基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶条件的优化

目的 优化苷磷酸化酶（包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶）基因工程菌的发酵表达条件。方法通过工程菌摇瓶培养，测定吸光度D值，考马斯亮蓝（Bradford）法测定蛋白，SDS—PAGE电泳和凝胶成像扫描分析表达量，优化表达条件；通过正交试验优化50L发酵罐发酵条件。结果摇瓶培养起始pH为7．0～7．2，于30℃培养4h，加入终浓度为0．4mmol／L的异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导8h后收获菌体，可得到较高的生物量和重组酶蛋白表达量。50L发酵罐的最佳条件为起始pH为7．0～7．2，于32oC培养4h，加入终浓度为0．4mm01／L的IPTG诱导9h后收获菌体，每升发酵液可得2g以上的酶蛋白。结论基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶产量较高，可工业化生产．为酶法合成核苷酸类似物的研究奠定了基础。

固定化核苷磷酸化酶的制备及其性质研究

目的优化核苷磷酸化酶的固定化工艺,并对固定化酶的性质进行研究。方法通过正交试验优化核苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)固定化条件,并进一步对固定化核苷磷酸化酶的最适p H、温度及其稳定性进行研究。结果固定化酶条件为p H=8.0,温度为25℃,蛋白载量为20 mg/g载体,固定化时间为6 h;固定化核苷磷酸化酶的最适p H=7.5,最适温度为40℃,固酶连续使用20批次酶活力无明显损失。结论固定化核苷磷酸化酶稳定可靠,适合应用于工业化生产。

离子色谱法测定丁二磺酸腺苷蛋氨酸中的丁二磺酸含量

目的建立丁二磺酸腺苷蛋氨酸产品中的丁二磺酸含量检测方法。方法离子色谱法电导检测器;阴离子色谱柱;碳酸盐溶液(含1mmol/L Na2CO3和4mmol/L NaHCO3)-丙酮(95:5)作为流动相;流速1.2ml/min;理论板数按丁二磺酸峰计算不低于3000。结果检验重复性好,在10～200mg/L的进样浓度范围内,丁二磺酸浓度与峰面积的线性关系良好,r=0.9996;平均回收率为98.53%。结论该检验方法简便、准确、专属性强。

丁二磺酸腺苷蛋氨酸冻干工艺研究

为建立合适的丁二磺酸腺苷蛋氨酸冻干工艺,采用真空冷冻干燥法,对丁二磺酸腺苷蛋氨酸冻干条件如共晶点、装量、预冻程序、升华温度、升华真空度及解吸干燥温度等进行研究。结果显示:冻干工艺:装量为液面高度小于10 mm,预冻程序为预冻至-40℃,然后回温至-10℃,再降至-50℃,在真空度10～30 Pa,-25℃下升华,35℃解吸干燥。此工艺制备的丁二磺酸腺苷蛋氨酸外观好,产品质量符合国家标准。