貉卵母细胞成熟发育的细胞学研究

【目的】探究貉卵母细胞成熟发育特征,为貉卵母细胞的体外成熟培养及优质成熟卵母细胞的挑选提供依据,以提高貉的体外受精效率。【方法】采集1~3岁(性成熟)繁殖期母貉的新鲜卵巢,制备光、电镜样品,观察貉卵母细胞成熟发育过程中细胞器变化;利用X射线微分析技术探索卵母细胞质膜化学元素变化与成熟发育的关系。【结果】根据颗粒细胞层数、卵泡直径、卵母细胞大小以及透明带的变化,将貉卵母细胞成熟发育划分为8个时期。貉卵母细胞在早期发育阶段(第Ⅰ~Ⅳ期)由颗粒细胞包围,逐渐出现透明带、卵泡腔,生发泡内的染色质越来越致密;随着卵母细胞的成熟发育(第Ⅴ~Ⅶ期),微绒毛、皮质颗粒出现;高尔基复合体、线粒体等细胞器数量明显增加,且逐渐迁移至皮质区,同时线粒体、脂滴形态发生变化。卵母细胞成熟时(第Ⅷ期),高尔基复合体及粗面内质网消失,皮质颗粒在质膜下排列;排卵后,核仁发生致密化。随着卵泡腔的增大,卵母细胞质膜表面的钠、氯和硫含量呈下降趋势,第Ⅴ期卵母细胞质膜中钠、氯和硫含量显著高于第Ⅶ期(P<0.05),钙含量显著低于第Ⅵ期和第Ⅶ期卵母细胞(P<0.05);钾含量呈现低-高-低的变化规律,第Ⅵ期卵母细胞质膜中钾含量显著高于第Ⅴ期和第Ⅵ期(P<0.05)。【结论】貉卵母细胞发育至第Ⅴ期后细胞器的种类和数量增多,质膜化学元素含量发生变化,卵母细胞膜电位发生去极化,开始进入成熟发育阶段,此时的卵母细胞具备体外发育成熟的能力。

貉早期胚胎发育内环境的研究

为研究貉早期胚胎发育体内微环境变化,试验选用年龄相同、体重相似的成年健康母貉23只,在繁殖季节自然交配,并受配1～2次,以第1次交配为零点开始计时,分别于初配后29～99h(n=7)、100～126h(n=7)、169～268h(n=9)随机处死貉,用免疫组化、透射及扫描电镜的方法研究貉早期胚胎发育过程中输卵管和子宫的形态学和超微结构变化;用X射线能谱技术对貉输卵管液和子宫液中的钾、钙、铁、锌等9种元素进行测定。结果显示:①随着貉早期胚胎的发育,其后期输卵管长度、黏膜厚度、皱襞高度和上皮高度均显著减小(P<0.05),输卵管直径有所降低,但差异不显著(P>0.05);子宫黏膜厚度、皱襞高度及子宫腺密度均显著增加(P<0.05),子宫的直径和长度有所增加,但差异不显著(P>0.05)。②随着貉早期胚胎的发育,貉子宫黏膜上皮微绒毛、脂滴和溶酶体含量增多。③随着貉早期胚胎的发育,其后期输卵管液中硫、钙、铁、铜和锌元素含量均显著升高(P<0.05),磷含量显著降低(P<0.05),而钾、氯和钠含量呈波动性变化;子宫液中硫、氯、钾的相对含量逐渐降低(P>0.05),锌的相对含量显著降低(P<0.05),磷、钙、铁和铜的含量呈波动性变化。本试验初步揭示了貉早期胚胎发育内环境的变化,为貉胚胎体外培养体系的建立提供参考。

貉不同发育阶段卵泡及黄体超微结构

貉为季节性单次发情动物,目前对貉卵泡发育调节机制的研究鲜有报道。为揭示貉不同发育阶段卵泡的变化规律,本试验应用光镜和电镜对貉不同发育阶段卵泡和黄体的组织结构进行了观察。结果表明,随着卵泡的成熟,卵泡膜内血管增生,但排卵时卵泡出血较少,仅在卵泡壁血管有充血现象。繁殖期(2~3月)卵泡的闭锁多发生于生长卵泡,且随着卵泡直径的增大,卵泡闭锁的比例增加。生长卵泡和成熟卵泡胞质中含有较多数量的粗面内质网,且生长卵泡膜外有大量的胶原纤维围绕。排卵后颗粒细胞黄体化,其中含有丰富的脂滴和滑面内质网,脂滴含有合成孕酮的前体物质和类固醇酯类,滑面内质网可能与脂类代谢有关。另外,X-射线微分析仪检测不同阶段卵泡液中各元素含量的结果显示,随着卵泡的发育卵泡液及卵泡壁中钙含量显著增加。本试验为揭示雌性貉的生殖机理提供了依据。