反相高效液相色谱法检测牛初乳乳铁蛋白的方法研究

为了建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定牛初乳乳铁蛋白的含量,采用Kromasil C4色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-水-三氟乙酸(80:20:0.1)流速0.6 mL/min;检测波长:220 nm;柱温:25℃。乳铁蛋白的检测线性范围为0.025-1 mg/mL,回归方程为Y=734105X-8035.9,相关系数r=0.999,平均回收率为99.58%,相对标准偏差为1.3%。此方法操作方便、快捷、精密度好、结果准确可靠、重复性好。

抗红花花粉蛋白单克隆抗体的研制

目的:研究红花中过敏原性物质的检测和评价方法,为筛查红花制剂过敏原残留、优化红花制剂工艺、预防红花制剂过敏反应的发生提供新的研究思路和方法。方法:以水煮醇沉法提取红花花粉蛋白,用花粉蛋白免疫小鼠,筛选特异性细胞克隆,扩增、纯化制备抗红花蛋白单克隆抗体。采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)方法检测单克隆抗体对红花抗原的特异性识别情况。结果:3株单克隆抗体均能特异性识别红花抗原。结论:抗红花蛋白单克隆抗体对研究红花过敏反应的发生机理、优化红花制剂工艺及降低过敏反应发生具有重要意义。

一种由大体积恶性胸腔积液中分离肿瘤细胞的方法初探

背景与目的恶性胸腔积液(malignant plural effusion,MPE)是液体活检基因检测的常用标本来源,本研究评估一种从大体积MPE中分离肿瘤细胞方法的分离效果及其在基因检测中的应用前景。方法收集20例伴MPE的晚期肺癌患者一次胸腔积液引流的全部MPE(>500 mL),联合运用细胞分离介质Percoll和Ficoll分离肿瘤细胞,统计分离情况。对其中既往行组织基因检测的肺腺癌患者,分别使用胸腔积液上清游离DNA(tumor derived DNA from pleural effusion supernatant,etDNA),总细胞DNA及分离肿瘤细胞DNA(DNA from tumor cells in pleural effusion,ETC-DNA)3种成分进行二代基因测序,比较检测情况。结果从MPE中分离得到细胞中位数量8.50×104个(上下四分位间距9.25×103-3.75×105),肿瘤细胞纯度85.50%±5.80%。对10例既往行组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因检测的患者,etDNA、总细胞DNA及ETC-DNA EGFR基因突变检出率分别为70.00%、50.00%、70.00%。ETC-DNA基因检测阳性率与组织(P>0.999,kappa=1.000)和etDNA(P>0.999,kappa=1.000)一致性均良好。etDNA、总细胞DNA、ETC-DNAEGFR基因突变中位丰度分别为16.05%(4.78%-43.06%)、1.09%(0.00%-2.39%)和33.02%(18.50%-76.70%)。ETC-DNA检测丰度倾向高于etDNA,但差异无统计学意义。结论该提取方法可以有效地从大体积MPE中分离出大量高纯度肿瘤细胞,利用提取出的肿瘤细胞进行基因检测可能可以提高基因检测效能,值得进一步研究。

不同保存温度及高温灭活处理对RNA病毒保存效果的影响

目的:探究不同保存温度及高温灭活处理对在常用的RNA病毒样本保存液中保存效果的影响。方法:以禽IBV冠状病毒(弱毒株)作为模型,采用等渗盐溶液Hank’s液、胍盐保存液和市售商品化CWY076保存液保存禽IBV冠状病毒时,比较高温灭活过程对病毒核酸完整性和后续荧光定量PCR核酸检测的影响。结果:保存在常用Hank’s液中的样本,经60℃灭活30 min后采用荧光定量PCR检测循环阈值(Ct值)显著增加(P<0.05),且病毒检测灵敏度仅达到病毒原液的10-6稀释梯度;而保存在自配胍盐保存液中的样本在-80℃和4℃下保存7 d,60℃灭活30 min后,病毒检出率与检测灵敏度则无明显影响;但在37℃保存7 d后,检测灵敏度降为10-6稀释梯度;保存在商品化CWY076保存液(康为世纪产品)中的样本,在-80℃、4℃和37℃下保存7 d后,以及60℃灭活30 min,对病毒检出率与灵敏度均无明显影响,在10-7稀释梯度的检出率仍为91.70%。结论:采用Hank’s保存液无法在灭活处理过程中有效保存RNA病毒样本,而在胍盐保存液和市售CWY076保存液中均能在60℃灭活处理后有效保证后续荧光定量PCR核酸检测过程中病毒RNA核酸的检出率,其中在CWY076保存液中保存的效果优于其他保存液,即便在37℃条件下保存7 d后,RNA病毒仍保持很高的检出率和检测灵敏度。

江苏民营经济领域代表委员热议“勇挑大梁、走在前列”

3月6日下午,习近平总书记参加民建、工商联界别委员联组讨论,发表了重要讲话。我在现场聆听总书记的重要讲话,心情特别激动,倍感振奋、倍受鼓舞、倍增信心、也倍添责任!近年来,江苏民营经济在党中央高度重视、省委、省政府正确领导及一系列惠企经困政策支持下,呈现稳中向好态势,在全省经济社会发展中的主体地位和支撑作用依旧稳固。民营经济在拉动群众就业、增加居民收入、创造社会财富、促进社会和谐稳定中作出了积极贡献,成为支撑江苏发展不可或缺的重要力量。