敲低CD73的表达对人肺腺癌H1975细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响及其机制

目的探讨敲低CD73的表达对人肺腺癌H1975细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响及其具体机制。方法选取人肺腺癌H1975细胞,将转染慢病毒HBLV-ZsGreen-PURO NC的人肺腺癌H1975细胞作为H1975-NC组,将转染3种不同位点敲低CD73表达的慢病毒HBLV-h-CD73短发夹RNA(shRNA)-ZsGreen-PURO的人肺腺癌H1975细胞分别作为H1975-shCD73-1组、H1975-shCD73-2组、H1975-shCD73-3组,以未转染人肺腺癌H1975细胞作为空白对照组。采用蛋白质印迹法(Western blot)选取敲低效果最明显的转染细胞进行后续实验,作为H1975-sh组。采用CCK8法、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。采用Western blot检测上皮-间充质转化(EMT)标志蛋白[E-上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)]的相对表达量及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路磷酸化蛋白表达比例。结果Western blot检测结果显示,H1975-shCD73-2组(即H1975-sh组)细胞CD73的敲低效果最明显,选取该细胞进行后续实验。敲低CD73的表达后,转染不同时间,H1975-sh组细胞吸光度(OD)值均明显低于H1975-NC组(P﹤0.01),划痕面积愈合率均低于H1975-NC组(P﹤0.05),细胞侵袭数目均少于H1975-NC组(P﹤0.05)。H1975-sh组细胞E-cadherin蛋白相对表达量高于H1975-NC组,vimentin蛋白相对表达量低于H1975-NC组,磷酸化PI3K(p-PI3K)/PI3K、磷酸化AKT(p-AKT)/AKT均低于H1975-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论CD73能促进肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与PI3K/AKT信号通路和EMT过程有关。