麻醉生理学教学的探讨

麻醉生理学作为生理学的二级学科,授课教师如何把知识讲精讲透讲出新意,激发学生学习的动力,值得我们授课教师深思。我们采用多种教学方法,如教授法、案例法、PBL法、开放实验法等多种教学方法并用,并尝试课内外结合式教学,发展网络式教学,引导学生积极主动学习,培养学生探索、创新和实践的能力。

生理学教学改革思考

生理学是医学院校学生的一门重要的基础课,内容繁多、概念抽象、理论性强,既有形态学知识(组织学、解剖学),也包含了生物化学、药理学、病理生理学的基本内容,与临床各科有密切联系.目前,高等学校教学时间的有限性和知识增长之间的矛盾越来越尖锐.要解决这一矛盾,保证知识、能力、素质的协调发展,关键是深化教学内容与方法改革,充分利用有限的授课时间,提高教学效率.为适应新世纪对高等医学人才的需要,我们对生理学教学内容与方法的改革进行了一些思考和尝试.

固有免疫受体NLRX1在中枢神经系统疾病中作用的研究进展

中枢神经系统(CNS)正常功能的发挥高度依赖细胞能量供给与固有免疫体系提供的内环境稳定。NOD样受体家族成员X1(NLRX1)是定位于线粒体的固有免疫模式识别受体,具有调节线粒体自噬、炎性反应、活性氧的生成等多种功能,因而可影响炎症、肿瘤等多种疾病的进展。近年来的研究表明,NLRX1通过抑制炎性反应、调节神经细胞线粒体自噬、线粒体动力变化和氧化应激反应等机制,在自身免疫性脱髓鞘疾病、缺血缺氧性疾病、创伤等CNS疾病中发挥神经保护作用。了解NLRX1参与CNS疾病过程的机制,可加深对CNS固有免疫分子的认识,并可望为CNS疾病的治疗提供新的思路与靶点。

糖尿病诱导的小鼠室旁核催产素和加压素阳性神经元FOS表达

目的:探索糖尿病(DM)不同状态下小鼠下丘脑室旁核(PVN)催产素和加压素阳性神经元的FOS表达变化。方法:腹腔注射溶媒或链脲佐菌素(STZ)制备对照组或糖尿病小鼠模型,根据机械痛测试区分糖尿病痛(DNP组)与非痛组(DWP组)。采用免疫组化和免疫荧光染色技术检测PVN内FOS、催产素(OXT)和加压素(VP)阳性神经元的分布及双标情况,并进行计数和比较。结果:7 d时三组(Control组、DNP组和DWP组)小鼠PVN内均有较多的FOS表达,而28 d时DWP和DNP组FOS的表达几近于无,与7 d组相比差异显著(P<0.05或0.001)。与对照组相比,DNP组和DWP组动物的VP和OXT荧光染色同样存在随着造模时间延长染色强度减弱的趋势(P<0.05)。VP、OXT与FOS的双标染色计数结果显示,在DWP 7 d组,VP/FOS双标细胞数为74.33±22.10,占VP阳性细胞数的(56.64±7.52)%,而OXT/FOS的双标率则仅为(10.44±3.14)%。在DNP 7 d组,OXT/FOS双标细胞数为51.00±31.80,占OXT阳性细胞数的(18.50±9.51)%,而VP/FOS的双标率仅为(9.34±3.27)%。与此相对,28 d组FOS的表达锐减,几乎无双标细胞。结论:下丘脑PVN内的VP和OXT阳性神经元在糖尿病痛与非痛,疾病发展的不同阶段存在明显不同的可塑性变化特点,理解这些变化对于揭示糖尿病及其并发症的神经机制具有重要意义。

医学实验教学和案例教学对学生智能与技能的培养

高等教育必须培养学生思考探索问题的本领,要注重学生的智能和技能的培养,否则造就出来的学生不能适应时代的需要。本文探讨医学教学实践中,学生智能和技能培养的重要性,并重点讨论生理学实验教学如何加强学生智能和技能培养的问题,以及如何通过案例教学培养学生收集处理信息、提出问题、分析问题和解决问题的能力。

中央杏仁核生长抑素阳性神经元参与小鼠急性痒和慢性痒的形态学研究

目的:观察急性痒和慢性痒小鼠中央杏仁核(CeA)内生长抑素(SST)阳性神经元的激活情况,为其参与痒觉信息的调控提供形态学证据。方法:在小鼠颈背部皮内注射组胺(His)或氯喹(CQ)建立急性痒模型;应用二苯基环丙烯酮(DCP)建立接触性皮炎慢性痒模型。进一步结合免疫荧光染色技术分别观察急性和慢性痒小鼠CeA内SST阳性神经元的激活情况。结果:对照组小鼠30 min内抓挠次数为(16.33±5.13)次;His组小鼠30 min内抓挠次数为(110.66±22.00)次;CQ组小鼠30 min内抓挠次数为(120.33±19.50)次。急性痒模型组小鼠抓挠次数显著高于对照组(P<0.05);DCP模型组小鼠搔抓次数明显高于对照组搔抓次数(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示在急性痒状态下,对照组CeA内SST/FOS双标神经元占SST阳性神经元的(3.1±0.99)%;His组CeA内SST/FOS双标神经元占SST阳性神经元的(20.23±1.76)%;CQ组CeA内SST/FOS双标神经元占SST阳性神经元的(19.90±2.58)%;在慢性痒状态下,对照组CeA内SST/FOS双标神经元占SST阳性神经元的(3.73±2.05)%;DCP组CeA内SST/FOS双标神经元占SST阳性神经元的(23.93±4.02)%。结论:急性和慢性痒状态下,小鼠CeA内SST阳性神经元激活,为CeA内SST阳性神经元参与痒觉的信息传递提供了形态学依据。

三种逆行示踪工具标记小鼠前扣带回皮质传入核团的比较

目的:通过对小鼠前扣带回皮层(ACC)立体定位注射重组腺相关病毒(rAAV2⁃retro)、荧光乳胶微球(retrobeads)及狂犬病毒(RV)的方法,比较三种逆行示踪工具对ACC上游传入核团的标记效果。方法:将rAAV2⁃retro⁃hSyn⁃EGFP⁃P2A⁃Cre⁃WPRE⁃hGH⁃PA、retrobeads(Red)等量混合后注射到小鼠ACC脑区,待病毒表达3周后灌注取脑、切片观察。另外将rAAV2/9⁃EF1α⁃DIO⁃oRVG(19G)、rAAV2/9⁃EF1α⁃DIO⁃NLS⁃mCherry⁃P2A⁃TVA⁃T2A⁃RVG、rAAV2/9⁃CaMKIIα⁃Cre混合后注射到小鼠ACC脑区,待病毒表达2周后将RV⁃EnvA⁃ΔG⁃EGFP注射到相同部位,1周后灌注取脑、切片观察,比较三种策略标记到ACC上游传入核团的神经元数量及形态。结果:retrobeads标记到的核团最多,但无法标记神经元形态及树突结构;RV标记到的核团数量次之,胞体及树突结构标记完整,而且可以观察到清晰的树突棘;rAAV2⁃retro标记到的核团最少,能标记到树突,但无法标记树突棘。三者在内侧眶皮层、腹侧眶皮层、视皮层等区域均能够高效标记。其中,RV在丘脑腹前核和腹外侧核标记效率高于其他两种工具。结论:ACC接受脑内的广泛投射,而三种逆行示踪剂在标记效率和标记神经元结构完整性上各有优劣。

创伤后应激障碍小鼠海马恐惧记忆消退相关神经元的异常激活

目的:分析创伤后应激障碍(PTSD)小鼠恐惧记忆消退过程中海马各亚区神经元的激活及差异。方法:使用两种即刻早期基因蛋白标记策略,对PTSD小鼠条件性恐惧记忆消退相关神经元进行标记。第一组利用免疫荧光染色技术,使用野生型小鼠对海马区域神经元Arc蛋白进行标记并观察;第二组使用Fos-CreER~(T2);Ai9转基因小鼠,在恐惧记忆消退前23 h注射他莫昔芬诱导荧光蛋白表达,标记相关神经元并观察。通过对标记的海马神经元数量及树突分支结构进行分析,对比海马神经元激活水平和神经元树突的可塑性变化。结果:两组实验观察发现Arc和Fos阳性神经元主要分布在背侧海马,其中Arc蛋白显色在CA3和DG亚区呈富集分布,CA1、CA2亚区的分布则较为散在,而Fos阳性神经元在海马DG亚区表达富集,散在分布于CA1、CA2和CA3亚区。与对照组对比,PTSD组海马各亚区表达Arc蛋白神经元数目没有明显差异;而PTSD组海马中CA1、CA3、DG亚区的Fos阳性神经元数量显著增加(P<0.01)。利用Fos-CreER~(T2);Ai9小鼠对两组小鼠海马区域神经元树突分支进行观察分析,未发现明显变化。结论:PTSD小鼠恐惧记忆消退过程中海马不同亚区神经元存在异常激活,但激活的神经元树突分支无明显可塑性改变。

酸柏栀油软胶囊对去势大鼠血液流变性的影响及其降血脂作用

目的:观察酸柏栀油软胶囊(COJAG)对雌性去势大鼠血液流变性和血脂的作用,以及对雌性激素、体质量和脏器指数的影响。方法:45只已行双侧卵巢切除术的雌性大鼠,分为COJAG高、中、低剂量组,雌激素组,模型组;另取10只大鼠作为假手术组,均进行雌二醇(E2)、卵泡雌激素(FSH)、黄体生成素(LH)、血脂、血液流变性、体质量及脏器指数的测定。结果:与模型组比较,COJAG组大鼠血清E2水平显著增高(P<0.01),FSH和LH水平降低(P<0.05或P<0.01);血清TG、TC、LDL-C及TC/HDL-C水平降低(P<0.05),HDL-C水平增高(P<0.05);体质量显著降低,胸腺、垂体、子宫和肾上腺等脏器指数显著增加(P<0.05或P<0.01);高、中、低切变率下的全血黏度(ηb)和血浆黏度(ηp)降低(P<0.05),血沉(ESR)加快(P<0.05),红细胞压积(Hct)、纤维蛋白原(Fib)减少(P<0.05)。结论:COJAG可降低血脂,改善血液流变性,减轻体质量,增加脏器指数,作用可能与其增加雌激素水平和/或富含多不饱和脂肪酸有关。

β-七叶皂甙钠对严重烫伤早期大鼠胶质原纤维酸性蛋白及突触变化的影响

目的：探讨β-七叶皂甙钠对严重烫伤早期大鼠突触可塑性的影响。方法：健康SD大鼠随机分为正常组、假烫伤组、烫伤组，烫伤后又设3、6、12、24、48h5个时相点，用透射电镜观察突触超微结构变化；免疫组织化学显色观察脑胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）表达。结果：烫伤后神经元突触数量减少、星形胶质细胞线粒体肿胀、空泡化，GFAP表达增加。经β-七叶皂甙钠治疗后突触结构恢复，GFAP表达减少。结论：烫伤后大鼠皮质神经元突触结构遭破坏，β-七叶皂甙钠可能是通过保护神经元突触结构的基本完整，抑制GFAP表达，从而起到脑保护作用。

GLUT1基因单核苷酸多态性与夏尔巴人群高原低氧适应的关系

目的:探讨夏尔巴人群葡萄糖转运体1(GLUT1)基因单核苷酸多态性(SNPs)与高原低氧适应性的关系.方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测104例夏尔巴人及90名汉族对照个体GLUT1+22999(G→T),-2841(A→T)单核苷酸多态性,分析其特征.结果:夏尔巴人在+22999位点G/G,G/T,T/T3种基因型构成分别为48.0%,41.3%和10.7%,而平原汉族对照组为66.7%,31.1%和2.2%,两组间差异有统计学意义(P=0.009).在+22999位点,以变异基因型(G/T+T/T)作为暴露因素,求得OR=2.16(95%CI=1.206-3.870);两组人群在GLUT1-2841位点基因型和等位基因分布无统计学差异.结论:GLUT1基因+22999(G→T)多态性与夏尔巴人高原低氧适应存在相关性,G/T,T/T基因型可能对低氧适应有利,具体机制值得进一步探讨.

人胎睾丸发生过程中VEGF的表达研究

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)在人胚胎睾丸组织发生过程中的表达特征,探讨其在睾丸发生中的作用。方法:采用HE染色观察睾丸发育,SP免疫组织化学法检测VEGF在不同胎龄睾丸组织中的表达变化。结果:人胚胎睾丸发育正常;VEGF在胎儿睾丸间质细胞、生殖细胞中均有不同程度表达,间质细胞以12～24周为表达高峰,生殖细胞以16～24周为表达高峰,24周后随着胎龄的增长均呈下降趋势(P<0.01)。结论:VEGF在人胎睾丸发生、发育过程中有不同程度的表达,表明其在睾丸发生过程中起着一定的作用。

冠心病患者甲襞微循环、血液流变性、血脂及血糖的变化

目的:通过观察冠心病(CHD)患者的甲襞微循环、血液流变学指标、血脂及血糖的变化,为及早诊断、治疗及预后判断提供依据。方法:确诊为CHD的患者156例进行甲襞微循环、血液流变学、血脂及血糖等进行检测。结果:与50例正常人相比较,CHD患者甲襞毛细血管数减少、交叉、畸形管襻增多,输入支变细、输出支和乳头下静脉丛扩张、血流速度减慢伴红细胞聚集;全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、血沉、纤维蛋白原、血小板黏附性和聚集性增加;总胆固醇、三酰甘油、血糖增高,高密度脂蛋白胆固醇降低;并发有高血压病、糖尿病、高脂血症的CHD患者的甲襞微循环、血液流变性明显异常。结论:CHD患者的甲襞微循环、血液流变性、血脂、血糖明显异常;并发有高血压病、糖尿病、高血脂症的CHD患者甲襞微循环、血液流变性异常更为严重。

棘仁柏仁栀子油配方的安神与益智作用研究

目的:探讨棘仁、柏仁和栀子配伍组方的安神与益智作用。方法:将棘仁、柏仁和栀子的活性部位棘仁油、柏仁油和栀子油按3∶2∶l配成复方制剂,灌胃给药,观察其对小鼠自主活动和学习记忆的影响。结果:棘仁柏仁栀子油可使小鼠自主活动减少且无耐受现象,并可缩短小鼠水迷宫登台潜伏期。结论:棘仁柏仁栀子油配方有镇静安神和增强学习记忆的作用。

L-硝基-精氨酸甲酯对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障功能和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障功能和MMP-9表达的影响,探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:将60只SD大鼠随机分为3组:1假手术组;2对照组;3L-NAME治疗组。用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,再灌注48h后干湿重法测定缺血脑组织含水量,用伊文思蓝测定血脑屏障通透性,免疫组织化学技术检测MMP-9的表达,同时电镜观察血脑屏障的变化。结果:脑缺血再灌注48h,对照组缺血侧脑含水量明显升高,EB含量也明显增加,电镜观察发现血脑屏障破坏严重,MMP-9的表达也较假手术组显著增加;而应用L-NAME处理的大鼠其缺血脑组织含水量明显减少,缺血侧EB含量较对照组也明显降低(P<0.05),同时电镜观察到血脑屏障的破坏减轻,而MMP-9表达水平也明显低于对照组。结论:L-NAME对大鼠脑缺血再灌注损伤后的血脑屏障具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制MMP-9表达来实现的。

特异性环氧合酶-2抑制剂SC236诱导胃癌细胞株凋亡的实验研究

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)特异性抑制剂SC236诱导胃癌细胞株SGC7901凋亡的机制。方法:SC236对人胃癌来源的SGC7901细胞进行凋亡诱导。以吖啶橙染色后荧光显微镜下观察凋亡细胞形态并计算凋亡指数。Western blot法检测凋亡调节蛋白Bcl-2、Bak、Bax与CED-9的表达情况。流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:SGC7901细胞经SC236作用后,细胞中凋亡促进因子Bak的表达水平明显增高、凋亡抑制因子Bcl-2的表达水平显著下降、而凋亡促进因子Bax和凋亡抑制因子CED-9表达水平无明显变化。细胞凋亡指数或凋亡率则随SC236浓度的增加和作用的时间延长而升高。结论:COX-2特异抑制剂SC236可通过上调凋亡促进因子Bak表达和下调凋亡抑制因子Bcl-2表达而诱导胃癌细胞株SGC7901的凋亡。

筒箭毒碱对琥珀胆碱引起肌梭传入放电的抑制

目的 研究筒箭毒碱 (TC)对琥珀胆碱 (SCh)引起肌梭传入放电的影响。方法 以大鼠为对象 ,在支配腓肠肌的神经上分离神经细束 ,引导肌梭的传入放电。以放电频率峰值 (DPF)、放电频率最大增值 (MIF)和峰频率 (PF)出现的时间为指标 ,观察TC对SCh引起肌梭传入放电的影响。结果 ①注射TC 0 .0 0 1mmol·kg- 1 5min后再注射SCh0 .0 0 5mmol·kg- 1 ,DPF和MIF分别降低到对照值的 4 2 .2 %和 2 4 .0 % ,PF出现时间后移 71.9s;SCh的剂量不变 ,当TC的剂量增加到 0 .0 0 3mmol·kg- 1 时 ,DPF和MIF分别降低到 10 .4 %和 8.7% ,PF出现时间后移 96 .3s ;当TC的剂量增加到 0 .0 0 5mmol·kg- 1 时 ,则可完全抑制SCh引起的肌梭传入放电。②分别在注射TC 0 .0 0 1mmol·kg- 1 后35min和 70min再注射SCh 0 .0 0 5mmol·kg- 1 ,则DPF降低到对照值的 5 7.4 %和 6 9.3% ,MIF降低到 4 6 .8%和6 5 .8% ,PF出现时间后移 4 5 .9s和 2 8.7s。结论 TC对SCh引起的肌梭传入放电有明显的抑制作用 。

VEGF在人胎卵巢发育过程中的表达研究

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)在人胚胎卵巢组织发生过程中的表达特征,探讨其在卵巢发生中的作用。方法采用HE染色和SP免疫组织化法学法检测VEGF在不同胎龄卵巢组织中的表达变化。结果 VEGF在胎儿卵巢初级卵母细胞、卵泡细胞、部分基质细胞呈阳性表达,在卵母细胞的染色程度均强于卵泡细胞和基质细胞,基质小血管内皮也有阳性表达。其在卵母细胞中以胎24w阳性细胞多且表达量强,此后呈逐渐下降趋势。结论胎儿卵巢存在局部调节因子,VEGF表达于人胎卵巢中,以自分泌或旁分泌方式参与卵母细胞生长,在卵巢发生、发育过程中起着一定的作用。