异基因骨髓移植后小鼠虹膜睫状体内抗原递呈细胞的分布

目的:观察异基因骨髓移植后小鼠虹膜睫状体内抗原递呈细胞(APC)的分布情况。方法:绿色荧光蛋白(GFP)转基因C57BL/6J(H-2b)小鼠作为供体,经5.5Gy×2剂量照射24h的BALB/c(H-2d)小鼠作为宿主,于骨髓移植后21d和35d取出宿主小鼠眼球,分离得到虹膜睫状体,荧光显微镜下观察供体骨髓来源的细胞分布。同时采用免疫组织化学染色方法观察普通和移植后小鼠F4/80阳性细胞在虹膜中的分布规律。结果:异基因骨髓移植后21d和35d,宿主虹膜睫状体内可观察到大量呈树突状形态的绿色荧光细胞,呈“满天星”样散在分布于小鼠虹膜睫状体中,这些细胞F4/80抗体免疫组织化学荧光染色多为阳性。结论:虹膜睫状体中的APC细胞来源于骨髓,且大部分为F4/80阳性细胞;异基因骨髓移植后宿主虹膜睫状体中的APC细胞全部被供体来源的APC细胞取代。

异源嵌合体小鼠体内肿瘤生长情况及供体淋巴细胞输注的抗肿瘤反应

目的:异基因骨髓移植后2～3周向嵌合体小鼠体内接种MethA纤维肉瘤,观察肿瘤在异源嵌合体小鼠体内生长情况,研究引发抗肿瘤免疫反应(GVT)时供体淋巴细胞输注(DLI)的最佳时机和移植物抗宿主病(GVHD)反应情况.方法:BALB/c(H-2d)和C57BL/6(H-2b)小鼠用137Cs照射2次(间歇4 h)共11Gy,24 h后经尾静脉注射这2种小鼠的骨髓细胞1 × 107,进行同基因、异基因骨髓移植.照射后21 d,在各组小鼠皮内接种1×106个MethA肿瘤细胞,观察MethA肿瘤在同基因、异基因骨髓移植小鼠体内的生长情况.在另一实验中,在骨髓移植后2周于C57BL/6→BALB/c异源嵌合体的皮内接种1×106个MethA肿瘤细胞,分别在接种肿瘤前6 d、当天和后2 d进行DLI,以DLI空白组为对照,观察DLI所诱发的GVT和GVHD.结果:MethA肿瘤能在两种异源嵌合体内生长且生长速度相当;接种在C57BL/6及其同基因骨髓移植体内的MethA肿瘤一过性生长,在2～3周内被彻底排斥.在向C57 BL/6→BALB/c异源嵌合体小鼠DLI的同时或6 d后接种的肿瘤的生长受到明显抑制,多数小鼠伴有明显的GVHD,以上两组各有2只小鼠死于严重的GVHD;而荷瘤2 d再给予DLI则不能减慢肿瘤生长速度,12只中有1只小鼠出现轻微GVHD.结论:MethA肿瘤能在C57 BL/6→BALB/c骨髓移植和BALB/c→C57 BL/6骨髓移植嵌合体内生长且生长速度相当,DLI诱发GVT作用与肿瘤负荷大小有关,GVT与GVHD有明显的伴随关系.

异基因骨髓移植小鼠供体骨髓细胞在受体内的分布及淋巴细胞供受体来源比例分析

目的观察小鼠异基因骨髓移植(alloBMT)后供体骨髓细胞在受体内的分布以及嵌合体内T、B淋巴细胞增殖分化规律。方法以绿色荧光蛋白(GFP)转基因C57BL/6J(H2b)小鼠为供体,以137Cs5.5Gy×2照射的BALB/c(H2d)小鼠为受体,分别于移植后3天(+3天)、+7天、+21天、+35天和+70天取外周血、骨髓、胸腺、脾脏、肠集合淋巴结及肝脏,用流式细胞仪和荧光显微镜观察供体来源的骨髓细胞分布。用藻红蛋白标记的抗CD4、抗CD8、抗B220抗体检测+21天小鼠体内骨髓、外周血及其他免疫器官中T、B淋巴细胞的构成比例。结果①+3天、+7天供体骨髓细胞在受体脾脏中分布最多,分别为(1.06±0.02)%、(76.60±1.80)%;骨髓中分别为(0.37±0.06)%、(39.70±5.38)%。②+21天受体骨髓、脾脏、淋巴结、胸腺及外周血中供体细胞达60%～90%。③+3天受体肠集合淋巴结中供体骨髓细胞达(0.36±0.04)%,与受体骨髓中供体骨髓细胞的比例相当。结论①alloBMT后早期供体骨髓细胞可分布到受体的骨髓、脾脏、肠集合淋巴结中,脾脏中最多。②+21天受体内骨髓及其他免疫器官以供体细胞为主。③受体肠道集合淋巴结也是移植后供体骨髓细胞的早期寄居点和B淋巴细胞增殖后的迁移部位。