过表达核凋亡诱导因子1增强鼻咽癌细胞放射敏感性

目的探究核凋亡诱导因子1(nuclear apoptosis-inducing factor 1,NAIF1)对鼻咽癌细胞CNE-2R放射敏感性的影响。方法采用Western blot检测NAIF1在鼻咽癌细胞CNE-2和CNE-2R的表达水平。通过慢病毒感染技术将NAIF1过表达慢病毒(LV-NAIF1组)及其阴性对照慢病毒(LV-NC组)分别感染CNE-2R细胞,采用RT-qPCR和Western blot检测NAIF1的mRNA和蛋白表达水平;采用CCK-8、克隆形成实验分别检测各组细胞在不同照射剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射下的增殖能力、克隆形成能力并计算相应的存活分数,采用流式细胞术实验检测各组细胞6 Gy照射前后的细胞周期分布情况。结果与CNE-2细胞相比,NAIF1在CNE-2R细胞中的蛋白表达水平显著降低(P<0.001)。与LV-NC组相比,LV-NAIF1组CNE-2R细胞中NAIF1的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.001)。经不同剂量照射后,与LV-NC组相比,过表达NAIF1可以抑制CNE-2R细胞的增殖能力(均P<0.05),降低CNE-2R细胞的克隆形成数和存活分数(P<0.05)。经6 Gy照射后,与LV-NC组相比,过表达NAIF1可使更多的CNE-2R细胞滞留在G2/M期(P<0.01)。结论NAIF1在鼻咽癌细胞CNE-2R中低表达,过表达NAIF1可能通过抑制细胞增殖并将细胞周期阻滞在G2/M期,从而增强鼻咽癌细胞CNE-2R的放射敏感性。

LGR4对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的 探讨富含亮氨酸重复G蛋白偶联受体-4(leucine-rich repeats containing G protein-coupled receptor 4,LGR4对鼻咽癌C666-1细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法 利用韦恩图将GEO数据库测序数据GSE15903、GSE89804和GSE103611三组数据取交集得出差异基因。通过生物信息学分析LGR4在鼻咽癌组织及正常鼻咽上皮组织、鼻咽癌治疗后的转移或未转移组织中的表达,RT-qPCR和Western blot检测LGR4在鼻咽癌C666-1细胞和正常鼻咽上皮细胞NP69中的表达水平。将鼻咽癌C666-1细胞进行慢病毒感染分为NC组(转染阴性对照)、KD1组和KD2组(敲低组),采用Western blot测定LGR4和上皮表型E-cadherin的表达,采用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验及Transwell实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移。结果 韦恩图显示GSE89804、GSE15903和GSE103611数据集的差异基因是LGR4。GSE12452数据分析结果显示,与正常鼻咽上皮组织相比,LGR4在鼻咽癌组织中表达上调(P<0.05)。GSE103611数据分析结果显示,与鼻咽癌治疗后未转移组织相比,LGR4在鼻咽癌治疗后转移组织中表达上调(P<0.05)。与NP69细胞相比,LGR4在鼻咽癌C666-1细胞中的mRNA和蛋白表达水平均显著上调(均P<0.001)。与NC组相比,敲低LGR4可抑制鼻咽癌C666-1细胞增殖(均P<0.05)、侵袭及迁移能力(均P<0.001),促进凋亡和C666-1细胞中E-cadherin的表达(均P<0.001)。结论 LGR4在鼻咽癌C666-1细胞中表达上调,敲低LGR4抑制C666-1细胞的增殖、侵袭迁移,促进凋亡和上皮间质转化。

miR-6732-3p对鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R放射敏感性的影响

目的探讨miR-6732-3p表达对人鼻咽癌CNE-2R细胞放射敏感性的影响。方法采用RT-qPCR检测miR-6732-3p在CNE-2和CNE-2R细胞株中的表达。用miR-6732-3p慢病毒转染CNE-2R细胞后,将CNE-2R细胞分为三组,分别为CNE-2R组(正常对照组)、miR-6732-3p NC组(转染对照组)、miR-6732-3p inhibition组(转染组)。RT-qPCR检测各组细胞中miR-6732-3p的表达,CCK-8、流式细胞术和克隆形成实验分别检测转染前后的细胞增殖、凋亡能力及放射敏感性。结果RT-qPCR检测结果显示,miR-6732-3p在CNE-2R细胞中的表达量明显高于CNE-2细胞(P=0.036)。采用慢病毒转染CNE-2R细胞后,转染组细胞miR-6732-3p的表达量均较转染对照组和正常对照组低(P<0.05)。CCK-8法检测结果显示,与两个对照组相比,转染组细胞生长受抑制(P<0.001);在不同照射剂量下,转染组细胞的存活分数均明显降低(P<0.001)。流式细胞仪检测结果显示,未经照射(0 Gy)和接受8 Gy照射后转染组细胞凋亡率均较转染对照组及正常对照组明显升高(P<0.05)。克隆形成实验结果显示,转染组的放射生物学参数D0、Dq、SF2值均低于两个对照组(P<0.05);在不同照射剂量下,转染组细胞存活分数亦低于两个对照组(P<0.001)。结论沉默miR-6732-3p可提高鼻咽癌CNE-2R细胞的放射敏感性,为鼻咽癌放射抗拒的分子靶向治疗提供新思路。