无流体剪切力条件下ADAMTS13裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子的研究

目的:研究血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)在无流体剪切力下裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子(ULVWF)的分子机制,为探明血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和其他血栓性疾病的发病机理提供理论依据。方法:通过免疫荧光显微镜观察ADAMTS13在无流体剪切力下裂解内皮细胞表面上ULVWF的情况,采用ELISA测定不同条件下培养基中VWF抗原量的变化。ELISA和Western blot分别测定有无流体剪切力或凝血因子VIII(FVIII)条件培养基中的VWF和蛋白水解片段的数量。多聚体分析评估ADAMTS13裂解内皮细胞上ULVWF的情况。将组胺刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与ADAMTS13和各种N-和C-末端截断的突变体一起孵育,通过免疫荧光显微镜观察与细胞保持结合的ULVWF,ELISA测定内皮细胞释放出的ULVWF,确定降解内皮细胞上ULVWF所需的ADAMTS13结构域。结果:在无流体剪切力下,重组ADAMTS13和血浆ADAMTS13迅速降解了内皮细胞表面上新形成的ULVWF。ULVWF的蛋白水解过程依赖于培养时间、ADAMTS13浓度和剪切力。ADAMTS13介导的蛋白水解释放的VWF分布与组胺刺激下内皮细胞分泌的VWF分布非常相似,提示ULVWF在内皮细胞表面发生裂解。裂解内皮细胞上ULVWF需要ADAMTS13半胱氨酸富集区(Cys-rich,Cys R)结构域和间隔区结构域,但不需要ADAMTS13的7个TSP1重复序列(TSP12-8)和2个补体结合区(CUB)结构域。结论:内皮细胞上ULVWF聚合物在无流体剪切力下也对ADAMTS13的裂解敏感,这为ADAMTS13裂解内皮细胞结合的ULVWF的分子机制提供了新见解,并可能有助于理解TTP和其他血栓性疾病的发病机理。

血管性血友病因子裂解酶间隔区结构域突变对酶生物学功能的影响

目的:探讨血管性血友病因子裂解酶ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)间隔区结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解过程中的生物学功能,阐明ADAMTS13在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)发病机制中的作用。方法:将ADAMTS13间隔区结构域中的氨基酸残基TEDRLPR以点突变技术逐个基因突变(突变体M1~M7),将构建的ADAMTS13与其突变体质粒转染至人胚肾HEK293细胞,稳定表达后提纯重组蛋白。观察野生型和突变型ADAMTS13在变性条件、剪切应力作用和ADAMTS13抗体处理后裂解vWF的能力。结果:荧光共振能量转移(FRET)实验,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)对FRET-vWF73剪切能力降低(P<0.05)。变性条件下,野生型ADAMTS13可以将vWF多聚体裂解,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)的裂解活性明显降低(P<0.01)。在体外剪切应力作用下,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)裂解vWF多聚体的能力明显降低(P<0.01)。与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)与vWF之间的结合力差异无统计学意义(P>0.05),表明ADAMTS13的C末端与vWF之间存在多个结合位点。ADAMTS13抗体处理可在一定程度上抑制野生型和突变型ADAMTS13裂解vWF的能力。结论:间隔区突变后ADAMTS13的活性降低。ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)可能是ADAMTS13在底物识别时的重要作用位点。

血管性血友病研究进展

血管性血友病(Von willebrand disease,VWD)是一种由血管性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)基因缺陷引起的出血性疾病,呈常染色体遗传.VWD患者幼年即出现一系列出血相关症状,如黏膜、关节腔内或颅内出血等,女性患者常伴有月经过多、持续时间过长等症状.VWD有3种类型:1型是v WF血浆浓度部分不足;2型是v WF功能障碍,又分为2A、2B、2M和2N 4个亚型;3型是v WF血浆浓度完全缺失.上述3种类型和各亚型的发病机制间存在差异性,治疗方案亦不同.本文就VWD各分型的发病机制、临床表现、诊断及治疗等方面的研究进展进行了综述.

熊胆冻干粉针剂对内毒素休克大鼠血浆NOx及IL-10水平的影响

目的探讨熊胆冻干粉针剂(BBI)对内毒素休克大鼠血浆NOx及IL-10等细胞因子的影响。方法SD大鼠随机分为内毒素(ETX)组、BBI+ETX(BE)组和乳酸林格尔液+ETX(LE)组,观察BBI对大鼠血浆NO代谢产物NOx浓度和IL-10等细胞因子水平的影响。结果ETX注射5hBE组血浆NOx浓度〔(84.21±17.11)μmol/L〕低于ETX组〔(353.05±48.09)μmol/L〕,高于LE组〔(54.01±11.44)μmol/L〕;ETX注射2h、5hBE组血浆IL-10水平〔(540.39±78.18)pg/mL和(450.83±59.17)pg/mL〕高于LE组〔(428.04±99.09)pg/mL和(348.83±108.23)pg/mL〕,差异均有显著性(P<0.05)。结论BBI预处理可轻度提高内毒素休克大鼠血浆NOx及IL-10水平,维持了轻度的血管扩张促进了毒素的排除及炎症因子的清除,从而减轻了组织细胞的炎症损伤,提示静点BBI具有保护机体的免疫防御作用。

急性特发性血小板减少性紫癜与人细小病毒B19感染的关系

[目的]探讨儿童急性特发性血小板减少性紫癜(ITP)与人细小病毒B 19(HPVB 19)感染的关系.[方法]采用PCR方法对41例急性ITP患儿及40名健康儿童进行HPVB 19-DNA检测.[结果]41例急性ITP患儿中HPVB 19-DNA阳性者为16例,40例健康儿童中HPVB 19-DNA阳性者为4例,急性ITP患儿中HPVB 19-DNA阳性者明显多见于健康儿童.[结论]儿童急性ITP可能与HPVB 19感染有相关性.

ADAMTS13在动脉粥样硬化中的作用

目的:观察血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)对动脉粥样硬化小鼠模型的影响及机制。方法:分别以高脂肪西方饮食喂养6周龄的野生型小鼠(WT)、载脂蛋白E缺陷(ApoE-/-)和ADAMTS13缺陷小鼠(Adamts13-/-)及ADAMTS13基因敲除的载脂蛋白E缺乏(Adamts13-/-ApoE-/-)小鼠12周,处死小鼠分离主动脉,用油红O染色后采用NIH ImageJ软件量化分析动脉硬化程度;采用Western blot分析小鼠血浆中血管性血友病因子(VWF)多聚体的分布,同时检测总胆固醇、高密度脂蛋白和甘油三酯水平。结果:与ApoE-/-小鼠比较,Adamts13-/-ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化病变显著增加(P<0.05);与ApoE-/-小鼠或者野生型小鼠相比较,Adamts13-/-ApoE-/-和Adamts13-/-小鼠血浆中超大分子VWF多聚体(UL-VWF多聚体)明显增加(P<0.01),血脂结果显示Adamts13-/-ApoE-/-小鼠血浆高密度脂蛋白水平高于ApoE-/-小鼠(P<0.05)。结论:ADAMTS13可能通过降解UL-VWF多聚体,抑制血小板聚集和炎症反应,从而减慢动脉粥样硬化发展中的进程。

双向签名避免护患纠纷

随着社会的进步和各项法律、法规的不断完善、颁布和实施，患者维护健康权、就医权的意识越来越强，对医护人员的要求越来越高。医护人员所处的环境也越来越具风险，就护理工作而言，如稍有不慎，就可引发各种护理纠纷。笔者通过多年的临床观察及经验总结认识到，纠纷的产生是双方面的，避免和预防纠纷的发生也应该是护患双方的互动行为。因此，我们实行了双向签名制，收到了良好的效果。

铜绿假单胞菌的临床分布及耐药性分析

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginos，PAE）是一种条件致病菌，为非发酵性革兰阴性杆菌，一般存在于周围环境、皮肤、呼吸道、肠道等部位，在抵抗力低下的情况下，容易引起化脓性炎症及全身性感染，因对抗生素敏感性低、耐药性高，病死率随之提高，成为院内感染的主要致病菌，ICU 感染率尤为突出，ICU 患者病情危重，免疫力极为低下，并气管插管、导尿、呼吸机的应用等侵袭性治疗等均有关［2］。近年来，由于广谱抗菌药的广泛应用，感染率及耐药率逐渐增加，并出现多种药物产生交叉耐药和多重耐药，给临床治疗带来了极大的困难。因此，加强对铜绿假单胞菌的耐药性监测，给予临床医师在预防和治疗 PAE 感染中正确指导、合理选用抗菌药物尤为重要。对我院2012年1月-2013年12月两年间临床采集标本中分离的铜绿假单胞菌耐药性进行监测，并分析其耐药性。

肝癌合并巨大舌鳞状细胞乳头状瘤1例

患者,男,47岁,因反复口腔溃疡3年,舌变大1年,伴疼痛1个月于2012年6月17日入院。患者于3年前开始反复出现口腔溃疡,未予以重视,到附近诊所就诊,口服用药症状无改善,具体用药情况不详,后就诊于多个口腔医院,未能明确诊断,自行用药症状亦未见好转,于1年前开始伴有舌变大,1个月前伴疼痛,口服镇痛药物,症状无改善,就诊我院门诊发现口腔散在溃疡,舌黏膜增生,伴疼痛,拟诊口腔溃疡查因收入风湿免疫科诊治。

血管性血友病因子裂解酶在血栓性血小板减少性紫癜中的作用研究进展

栓性血小板减少性紫癜(TTP)是一种以微血管病性溶血性贫血、血小板减少、中枢神经系统症状、发热及肾脏损害为主要临床表现的罕见疾病,发病率约为1/100万[1-2],未及时给予治疗时死亡率可达90%[3].1982年,MOAKE等[4]在TTP患者的血浆中发现了高黏附性的“超大”血管性血友病因子(VWF)多聚体,认为TTP是由血浆中VWF裂解酶缺乏所致.