NERP-1对大鼠下丘脑室旁核MNCs活动的影响机制

目的分析神经内分泌调节肽(NERP)-1对大鼠下丘脑室旁核(PVN)神经分泌大细胞(MNCs)活动的影响及其对PVN MNCs活动调节的突触机制。方法实验动物选用出生2~3周龄的雄性Wistar系大鼠,异氟烷麻醉后立即断头取出脑,随后用振动切片机制备厚度为250μm的含PVN的下丘脑切片。在室温(24~25℃)条件下,将切片置于持续充有混合气体(95%O_(2)和5%CO_(2))的人工脑脊液中孵育1 h以上。电极的阻抗为5~7 MΩ。使用膜片钳放大器(Axopatch-200B)及Clampex数据采集软件记录PVN神经分泌细胞的电活动,NERP-1、河豚毒素(TTX)和犬尿喹啉酸(KYC)经蠕动泵灌流给药。在电生理记录结束后,用4%多聚甲醛溶液将脑片行固定24 h后,进行二氨基联苯胺(DAB)染色、显微照相,观察所记录神经分泌细胞的组织形态学特点,确认所记录细胞为PVN NMCs。使用Clampfit10.4和MiniAnalysis(6.0)软件进行电生理实验数据分析。结果在电流钳记录模式下,PVN MNCs对去极化电流刺激表现出明显的外向整流电流。给予NERP-1(100 nmol/L)可导致PVN神经分泌大细胞的放电频率显著降低并伴随膜电位超极化,冲洗后恢复到给药前水平。给予非选择性离子型谷氨酸受体拮抗剂犬KYC可阻断NERP-1引起的PVN MNCs放电频率降低和膜超极化作用。NERP-1对PVN MNCs的自发性放电活动的抑制作用不受GABAA受体阻断剂的影响。在电压依存性钠通道阻断剂TTX的存在下,NERP-1显著降低NMCs的微小兴奋性突触后电流(mEPSCs)的发生频率,但对mEPSCs的振幅没有显著影响。结论NERP-1下调下丘脑PVN MNCs兴奋性谷氨酸能传入效能,降低PVN MNCs的兴奋性,提示NERP-1通过间接方式调节PVN缩宫素和血管紧张素神经元的分泌活动。