目的探究沉默信息调节因子1(silencing information regulator 1,SIRT1)对携带野生型和R273H突变型TP53基因的结直肠癌细胞凋亡的影响及其相关分子机制。方法TUNEL染色和Western blot法分别比较SIRT1过表达(LV-SIRT1)和SIRT1敲低(sh-SIR...目的探究沉默信息调节因子1(silencing information regulator 1,SIRT1)对携带野生型和R273H突变型TP53基因的结直肠癌细胞凋亡的影响及其相关分子机制。方法TUNEL染色和Western blot法分别比较SIRT1过表达(LV-SIRT1)和SIRT1敲低(sh-SIRT1)的结直肠癌HCT116细胞(携带野生型TP53基因)、SW620和SW480细胞(携带R273H突变型TP53基因)在细胞凋亡以及凋亡蛋白(Bcl-2、Bax和p53)以及K382位点乙酰化的p53蛋白(Ac-p53)水平的差异;利用SIRT1特异性激动剂SRT1720和抑制剂EX527分别处理亲本细胞,比较SIRT1去乙酰化酶活性改变对凋亡蛋白和Ac-p53表达水平的影响;采用环己酰亚胺处理SRT1720或EX527预处理的结直肠癌亲本细胞,比较各组细胞在Ac-p53蛋白稳定性上的差异。结果SIRT1对野生型p53蛋白和R273H突变型p53蛋白均具有去乙酰化作用,乙酰化修饰能够增强野生型p53蛋白的稳定性,但降低R273H突变型p53蛋白的稳定性,上调SIRT1表达抑制结直肠癌细胞的凋亡,而敲减SIRT1促进细胞凋亡。结论SIRT1通过去乙酰化野生型和R273H突变型p53蛋白影响其稳定性,参与对结直肠癌细胞的凋亡调控。展开更多
文摘目的探究沉默信息调节因子1(silencing information regulator 1,SIRT1)对携带野生型和R273H突变型TP53基因的结直肠癌细胞凋亡的影响及其相关分子机制。方法TUNEL染色和Western blot法分别比较SIRT1过表达(LV-SIRT1)和SIRT1敲低(sh-SIRT1)的结直肠癌HCT116细胞(携带野生型TP53基因)、SW620和SW480细胞(携带R273H突变型TP53基因)在细胞凋亡以及凋亡蛋白(Bcl-2、Bax和p53)以及K382位点乙酰化的p53蛋白(Ac-p53)水平的差异;利用SIRT1特异性激动剂SRT1720和抑制剂EX527分别处理亲本细胞,比较SIRT1去乙酰化酶活性改变对凋亡蛋白和Ac-p53表达水平的影响;采用环己酰亚胺处理SRT1720或EX527预处理的结直肠癌亲本细胞,比较各组细胞在Ac-p53蛋白稳定性上的差异。结果SIRT1对野生型p53蛋白和R273H突变型p53蛋白均具有去乙酰化作用,乙酰化修饰能够增强野生型p53蛋白的稳定性,但降低R273H突变型p53蛋白的稳定性,上调SIRT1表达抑制结直肠癌细胞的凋亡,而敲减SIRT1促进细胞凋亡。结论SIRT1通过去乙酰化野生型和R273H突变型p53蛋白影响其稳定性,参与对结直肠癌细胞的凋亡调控。