足伸出和梭形细胞形成,共培养48 h时细胞活性最高(P<0.05)。CGA处理48 h后,在25~100μg/mL浓度范围内随着CGA浓度增加,TAM细胞活性增高(P<0.05)。50μg/mL、100μg/mL CGA处理TAM 48 h后,不规则圆形带伪足细胞和梭形细胞数量增多,M1型巨噬细胞相关标志物IL-6、COX-2表达上调,M2型巨噬细胞相关标志物IL-10、CD163表达下调(P<0.05),且100μg/mL CGA较50μg/mL干预作用更明显。结论:HepG2肝癌细胞能诱导巨噬细胞极化为M2样TAM,CGA干预后TAM向M1样极化转变。 展开更多
关键词 绿原酸 肿瘤相关巨噬细胞 HEPG2肝癌细胞 极化
下载PDF
白脂素包涵体表达纯化及其功能评价
12
作者 韦雪静 敖青青 +5 位作者 孟玲 徐怡璐 陆彩玲 唐深 王新航 李习艺 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期67-72,共6页
目的构建白脂素的原核表达质粒,表达及纯化重组白脂素蛋白,并初步探索其功能,为进一步研究白脂素作用机制及其生理病理作用提供依据。方法利用基因工程技术构建表达白脂素BL21菌株,经异丙基硫代半乳糖苷诱导,梯度尿素复性,亲和层析纯化... 目的构建白脂素的原核表达质粒,表达及纯化重组白脂素蛋白,并初步探索其功能,为进一步研究白脂素作用机制及其生理病理作用提供依据。方法利用基因工程技术构建表达白脂素BL21菌株,经异丙基硫代半乳糖苷诱导,梯度尿素复性,亲和层析纯化及去内毒素处理得到可用于细胞和动物实验的重组白脂素。采用血糖仪检测重组白脂素腹腔注射后C57小鼠血糖变化情况。Alamar Blue检测重组白脂素作用24 h对MIHA细胞活性的影响;重组白脂素刺激MIHA细胞24 h,用蒽酮法检测糖原含量。结果在37℃,A600 nm=0.8,IPTG终浓度为1 mmol/L诱导4 h目的蛋白表达效果较好。通过纯化和去内毒素处理,重组白脂素纯度大于95%,内毒素含量小于1 EU/mg,可以用于动物与细胞实验。腹腔注射重组白脂素60 min后C57小鼠血糖升高至峰值(重组白脂素组vs对照组P=0.021),120 min恢复到正常水平(重组白脂素组vs对照组P=0.03)。重组白脂素刺激MIHA细胞24 h,对细胞活性没有影响;检测糖原发现,不同浓度白脂素组糖原与对照组比较差异有统计学意义(P1=0.013,P2=0.036,P3=0.011)。结论通过原核表达系统成功表达及纯化了白脂素蛋白,该方法纯化后的白脂素具有降低MIHA细胞糖原含量及升高小鼠血糖的作用,这为白脂素功能的进一步研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 原核表达与纯化 包涵体 白脂素 糖原分解 血糖
下载PDF
实时荧光定量PCR检测人脑胶质瘤、髓母细胞瘤中SAMD 14的表达
13
作者 龚范勇 葛盈盈 肖绍文 《微创医学》 2017年第2期162-165,186,共5页
目的分析人胶质瘤和髓母细胞瘤中SAMD 14 mRNA的表达情况及其与临床参数间的关系。方法使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测10例正常人脑组织、24例胶质瘤患者和11例髓母细胞瘤患者肿瘤组织中SAMD 14 mRNA的相对表达量,分析其表达与患者... 目的分析人胶质瘤和髓母细胞瘤中SAMD 14 mRNA的表达情况及其与临床参数间的关系。方法使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测10例正常人脑组织、24例胶质瘤患者和11例髓母细胞瘤患者肿瘤组织中SAMD 14 mRNA的相对表达量,分析其表达与患者临床病理学特征的关系。结果胶质瘤、髓母细胞瘤组织中SAMD 14 mRNA的表达水平低于正常脑组织,胶质瘤中SAMD14 mRNA的表达水平高于髓母细胞瘤组织(P<0.05)。SAMD 14 mRNA相对表达量与性别、年龄、肿瘤直径和KPS评分等因素无关(P>0.05)。结论 SAMD 14 mRNA的低表达可能与胶质瘤和髓母细胞瘤的发生、发展有关。 展开更多
关键词 胶质瘤 髓母细胞瘤 SAMD 14 荧光定量PCR
下载PDF
健康宿主马尔尼菲青霉病肺部受累三例报告并文献复习 被引量:14
14
作者 戴小英 陈欢 +7 位作者 李梅华 张建全 白晶 邓静敏 柳广南 钟小宁 蓝秀万 何志义 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期12-16,共5页
目的探讨健康宿主感染马尔尼菲青霉菌的临床特征及临床诊治。方法回顾分析3例主要累及肺部、支气管及胸膜的健康宿主感染马尔尼菲青霉菌的病例报告,并以"马尔尼菲青霉病"为关键词检索国内外相关文献,筛选出健康宿主感染的病... 目的探讨健康宿主感染马尔尼菲青霉菌的临床特征及临床诊治。方法回顾分析3例主要累及肺部、支气管及胸膜的健康宿主感染马尔尼菲青霉菌的病例报告,并以"马尔尼菲青霉病"为关键词检索国内外相关文献,筛选出健康宿主感染的病例进行文献复习。结果 3例健康宿主患者均以发热、咳嗽、淋巴结肿大、白细胞升高为主要临床表现,胸部影像学检查表明肺部均有累及。病例2纤维支气管镜下可见多个息肉样结节,病例3胸腔镜下可见脏壁层胸膜有较多粘连带和多个白色小结节。3例患者均培养出马尔尼菲青霉菌而确诊,抗真菌治疗有效但治疗时间长未能停药。36例相关健康宿主感染马尔尼菲青霉菌的文献报告中,临床症状以发热、咳嗽/咳痰、皮疹/皮肤脓肿以及白细胞升高最为常见,胸部影像学以肺部炎性浸润常见,治疗上以使用两性霉素B单用或者联合伊曲康唑最为常见,高达47.22%误诊为结核。结论健康宿主感染马尔尼菲青霉菌肺部表现为多样性,易误诊为结核病,治疗较其他真菌感染需要更长时间。 展开更多
关键词 马尔尼菲青霉病 健康宿主 临床特征 临床诊治
原文传递
基于转录组测序的马尔尼菲青霉菌实时荧光定量PCR内参基因筛选与鉴定 被引量:4
15
作者 陶玉婷 卢姗 +6 位作者 王超 王俊杰 康雪晴 蓝秀万 梁晓乐 梁莹 何志义 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1042-1048,共7页
马尔尼菲青霉菌是一种温度依赖性双相型条件致病真菌,可感染免疫缺陷人群,区域流行于东南亚地和我国南方,但其双相转换和致病性分子机制尚不清楚。实时荧光定量PCR是马尔尼菲青霉菌双相转换和致病性分子机制研究的重要手段,但仍缺乏用... 马尔尼菲青霉菌是一种温度依赖性双相型条件致病真菌,可感染免疫缺陷人群,区域流行于东南亚地和我国南方,但其双相转换和致病性分子机制尚不清楚。实时荧光定量PCR是马尔尼菲青霉菌双相转换和致病性分子机制研究的重要手段,但仍缺乏用于马尔尼菲青霉菌实时荧光定量PCR标准化分析理想的内参基因。本研究根据转录组测序数据筛选了四个表达最稳定的Pfp、Rp123、FacpA、DigA基因与传统的内参基因18Sr RNA、β-actin(Act1)、β-tubulin(Btu)作为候选内参基因,用Best Keeper和ge Norm软件进行基因表达稳定性分析。结果表明FacpA和DigA基因在马尔尼菲青霉菌双相转换过程中表达最为稳定,可作为用于马尔尼菲青霉菌实时荧光定量PCR标准化分析的内参基因。 展开更多
关键词 马尔尼菲青霉菌 内参基因 实时荧光定量PCR DigA基因 FacpA基因
原文传递
锰铅镉复合暴露对人神经母细胞瘤细胞的毒性作用 被引量:2
16
作者 徐怡璐 吴彬 +8 位作者 石倩倩 韦兰成 敖青青 孟玲 韦雪静 李习艺 唐深 王新航 陆彩玲 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2019年第8期679-684,共6页
目的探索重金属复合暴露对人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞的毒性效应。方法将SK-N-SH细胞分别暴露于空白培养基(对照)和氯化锰(125、250、500、750、1000、1500、2000、4000、6000μmol/L),乙酸铅(500、750、1000、1500、2000、2500、3000... 目的探索重金属复合暴露对人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞的毒性效应。方法将SK-N-SH细胞分别暴露于空白培养基(对照)和氯化锰(125、250、500、750、1000、1500、2000、4000、6000μmol/L),乙酸铅(500、750、1000、1500、2000、2500、3000μmol/L),氯化镉(5、10、15、20、30、40、60、80μmol/L)单一及二元、三元复合溶液24、48、96 h后,检测细胞存活率,计算锰、铅、镉的药物抑制浓度(IC)。其中,二元、三元复合溶液的浓度均为相应金属IC10、IC20、IC30、IC50的等毒效应比混合,分别用毒性单位法、混合毒性指数法对毒性效应进行评价。结果与对照组相比,不同浓度锰、铅、镉单独染毒不同时间SK-N-SH细胞的存活率均较低,除500μmol/L铅染毒24、96 h组和5μmol/L镉染毒24、48 h组外,差异均有统计学意义(P<0.05);随着锰、铅、镉单独染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SK-N-SH细胞的存活率均呈下降趋势。三种金属对SK-N-SH的细胞急性毒性依次为镉(IC50:38.728μmol/L)>锰(IC50:442.739μmol/L)>铅(IC50:1624.850μmol/L)。同一金属不同染毒时间的IC50排序均为96 h<48 h<24 h。锰和镉复合暴露对SK-N-SH细胞的联合毒性在24 h均表现为拮抗作用,在48 h均表现为协同作用;96 h在毒效应为IC10、IC20时均表现为部分相加作用,在IC30、IC50时均表现为协同作用。镉和铅对SK-N-SH细胞的联合毒性在24 h毒效应为IC10、IC20、IC30时均表现为拮抗作用,在IC50时表现为部分相加作用;在48 h毒效应为IC10时表现为拮抗作用,在IC20、IC30、IC50时均表现为部分相加作用;在96 h时均表现为部分相加作用。铅和锰对SK-N-SH细胞的联合毒性在24、96 h毒效应为IC50时分别表现为简单相加、协同作用,其余均表现为部分相加作用。锰、铅、镉对SK-N-SH细胞的联合作用在24、96 h时均表现为部分相加作用;48 h时在IC10、IC20、IC30均表现为协同作用,在IC50时表现为部分相加作用。结论三种金属对SK-N-SH细胞的毒性均表现为随暴露时间的延长而增强的趋势。金属复合暴露呈现复杂的毒性效应,毒性效应与特定的金属组合、暴露时间、暴露浓度密切相关。 展开更多
关键词 联合毒性效应 神经毒性 SK-N-SH细胞
原文传递
体外牛磺酸抑制糖酵解调控M1型巨噬细胞极化 被引量:1
17
作者 孟玲 蓝春花 +3 位作者 蓝利 陆彩玲 李习艺 唐深 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期40-44,共5页
目的研究牛磺酸调控M1型巨噬细胞极化的分子机制。方法人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞经100 nmol/L佛波酯处理24h后诱导分化为M0型巨噬细胞;M1型极化组—M0型巨噬细胞经10 ng/ml脂多糖和20 ng/ml干扰素γ刺激48h诱导极化为M1型巨... 目的研究牛磺酸调控M1型巨噬细胞极化的分子机制。方法人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞经100 nmol/L佛波酯处理24h后诱导分化为M0型巨噬细胞;M1型极化组—M0型巨噬细胞经10 ng/ml脂多糖和20 ng/ml干扰素γ刺激48h诱导极化为M1型巨噬细胞;牛磺酸处理组—在M1型极化组的基础上,分别加入的牛磺酸与脂多糖、干扰素γ共培养48h。实时荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞极化相关标志物:肿瘤坏死因子α(TNF-α)、环加氧酶2(COX-2)、CXC趋化因子配体-10(CXCL-10)和白细胞介素6(IL-6)的mRNA表达水平;微量法试剂盒分别检测糖酵解相关酶—己糖激酶(HK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;用刃天青检测细胞内线粒体呼吸链代谢酶活性。结果M1型极化组:M1型极化相关标志物COX-2、TNF-α、IL-6和CXCL-10的mRNA水平明显升高,己糖激酶(HK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性均增加,线粒体呼吸链代谢酶活性降低;牛磺酸处理组:M1型巨噬细胞极化相关标志物COX-2、TNF-α、IL-6和CXCL-10的mRNA水平明显降低,己糖激酶(HK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低,线粒体呼吸链代谢酶活性增加。结论牛磺酸可能通过降低糖酵解水平,提高线粒体呼吸链代谢酶活性,抑制M1型巨噬细胞极化相关标志物的表达,调控巨噬细胞M1极化。 展开更多
关键词 牛磺酸 M1型巨噬细胞 极化 糖酵解 代谢 体外
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部