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胶体金免疫层析方法检测肺炎链球菌细胞壁多糖抗原
被引量:
6
1
作者
吕辰
杨蒙雅
+3 位作者
隋秀文
王浩猛
孟欣
朱涛
《天津科技大学学报》
CAS
2018年第6期16-19,34,共5页
建立一种简易快速、特异性高的胶体金免疫层析法(GICA)用于检测肺炎链球菌细胞壁多糖抗原(C-Ps).根据双抗体夹心原理,将C-Ps单克隆抗体标记于胶体金颗粒,建立检测方法.实验结果表明该试纸条操作简便,肉眼于15,min内即可判定结果.试纸条...
建立一种简易快速、特异性高的胶体金免疫层析法(GICA)用于检测肺炎链球菌细胞壁多糖抗原(C-Ps).根据双抗体夹心原理,将C-Ps单克隆抗体标记于胶体金颗粒,建立检测方法.实验结果表明该试纸条操作简便,肉眼于15,min内即可判定结果.试纸条对肺炎链球菌具有高度特异性,与百日咳鲍特菌、脑膜炎奈瑟氏菌等其他重要呼吸道致病菌无交叉反应.室温保存12个月,其检测结果无明显变化.与现行检测方法相比较,该研究制备的试纸条具有操作简便、检测快速、检出限低、特异性强、稳定性好等优点,其灵敏度和特异性分别为70%,和100%.而且与国外同类产品(美国BinaxNOW?产品)相比,灵敏度具有较高的一致性,而且特异性可达到100%,,性价比更高,为肺炎链球菌感染疾病的临床检测与早期诊断提供了一个新的手段.
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关键词
肺炎链球菌
免疫层析试纸条
单克隆抗体
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职称材料
水痘带状疱疹病毒重组腺病毒载体疫苗的构建及评价
被引量:
7
2
作者
陈伟伟
崔海燕
+2 位作者
温晔
彭少丹
朱涛
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2019年第1期1-6,共6页
目的构建表达水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)gE抗原的重组腺病毒载体疫苗,并对其免疫原性进行评价。方法采用AdEasy系统构建携带gE基因的重组腺病毒质粒pAdEasy-gE,PCR及Western blot法鉴定AD293细胞系包装的重组腺病毒r...
目的构建表达水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)gE抗原的重组腺病毒载体疫苗,并对其免疫原性进行评价。方法采用AdEasy系统构建携带gE基因的重组腺病毒质粒pAdEasy-gE,PCR及Western blot法鉴定AD293细胞系包装的重组腺病毒rAd-gE,采用阴离子和复合介质Capto Core 700两步法对其进行纯化。以3. 3×10~6、1×10~7、3×10~7ifu剂量的rAd-gE分别单针肌内注射免疫NIH小鼠,检测小鼠血清抗体滴度。结果 PCR及PacⅠ酶切鉴定表明,携带gE基因的pAdEasy-gE构建成功;PCR及Western blot分析显示,AD293细胞系成功包装可表达gE糖蛋白的rAd-gE;经两步法纯化,可回收18. 2%的rAd-gE。1×10~7和3×10~7 ifu剂量的rAd-gE可引起小鼠的体液免疫响应。结论已成功构建表达高度糖基化gE糖蛋白的rAd-gE,可有效引起小鼠的体液免疫响应,为VZV新型重组腺病毒疫苗的进一步研发奠定基础。
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关键词
水痘带状疱疹病毒
gE抗原
腺病毒
疫苗
AdEasy系统
免疫原性
原文传递
不同脊髓灰质炎病毒株3CD蛋白酶在昆虫细胞中的表达及其对P1前体蛋白的剪切
被引量:
1
3
作者
马金
李军强
+2 位作者
莘春林
段静留
朱涛
《微生物学免疫学进展》
2018年第1期1-6,共6页
目的获得在昆虫细胞中有效表达脊髓灰质炎病毒P1基因和3CD基因的重组杆状病毒,为制备脊髓灰质炎病毒样颗粒疫苗提供了科学依据。方法将I型脊髓灰质炎病毒(Mahoney株)的P1基因和3CD基因构建到供体质粒中,通过flash BAC ULTRATM系统制备...
目的获得在昆虫细胞中有效表达脊髓灰质炎病毒P1基因和3CD基因的重组杆状病毒,为制备脊髓灰质炎病毒样颗粒疫苗提供了科学依据。方法将I型脊髓灰质炎病毒(Mahoney株)的P1基因和3CD基因构建到供体质粒中,通过flash BAC ULTRATM系统制备重组杆状病毒;将Mahoney株的P1基因与Sabin株Ⅲ型的3CD基因组合,用同样方法构建重组杆状病毒。通过接种昆虫细胞草地贪夜蛾细胞(sf-9细胞)对两种病毒进行扩增,再接种昆虫细胞粉纹夜蛾细胞(High five细胞)扩大培养,并通过定量PCR对P1和3CD基因的表达进行验证,利用Western blot检测P1蛋白的表达及被3CD蛋白酶剪切的情况。结果获得了两株稳定表达脊髓灰质炎病毒P1和3CD基因的重组杆状病毒。其中,重组杆状病毒(Bac U-Mahoney-P1-3CD)在感染细胞后,3CD蛋白酶表达量较低,不能有效剪切P1前体蛋白;而重组杆状病毒(Bac U-Mahoney-P1-Sabin PV3 3CD)感染细胞后,3CD蛋白酶的表达量和对P1前体蛋白的剪切效力都有明显提高(P<0.05)。结论将Mahoney株P1基因和Sabin株Ⅲ型的3CD基因的组合构建重组杆状病毒,可有效地在昆虫细胞中表达P1和3CD基因,并且Sabin株Ⅲ型的3CD蛋白酶可有效地剪切Mahoney株的P1前体蛋白。
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关键词
脊髓灰质炎病毒
草地贪夜蛾细胞
3CD蛋白酶
P1前体蛋白
重组杆状病毒
类病毒颗粒
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职称材料
W135群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的工艺研究
4
作者
陈鹤
王浩武
+4 位作者
孟欣
陈伟伟
刘正
李伟杰
朱涛
《中国新药杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期300-305,共6页
目的:建立一种W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(MW135)与CRM197蛋白结合的方法。方法:使用高碘酸钠对MW135进行氧化,离子色谱(IC)方法检测其氧化位点,通过对醛基和多糖含量的测定来计算其氧化度,将不同氧化度的多糖与CRM197进行结合,免疫NIH...
目的:建立一种W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(MW135)与CRM197蛋白结合的方法。方法:使用高碘酸钠对MW135进行氧化,离子色谱(IC)方法检测其氧化位点,通过对醛基和多糖含量的测定来计算其氧化度,将不同氧化度的多糖与CRM197进行结合,免疫NIH小鼠并用间接ELISA法测定小鼠血清中针对MW135多糖的抗体滴度。结果:MW135多糖无法在小鼠体内产生抗体,高碘酸钠(0.4和1 g·L-1)氧化后的结合产物能诱导出高水平血清抗MW135抗体。结论:本实验条件下制备的结合疫苗保留了完整的抗原性,以该工艺制备MW135多糖蛋白结合疫苗是可行的。
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关键词
氧化度
W135群脑膜炎球菌
免疫原性
结合疫苗
还原胺化法
原文传递
基因工程药物宿主细胞蛋白的研究进展
被引量:
4
5
作者
崔新玲
朱涛
应万涛
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期1533-1541,共9页
根据宿主细胞蛋白(HCPs)的来源、影响因素等背景,综合近年来国内外在HCPs检测方面所取得的进展,重点介绍新型质谱技术在HCPs检测中的应用。HCPs的分析方法有免疫分析法(例如Western Blot和ELISA)或其他方法(例如电泳和质谱),目前最常用...
根据宿主细胞蛋白(HCPs)的来源、影响因素等背景,综合近年来国内外在HCPs检测方面所取得的进展,重点介绍新型质谱技术在HCPs检测中的应用。HCPs的分析方法有免疫分析法(例如Western Blot和ELISA)或其他方法(例如电泳和质谱),目前最常用的检测方法是ELISA法,但ELISA法存在很多问题与不足。新型检测技术,如邻位连接分析法(PLA)、生物传感器技术等也被用于HCPs检测,但这些方法难以推广使用。HCPs是产品质量控制的关键属性之一,其细胞丰度检测是药物放行并进行临床研究的重要参数。本文详细比较说明了各种HCPs检测方法的优缺点,基于质谱的蛋白质组学技术对HCPs进行定性与定量分析,目前已取得了较好的结果,弥补了ELISA方法的不足。
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关键词
基因工程药物
宿主细胞蛋白
免疫分析法
蛋白质组学
质谱
原文传递
题名
胶体金免疫层析方法检测肺炎链球菌细胞壁多糖抗原
被引量:
6
1
作者
吕辰
杨蒙雅
隋秀文
王浩猛
孟欣
朱涛
机构
天津
科技大学
生物
工程学院
康
希诺
生物
股份公司
出处
《天津科技大学学报》
CAS
2018年第6期16-19,34,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(21502139)
天津科技大学实验室创新基金资助项目(1604A306)
文摘
建立一种简易快速、特异性高的胶体金免疫层析法(GICA)用于检测肺炎链球菌细胞壁多糖抗原(C-Ps).根据双抗体夹心原理,将C-Ps单克隆抗体标记于胶体金颗粒,建立检测方法.实验结果表明该试纸条操作简便,肉眼于15,min内即可判定结果.试纸条对肺炎链球菌具有高度特异性,与百日咳鲍特菌、脑膜炎奈瑟氏菌等其他重要呼吸道致病菌无交叉反应.室温保存12个月,其检测结果无明显变化.与现行检测方法相比较,该研究制备的试纸条具有操作简便、检测快速、检出限低、特异性强、稳定性好等优点,其灵敏度和特异性分别为70%,和100%.而且与国外同类产品(美国BinaxNOW?产品)相比,灵敏度具有较高的一致性,而且特异性可达到100%,,性价比更高,为肺炎链球菌感染疾病的临床检测与早期诊断提供了一个新的手段.
关键词
肺炎链球菌
免疫层析试纸条
单克隆抗体
Keywords
Streptococcus pneumoniae
immunochromatographic strip
monoclonal antibody
分类号
R974 [医药卫生—药品]
下载PDF
职称材料
题名
水痘带状疱疹病毒重组腺病毒载体疫苗的构建及评价
被引量:
7
2
作者
陈伟伟
崔海燕
温晔
彭少丹
朱涛
机构
天津
科技大学
生物
工程学院
康希诺生物股份公司天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2019年第1期1-6,共6页
基金
艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治(2016ZX1000-4001)
天津市科技计划项目(16PTWYHZ00070)
文摘
目的构建表达水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)gE抗原的重组腺病毒载体疫苗,并对其免疫原性进行评价。方法采用AdEasy系统构建携带gE基因的重组腺病毒质粒pAdEasy-gE,PCR及Western blot法鉴定AD293细胞系包装的重组腺病毒rAd-gE,采用阴离子和复合介质Capto Core 700两步法对其进行纯化。以3. 3×10~6、1×10~7、3×10~7ifu剂量的rAd-gE分别单针肌内注射免疫NIH小鼠,检测小鼠血清抗体滴度。结果 PCR及PacⅠ酶切鉴定表明,携带gE基因的pAdEasy-gE构建成功;PCR及Western blot分析显示,AD293细胞系成功包装可表达gE糖蛋白的rAd-gE;经两步法纯化,可回收18. 2%的rAd-gE。1×10~7和3×10~7 ifu剂量的rAd-gE可引起小鼠的体液免疫响应。结论已成功构建表达高度糖基化gE糖蛋白的rAd-gE,可有效引起小鼠的体液免疫响应,为VZV新型重组腺病毒疫苗的进一步研发奠定基础。
关键词
水痘带状疱疹病毒
gE抗原
腺病毒
疫苗
AdEasy系统
免疫原性
Keywords
Varicella zoster virus (VZV)
Glycoprotein E (gE)antigen
Adenovirus
Vaccine
AdEasy system
Immunogenicity
分类号
R373.12 [医药卫生—病原生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
不同脊髓灰质炎病毒株3CD蛋白酶在昆虫细胞中的表达及其对P1前体蛋白的剪切
被引量:
1
3
作者
马金
李军强
莘春林
段静留
朱涛
机构
天津
经济技术开发区博士后科研工作站
康
希诺
生物
股份公司
分站
天津市
呼吸道
细菌
重组及
结合
疫苗
企业
重点
实验室
康
希诺
生物
股份公司
天津
科技大学
生物
工程学院
出处
《微生物学免疫学进展》
2018年第1期1-6,共6页
基金
国家"重大新药创制"科技重大专项资助项目(2015ZX09102009)
天津市科技计划项目(16PTWYHZ00070)
文摘
目的获得在昆虫细胞中有效表达脊髓灰质炎病毒P1基因和3CD基因的重组杆状病毒,为制备脊髓灰质炎病毒样颗粒疫苗提供了科学依据。方法将I型脊髓灰质炎病毒(Mahoney株)的P1基因和3CD基因构建到供体质粒中,通过flash BAC ULTRATM系统制备重组杆状病毒;将Mahoney株的P1基因与Sabin株Ⅲ型的3CD基因组合,用同样方法构建重组杆状病毒。通过接种昆虫细胞草地贪夜蛾细胞(sf-9细胞)对两种病毒进行扩增,再接种昆虫细胞粉纹夜蛾细胞(High five细胞)扩大培养,并通过定量PCR对P1和3CD基因的表达进行验证,利用Western blot检测P1蛋白的表达及被3CD蛋白酶剪切的情况。结果获得了两株稳定表达脊髓灰质炎病毒P1和3CD基因的重组杆状病毒。其中,重组杆状病毒(Bac U-Mahoney-P1-3CD)在感染细胞后,3CD蛋白酶表达量较低,不能有效剪切P1前体蛋白;而重组杆状病毒(Bac U-Mahoney-P1-Sabin PV3 3CD)感染细胞后,3CD蛋白酶的表达量和对P1前体蛋白的剪切效力都有明显提高(P<0.05)。结论将Mahoney株P1基因和Sabin株Ⅲ型的3CD基因的组合构建重组杆状病毒,可有效地在昆虫细胞中表达P1和3CD基因,并且Sabin株Ⅲ型的3CD蛋白酶可有效地剪切Mahoney株的P1前体蛋白。
关键词
脊髓灰质炎病毒
草地贪夜蛾细胞
3CD蛋白酶
P1前体蛋白
重组杆状病毒
类病毒颗粒
Keywords
Poliovirus
Spodoptera frugiperda cell
3CD protease
P1 precursor protein
Recombinant baculovirus
Viruslike particles(VLPs)
分类号
R512.4 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
W135群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的工艺研究
4
作者
陈鹤
王浩武
孟欣
陈伟伟
刘正
李伟杰
朱涛
机构
天津
科技大学
天津市
河东区疾病预防控制中心
康希诺生物股份公司天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室
出处
《中国新药杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期300-305,共6页
基金
国家"重大新药创制"科技重大专项资助项目(2015ZX09102009)
文摘
目的:建立一种W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(MW135)与CRM197蛋白结合的方法。方法:使用高碘酸钠对MW135进行氧化,离子色谱(IC)方法检测其氧化位点,通过对醛基和多糖含量的测定来计算其氧化度,将不同氧化度的多糖与CRM197进行结合,免疫NIH小鼠并用间接ELISA法测定小鼠血清中针对MW135多糖的抗体滴度。结果:MW135多糖无法在小鼠体内产生抗体,高碘酸钠(0.4和1 g·L-1)氧化后的结合产物能诱导出高水平血清抗MW135抗体。结论:本实验条件下制备的结合疫苗保留了完整的抗原性,以该工艺制备MW135多糖蛋白结合疫苗是可行的。
关键词
氧化度
W135群脑膜炎球菌
免疫原性
结合疫苗
还原胺化法
Keywords
degree of oxidation
group W135 meningococca]
immunogenieity
conjugate vaccine
reductive amination
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
R963 [医药卫生—微生物与生化药学]
原文传递
题名
基因工程药物宿主细胞蛋白的研究进展
被引量:
4
5
作者
崔新玲
朱涛
应万涛
机构
天津
科技大学
康
希诺
生物
股份公司
军事科学院军事医学研究院生命组学研究所
出处
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期1533-1541,共9页
基金
国家重点研发计划(2017YFF0205400,2016YFA0501300)
国家自然基金重点项目(81530021)
创新基金课题(BWS14J052,16CXZ027)
文摘
根据宿主细胞蛋白(HCPs)的来源、影响因素等背景,综合近年来国内外在HCPs检测方面所取得的进展,重点介绍新型质谱技术在HCPs检测中的应用。HCPs的分析方法有免疫分析法(例如Western Blot和ELISA)或其他方法(例如电泳和质谱),目前最常用的检测方法是ELISA法,但ELISA法存在很多问题与不足。新型检测技术,如邻位连接分析法(PLA)、生物传感器技术等也被用于HCPs检测,但这些方法难以推广使用。HCPs是产品质量控制的关键属性之一,其细胞丰度检测是药物放行并进行临床研究的重要参数。本文详细比较说明了各种HCPs检测方法的优缺点,基于质谱的蛋白质组学技术对HCPs进行定性与定量分析,目前已取得了较好的结果,弥补了ELISA方法的不足。
关键词
基因工程药物
宿主细胞蛋白
免疫分析法
蛋白质组学
质谱
Keywords
genetic engineering pharmaceuticals
host cell proteins
immunoassay
proteomics
mass spectrometry
分类号
R915 [医药卫生—微生物与生化药学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
胶体金免疫层析方法检测肺炎链球菌细胞壁多糖抗原
吕辰
杨蒙雅
隋秀文
王浩猛
孟欣
朱涛
《天津科技大学学报》
CAS
2018
6
下载PDF
职称材料
2
水痘带状疱疹病毒重组腺病毒载体疫苗的构建及评价
陈伟伟
崔海燕
温晔
彭少丹
朱涛
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2019
7
原文传递
3
不同脊髓灰质炎病毒株3CD蛋白酶在昆虫细胞中的表达及其对P1前体蛋白的剪切
马金
李军强
莘春林
段静留
朱涛
《微生物学免疫学进展》
2018
1
下载PDF
职称材料
4
W135群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的工艺研究
陈鹤
王浩武
孟欣
陈伟伟
刘正
李伟杰
朱涛
《中国新药杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
原文传递
5
基因工程药物宿主细胞蛋白的研究进展
崔新玲
朱涛
应万涛
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
4
原文传递
已选择
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