CircCSNK1G1调节miR-381-3p/Skp2轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的研究

目的探究CircCSNK1G1调节miR-381-3p/S期激酶相关蛋白2(Skp2)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法将HGC-27细胞分为未转染组、si-NC组、si-CircCSNK1G1组、si-CircCSNK1G1+anti-miR-NC组、si-CircCSNK1G1+anti-miR-381-3p组。qRT-PCR分别检测GC肿瘤组织和GC不同细胞系中CircCSNK1G1、miR-381-3p、Skp2 mRNA的表达;MTT法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆数量;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell小室法测定细胞迁移和侵袭能力;Western Blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达;双荧光素酶实验验证CircCSNK1G1、miR-381-3p、Skp2三者的靶向关系。结果与癌旁组织和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,GC肿瘤组织和GC细胞系中的CircCSNK1G1、Skp2 mRNA高表达,miR-381-3p低表达(P<0.05),且HGC-27细胞中miR-381-3p表达水平最低,CircCSNK1G1、Skp2 mRNA表达最高,因此后续选用HGC-27细胞并敲低CircCSNK1G1进行实验。与未转染组和si-CircCSNK1G1-NC组相比,转染si-CircCSNK1G1能够降低HGC-27细胞中CircCSNK1G1、Skp2 mRNA表达、细胞增殖活性、细胞迁移数以及Vimentin蛋白表达(P<0.05),提高miR-381-3p的表达、细胞凋亡率和E-cadherin蛋白表达(P<0.05)。双荧光素酶实验验证了CircCSNK1G1、Skp2均与miR-381-3p存在靶向关系,而且CircCSNK1G1可作为miR-381-3p的海绵RNA,进一步调节Skp2的表达和活性。结论敲低CircCSNK1G1能够靶向上调miR-381-3p表达,抑制Skp2表达,进而促进GC细胞凋亡,抑制其增殖和迁移。

参芎葡萄糖注射液联合前列地尔脂微球载体注射液治疗下肢动脉硬化闭塞症的临床观察

目的观察参芎葡萄糖注射液联合前列地尔脂微球载体注射液治疗下肢动脉硬化闭塞症的疗效及安全性。方法选择下肢动脉硬化闭塞症患者80例随机均分为对照组和治疗组,2组患者均给予降压、降糖、调脂、抗感染等常规治疗。在此基础上,对照组给予尿激酶15万单位(溶解于15 m L 0.9%氯化钠中)+山莨菪碱注射液10 mg交替股动脉注射,qod,5 d为1个疗程,间隔3d,再用1个疗程。治疗组给予前列地尔脂微球载体注射液10μg(溶解于10 m L 0.9%氯化钠中)静脉慢推+参芎葡萄糖注射液200m L静脉滴注,qd,疗程14 d。观察2组患者的临床疗效;治疗前后临床主要症状、体征积分变化情况;全血黏度、高敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、纤维蛋白原、踝-肱指数(ankle-brachial index,ABI)、足背动脉内径及峰值流速(peak systolic velocity,PSV)改善情况;治疗后不良反应发生情况。结果治疗组(有效率90.0%)临床疗效明显优于对照组(有效率72.5%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗组在改善肢体发凉、麻木,降低全血黏度、hs-CRP,升高ABI值方面作用更加显著(P<0.05);治疗期间治疗组未出现不良反应事件,对照组2例患者出现轻微口干,差异无统计学意义。结论参芎葡萄糖注射液联合前列地尔脂微球载体注射液治疗下肢动脉硬化闭塞症疗效显著,安全可靠。

尼莫地平对蛛网膜下腔出血大鼠海马CA1区自噬的影响

目的探讨尼莫地平对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马CA1区自噬的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠48只,按随机数字表法分为Sham组(假手术组,12只)、SAH组(12只)、NMDP组(SAH+尼莫地平,12只)、3-MA组(SAH+尼莫地平+3-甲基腺嘌呤,12只)。颈内动脉刺破法制备SAH动物模型。NMDP组造模成功后30 min腹腔注射尼莫地平。3-MA组于造模前1 h腹腔注射3-MA,且造模后30 min腹腔注射尼莫地平。干预24 h后给予穿梭箱实验观察大鼠神经功能,随后取海马CA1区脑组织进行苏木素-伊红染色观察细胞形态,免疫组化及Western blotting观察自噬相关蛋白[Beclin-1及微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)]的表达。结果与Sham组比较,SAH组大鼠躲避反应次数减少[(17. 9±2. 6)次比(26. 3±2. 7)次],躲避反应时间延长[(10. 0±3. 3) s比(3. 5±1. 0) s],海马CA1区正常形态神经细胞数目减少[(72±28)个比(118±27)个,P <0. 05],Beclin-1及LC3-Ⅱ阳性细胞增多[分别为(39±9)个比(22±11)个、(39±12)个比(12±5)个],Beclin-1蛋白表达水平升高(0. 59±0. 12比0. 36±0. 03),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率上升(0. 51±0. 13比0. 20±0. 05),差异均有统计学意义(均P <0. 05);与SAH组比较,NMDP组大鼠躲避反应次数[(22. 3±2. 3)次]增多,躲避反应时间[(5. 0±1. 5) s]减少,海马CA1区正常神经细胞数目[(86±20)个]增多,Beclin-1及LC3-Ⅱ阳性细胞[分别为(50±11)、(48±11)个]增多,Beclin-1蛋白表达水平(0. 97±0. 24)增高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率(0. 87±0. 12)上升,差异均有统计学意义(均P <0. 05),而3-MA组大鼠各项差异均无统计学意义(均P>0. 05)。结论尼莫地平可增强自噬的激活,减少海马CA1区神经细胞损伤,改善大鼠的神经功能。

进展期直肠癌新辅助放化疗疗效评估模型的建立及评价:基于MRI和网状蛋白1C

目的建立基于MRI和网状蛋白1C(RTN-1C)的进展期直肠癌新辅助放化疗疗效评估模型并评价该模型的效能。方法选取2018年8月~2020年11月在开滦总医院林西医院就诊的134例进展期直肠癌患者作为研究对象,并根据是否达到病理学完全缓解将其分为2组:完全缓解组(n=39)和未完全缓解组(n=95)。用Ficoll密度梯度分离法获取外周血中单个核细胞,用蛋白质免疫印迹法检测单个核细胞中RTN-1C表达量。用Logistic回归分析进展期直肠癌新辅助放化疗疗效的风险因素,并构建上述风险因素的列线图回归模型;用ROC曲线、校准曲线和决策曲线分析评价预测模型的价值。结果完全缓解组的容积转运常数(Ktrans)、血管外细胞外间隙容积比(Ve)、回流速率常数(Kep)和RTN-1C相对表达量均高于未完全缓解组(P<0.05);表观弥散系数(ADC)低于未完全缓解组[(0.88±0.05)×10^(-3) mm^(2)/s vs(0.92±0.05)×10^(-3) mm^(2)/s,P<0.05]。Logistic回归分析结果显示T4期和高ADC值是进展期直肠癌新辅助放化疗疗效独立危险因素(P<0.05),高Ktrans值、高Ve值和高RTN-1C相对表达量是进展期直肠癌新辅助放化疗疗效的独立保护因素(P<0.05)。当阈值概率在0.39%~0.42%,0.75%~0.80%和0.86%~0.88%时,模型B评价进展期直肠癌新辅助放化疗疗效的净收益高于模型A;当阈值概率在其他范围时,模型A评价进展期直肠癌新辅助放化疗疗效的净收益高于模型B。结论基于MRI和RTN-1C构建的模型A对进展期直肠癌新辅助放化疗疗效有较高的区分度、校准度和临床应用价值,可辅助临床做出更好决策。

改良LIFT术与切开挂线引流术治疗复杂性肛瘘的临床比较

目的比较改良LIFT术与切开挂线引流术治疗复杂性肛瘘的临床疗效。方法选取本院收治的复杂性肛瘘患者108例,其中观察组54例采用改良LIFT术,对照组54例采用传统切开挂线引流术,比较两组疗效、疾病恢复、并发症和复发率等指标。结果观察组治疗总有效率(98.15%)与对照组治疗总有效率(92.59%)比较差异不显著(P>0.05);观察组住院时间、切口愈合时间、切口愈合面积、愈后Wexner评分、术后7 d VAS评分均优于对照组(P<0.05);两组并发症发生率和复发率比较差异不显著(P>0.05)。结论相对于切开挂线引流术,改良LIFT术治疗复杂性肛瘘可有效缩短患者住院和切口愈合时间,减轻术后疼痛,并较好保留肛门功能。

超声低、高频率联合应用诊断上消化道穿孔的价值

上消化道穿孔是最常见的急腹症之一,明确诊断是临床制定治疗方案的关键。X线腹片检查发现气腹是诊断本病的重要征象,但不能确定穿孔部位[1]。本组回顾性分析经我院手术确诊的45例上消化道穿孔患者的超声检查情况,旨在探讨低、高频超声联合应用对其的诊断价值。资料与方法一、临床资料选取2007年1月至2013年10月我院收治的45例上消化道穿孔患者,其中男40例,女5例,年龄5~80岁,平均45岁。

miR-142-3p和SKP2在老年结直肠癌患者肿瘤组织中的表达及临床意义

目的:检测miR-142-3p和S期激酶相关蛋白2(SKP2)在老年结直肠癌患者肿瘤组织中的表达,探讨二者的关系及临床意义。方法:选择2015年1月至2016年11月在本院就诊并手术治疗的老年结直肠癌患者的肿瘤组织标本60份作为结直肠癌组,相应癌旁组织标本作为对照组。采用qRT-PCR法检测结直肠癌组织与癌旁组织中miR-142-3p和SKP2 mRNA表达水平,免疫组织化学染色检测SKP2蛋白表达水平,Pearson法分析miR-142-3p和SKP2表达的相关性,分析二者与结直肠癌临床病理特征及预后的关系。结果:miR-142-3p在结直肠癌组织中表达水平低于正常结直肠黏膜组织(P<0.05),SKP2在结直肠癌组织中表达水平高于癌旁组织(P<0.05);miR-142-3p和SKP2表达水平与结直肠癌分化程度及淋巴转移有关(P<0.05);miR-142-3p高表达组患者3年生存率显著高于miR-142-3p低表达组,SKP2高表达组患者3年生存率显著低于SKP2低表达组(P<0.05);淋巴结转移、分化程度低、miR-142-3p低表达、SKP2高表达是结直肠癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05);结肠癌组织中miR-142-3p与SKP2 mRNA表达水平呈负相关(P<0.05)。结论:老年结直肠癌患者肿瘤组织中miR-142-3p低表达、SKP2高表达,且二者与患者生存质量有关,可能成为评价结直肠癌预后的标志物。

黏膜皮瓣推进术与括约肌间瘘管结扎术治疗复杂肛瘘的临床疗效比较

目的探讨黏膜皮瓣推进术与括约肌间瘘管结扎术治疗复杂性肛瘘的效果。方法将98例复杂性肛瘘患者分为黏膜皮瓣推进术组(n=41)和括约肌间瘘管结扎术(LIFT)组(n=57)。比较两组治愈率,记录手术时间、住院时间、创口愈合时间、肛门失禁发生率、复发率,术后进行视觉模拟评分(VAS)评估疼痛程度,术前、术后进行Wexner肛门失禁评分系统评估肛门功能。结果黏膜皮瓣推进术组治愈率、轻中度肛门失禁率比较,差异无统计学意义(P>0.05);黏膜皮瓣推进术组手术时间、住院时间、创面愈合时间长于LIFT组,术后3dVAS评分高于LIFT组,术后1个月、随访末期Wexner评分高于LIFT组,差异均有统计学意义(P<0.05);黏膜皮瓣推进术组复发率高于LIFT组(P<0.05)。结论黏膜皮瓣推进术和LIFT治疗复杂性肛瘘治愈率基本一致,但与黏膜皮瓣推进术相比,LIFT可缩短手术时间和创面愈合时间、减轻术后短时间内疼痛、更好地保护肛门功能。

基于MRI和miRNA-1180-3p的进展期直肠癌新辅助放化疗疗效评估模型的构建及验证

目的构建基于磁共振功能成像(MRI)和微小核糖核酸-1180-3p(miR-1180-3p)的模型评估进展期直肠癌新辅助放化疗疗效并验证其效能。方法选取131例开滦总医院林西医院普外科2018年8月至2021年3月的进展期直肠癌患者,给予新辅助放化疗,根据治疗后是否达到病理学完全缓解(pCR)分为pCR组(n=38)和非pCR组(n=93)。用RT-qPCR法检测治疗前1周内(T0)和治疗1周后(T1)血清中miR-1180-3p水平;用受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-1180-3p判断治疗疗效的价值,用Logistic回归分析治疗疗效的风险因素,构建风险因素的模型,用一致性指数(C-index)、校准曲线和决策曲线分析法(DCA)评价模型效能。结果pCR组的T0-miR-1180-3p和T1-miR-1180-3p水平均高于非pCR组(P<0.05),两组的T1-miR-1180-3p水平均高于T0-miR-1180-3p(P<0.05)。pCR组的容积转运常数(K^(trans))、血管外细胞外间隙容积比(V_(e))和回流速率常数(K_(ep))均高于非pCR组,表观弥散系数(ADC)低于非pCR组(P<0.05)。高ADC值是治疗后pCR独立危险因素(P<0.05),高K^(trans)值、高V_(e)值和高T1-miR-1180-3p是治疗后pCR的独立保护因素(P<0.05)。模型A(由K^(trans)值、V_(e)值和ADC值组成)的C-index为0.950,低于模型B(由K^(trans)值、V_(e)值、ADC值和T1-miR-1180-3p组成,0.986);两模型的校准曲线均未偏离理想曲线;模型A的净收益低于模型B。结论基于MRI和miR-1180-3p构建的模型有较高的区分度、校准度和临床应用价值,可用于进展期直肠癌新辅助放化疗疗效评估。

Skp2/p27轴在结直肠癌发生发展中的作用机制研究

目的探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)/p27轴参与结直肠癌(CRC)发生发展的分子机制,并初步研究其对CRC细胞LS513增殖、迁移侵袭及裸鼠成瘤能力的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Skp2和p27在CRC组织、癌旁组织以及人正常结肠上皮细胞CCD841CoN、不同CRC细胞株LS513、SW480、HT29和SW620中的表达。取生长密度达50%~60%的LS513癌细胞转染pSUPER-siRNA NC或pSUPER-siRNA Skp2,分别记为siRNA NC组和siRNA Skp2组,另取未转染LS513癌细胞(LS513组)。转染或培养24小时后,CCK-8法检测细胞增殖活性;Transwell小室法检测细胞迁移侵袭能力;裸鼠成瘤实验检测细胞在动物体内成瘤能力;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞中Skp2、p27、p21、p57和CKS1蛋白表达水平。结果与癌旁组织、CCD841CoN细胞相比,CRC组织、LS513、SW480、HT29和SW620癌细胞中Skp2 mRNA和蛋白表达水平显著升高,p27 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与LS513组、siRNA NC组相比,siRNA Skp2组细胞Skp2、CKS1蛋白表达水平、细胞增殖、迁移、侵袭及动物体内成瘤能力显著降低(P<0.05),p27、p21、p57蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论Skp2/p27轴参与CRC发生发展,干扰Skp2可增高CRC细胞中p27等抑癌蛋白表达,降低CKS1蛋白表达,抑制CRC细胞生长及迁移侵袭。

腹部闭合性损伤致肠穿孔的超声诊断价值

目的:探讨腹部闭合性损伤致肠穿孔的超声诊断价值。方法:随机选取我院2006年1月-2014年8月间腹部闭合性损伤患者120例,其中术后病理证实肠穿孔患者48例,非肠穿孔患者72例,术前均在发病3小时内经超声及X线腹片检查。超声对120例患者以"双层气体征"及"小气泡征"方法进行腹腔游离气体的扫查,并与X线腹片检查结果进行对照;观察肠壁节段性或局部增厚、局部肠管的扩张及肠管麻痹征、肠间局限性积液、大网膜"包裹征"、"填塞征"及"聚集征"等征象且与术后病理结果相对照,判断是否存在肠穿孔。分析各种征象,评价其在诊断腹部闭合性损伤致肠穿孔中的敏感性及特异性。结果:48例肠穿孔患者中通过观察"双层气体征"及"小气泡征"发现腹腔游离气体44例(91.7%),高于X线发现膈下游离气体35例(72.9%,P<0.05)。腹部闭合性损伤致肠穿孔的超声征象包括:膈下及腹壁下游离气体40例[敏感性83.3%(40/48),特异性100%(72/72)],肠间局限性积液内及组织周边"小气泡征"44例[敏感性91.7%(44/48),特异性98.6%(71/72)],肠壁节段性或局部增厚25例[敏感性52.1%(25/48),特异性97.2%(70/72)],及大网膜"包裹征"、"填塞征"及"聚集征"18例[敏感性37.5%(18/48),特异性95.8%(69/72)]。结论:超声在快速诊断腹部闭合性损伤致肠穿孔中具有较高的价值。

辛伐他汀可刺激骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:辛伐他汀可显著刺激骨髓间充质干细胞成骨分化,但机制不明。近年研究证实p38 MAPK信号通路参与调控骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的过程。目的:观察p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路在辛伐他汀体外干预刺激骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用。方法:分离培养SD大鼠股骨和胫骨骨髓间充质干细胞,第2代骨髓间充质干细胞分为3组:对照组、辛伐他汀组(加入10^-7 mol/L辛伐他汀)、阻断剂组(加入辛伐他汀30 min前给予10μmol/L p38MAPK信号通路特异性阻断剂SB203580),均使用含有10 mmol/Lβ-甘油酸磷酸钠、50 mg/L抗坏血酸的DMEM完全培养基进行成骨诱导分化。各组干预第6天进行碱性磷酸酶染色;第6天和第12天采用Western blot法检测p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK的表达;第12天采用免疫荧光染色和实时荧光定量聚合酶链反应检测骨钙素、Ⅰ型胶原的表达;第21天茜素红染色观察钙结节形成情况。结果与结论:①辛伐他汀组碱性磷酸酶表达和基质矿化能力显著高于对照组,阻断剂组显著低于辛伐他汀组(P<0.05);②辛伐他汀组磷酸化p38 MAPK与p38 MAPK比值高于对照组(P<0.05),阻断剂组低于辛伐他汀组(P<0.05);③辛伐他汀可以促进骨钙素和Ⅰ型胶原的表达,而阻断剂组显著低于辛伐他汀组(P<0.05);④结果表明,辛伐他汀可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,这一作用可能与促进p38 MAPK磷酸化进而提高该通路活性有关。

辛伐他汀联合利塞膦酸钠对地塞米松诱导大鼠骨丢失的作用

目的分析辛伐他汀和利塞膦酸钠单独使用和联合使用对地塞米松诱导的大鼠骨质疏松的作用。方法本研究使用雌性3月龄SD大鼠,分为五组(每组8只):对照组、骨质疏松模型组、辛伐他汀组、利塞膦酸钠组和联合用药组。除对照组外,其余各组大鼠皮下注射地塞米松(2.5 mg,每周2次),药物干预组分别给予辛伐他汀5 mg/kg、利塞膦酸钠0.1 mg/kg和两者联合干预,均为每天1次,8周后处死所有大鼠取材。取左侧股骨检测其骨密度后,采用三点弯曲实验分析其最大载荷,取左侧胫骨经微计算机断层扫描技术(micro-CT)检测近端松质骨骨量及微观结构参数。取右侧股骨脱钙石蜡包埋,采用免疫组织化学染色检测OPG和RANKL的表达,提取右侧胫骨RNA,检测骨保护素(OPG)和破骨细胞分化因子(RANKL)的表达。结果(1)骨密度:模型组(0.207±0.02)g/cm^2显著低于其余各组,辛伐他汀组(0.226±0.023)g/cm^2、利塞膦酸钠组(0.237±0.021)g/cm^2显著低于对照组(0.282±0.013)g/cm^2、联合用药组(0.257±0.012)g/cm^2(P<0.05)。(2)生物力学:最大载荷:模型组(90.2±7.1)显著低于对照组和联合用药组(P<0.05)。(3)micro-CT:模型组骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁体积分数(BV/TV)显著低于其他4组,骨小梁分离度(Tb.Sp)显著高于其他4组(P<0.05),辛伐他汀组(21.6±2.8)、利塞膦酸钠组(21.9±2.6)BV/TV显著低于对照组(29.5±2.7)、联合用药组(25.3±2.9),Tb.Sp显著高于对照组(P<0.05)。(4)免疫组化染色:OPG:模型组、利塞膦酸钠组、联合用药组均显著低于对照组(P<0.05),C组和E组显著高于模型组(P<0.05)。模型组、辛伐他汀组、利塞膦酸钠组、联合用药组RANKL的表达均显著高于对照组(P<0.05),E组显著低于模型组(P<0.05)。(5)PCR:模型组(0.74±0.17)OPG表达显著低于对照组(1.00±0.16)、辛伐他汀组(1.27±0.19)(P<0.05);RNAKL在模型组表达显著高于其余各组(P<0.05),辛伐他汀组(1.31±0.16)显著高于对照组(1.00±0.18)。结论地塞米松可诱发建立大鼠骨丢失模型,辛伐他汀和利塞膦酸钠联合应用治疗可部分阻止该模型骨丢失和骨质量下降,效果优于单独用药。

三种内固定方式治疗髋臼横行后壁骨折后髋臼接触特性的生物力学比较

背景:髋臼横行后壁骨折是常见的复杂髋臼骨折类型,目前多采用手术切开复位内固定方法进行治疗,主要内固定装置包括后柱重建钢板、后柱重建钢板联合前柱拉力螺钉及后壁螺钉、后柱锁定重建钢板联合后壁半皮质螺钉等。目的:通过模拟髋臼横行后壁骨折,利用压敏片技术测量并探讨3种内固定方式固定髋臼横行后壁骨折后,髋臼关节面的应力特性。方法:12具新鲜成人骨盆标本按随机数字表法分成3组,每组4具。将每组的髋臼成功造模后,按固定方式的不同分成3组。A组进行髋臼后柱重建钢板;B组:髋臼后柱重建钢板联合前柱拉力螺钉、后壁拉力螺钉固定;C组:髋臼后柱锁定重建钢板固定。将制备成"柳叶状"的股骨头压敏片贴于股骨头上,于单足站立位进行轴向载荷实验。分别测量各组髋臼关节面的应力集中面积及峰值应力。结果与结论:当载荷为600 N时,A组髋臼关节面面积小于B组和C组,而峰值应力值大于B组和C组;B组与C组髋关节面面积以及峰值应力差异无显著性意义(P>0.05)。说明髋臼横行后壁骨折在进行内固定治疗时,应用后柱重建钢板联合前柱拉力螺钉、后壁螺钉以及锁定重建钢板联合后壁半皮质螺钉可增加髋臼关节面的接触面积,降低固定后髋臼关节面的应力集中。髋臼后柱锁定重建钢板在治疗髋臼横行后壁骨折时的生物力学特性与应用髋臼后柱重建钢板联合前柱拉力螺钉及后壁拉力螺钉固定相当。

miR-211-5p和p27^Kip1在原发性胃癌组织中的表达水平与临床病理学特征的相关性研究

目的探究miR-211-5p和p27^Kip1在胃癌组织中的表达水平,以及其与患者临床病理学特征和预后的关系。方法收集2015年8月至2016年8月在开滦总医院林西医院接受手术治疗的60例胃癌患者的临床资料,采用实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学法检测胃癌组织、癌旁组织(距离肿瘤边缘>2 cm)中miR-211-5p和p27^Kip1的表达水平。探讨miR-211-5p和p27^Kip1阳性率与患者的临床病理学特征和预后的相关性。采用Kendall′s tau-b等级相关系数分析miR-211-5p与p27^Kip1表达的相关性。结果与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-211-5p的阳性率显著升高,而p27^Kip1的阳性率则显著降低。miR-211-5p和p27^Kip1的阳性率与患者的TNM分期、淋巴结转移和浸润深度有关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤位置和大小不相关(P>0.05)。miR-211-5p与p27^Kip1在胃癌组织中的表达水平呈负相关(r=-0.455,P<0.031),miR-211-5p阳性表达者的3年生存率显著低于阴性表达者(log-rankχ^2=19.85,P<0.0001);而p27^Kip1阳性表达者的3年生存率则高于阴性表达者(log-rankχ^2=17.53,P<0.0001)。结论在胃癌组织中miR-211-5p呈高表达,p27^Kip1呈低表达,两者呈负相关,且其表达水平的异常提示胃癌患者的预后不良。

纳洛酮对蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经细胞自噬的影响

目的探讨纳洛酮对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马区神经细胞自噬的影响。方法将108只健康雄性清洁级SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、SAH组、纳洛酮组,每组36只。假手术组只进行造模手术不刺破血管,SAH组利用颈内动脉穿刺法制成大鼠SAH动物模型,纳洛酮组在造模成功后立即给予纳洛酮(1 mg∕kg体质量)腹腔注射,每12小时注射1次,用药至处死的各时相点。假手术组和SAH组采用同样方法注射同等体积的0.9%氯化钠溶液。每组又按6 h、24 h、72 h时间点分为3个亚组(每个亚组12只SD大鼠)。穿梭箱实验观察三组大鼠的行为学变化;苏木素-伊红(HE)染色观察海马区神经细胞形态变化;免疫组织化学检测自噬特异性标志物Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)在大鼠海马区神经细胞的表达。结果与假手术组相比,SAH组6 h、24 h、72 h各时间点逃避反应次数减少[(24.83±3.24)次比(14.41±1.98)次,(25.33±2.64)次比(16.25±2.18)次,(25.16±2.82)次比(18.33±2.57)次](P<0.05),逃避反应时间增加[(3.54±0.99)s比(9.09±1.38)s,(3.55±0.84)s比(8.73±1.13)s,(3.54±0.83)s比(8.00±1.04)s](P<0.05),海马区正常神经细胞数量减少[(122.67±5.55)个比(84.25±12.63)个,(122.25±5.50)个比(75.58±11.11)个,(121.58±5.68)个比(67.75±10.55)个](P<0.05),表达Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的阳性细胞数量增高[(20.50±3.45)个比(31.41±4.96)个,(20.33±2.77)个比(47.67±7.35)个,(20.50±3.59)个比(43.17±6.46)个;(17.08±3.00)个比(27.42±3.40)个,(17.50±2.31)个比(39.83±4.67)个,(17.41±2.57)个比(31.50±4.06)个](P<0.05)。与SAH组比较,纳洛酮组各时间点逃避反应次数增多[(14.41±1.98)次比(16.50±1.93)次,(16.25±2.18)次比(19.25±2.30)次,(18.33±2.57)次比(22.50±2.20)次](P<0.05),逃避反应时间减少[(9.09±1.38)s比(8.05±1.24)s,(8.73±1.13)s比(6.56±1.09)s,(8.00±1.04)s比(5.36±0.97)s](P<0.05),海马区正常神经细胞数量增多[(84.25±12.63)个比(94.75±11.06)个,(75.58±11.11)个比(84.50±9.21)个,(67.75±10.55)个比(77.33±9.88)个](P<0.05),表达Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的阳性细胞数量增高[(31.41±4.96)个比(36.17±4.06)个,(47.67±7.35)个比(57.58±6.68)个,(43.17±6.46)个比(52.75±7.35)个;(27.42±3.40)个比(30.92±4.19)个,(39.83±4.67)个比(48.33±5.66)个,(31.50±4.06)个比(38.58±5.40)个](P<0.05)。结论纳洛酮的干预可适度激活SAH大鼠海马区神经细胞自噬的表达,并具有脑保护作用。

skp2及p27Kip1蛋白与晚期胃癌患者临床预后的关系

目的探讨细胞S期激酶相关蛋白(skp)2及p27Kip1蛋白与晚期胃癌患者临床预后的关系。方法选取2013年5月至2015年1月开滦点医院林西医院收治130例晚期胃癌患者,免疫组化法检测skp2和p27Kip1蛋白表达水平,采用单因素和多因素Cox回归模型,探讨skp2和p27Kip1蛋白表达与晚期胃癌临床预后的关系。结果晚期胃癌组织skp2和p27Kip1阳性表达在不同卡氏功能状态(KPS)评分、肿瘤直径、手术、腹腔淋巴结转移、肝转移、临床分期及组织学分化患者中差异存在统计学意义(P<0.05),而性别、年龄、化疗、放疗及腹水等指标差异未见统计学意义(P>0.05)。年龄、KPS评分、肿瘤直径、手术、化疗、放疗、腹腔淋巴结转移、肝转移、腹水、临床分期、组织学分级、skp2蛋白表达和p27Kip1蛋白表达水平是晚期胃癌患者5年存活的影响因素。Cox回归分析结果显示,KPS评分(≤60分)、组织学分级(低分化)、腹腔淋巴结转移、skp2蛋白阳性表达和p27Kip1蛋白阴性表达是晚期胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论晚期胃癌组织中skp2蛋白阳性表达和p27Kip1蛋白阴性表达是晚期胃癌临床预后差的独立危险因素,可作为晚期胃癌治疗方案、预后评估等方面的有效指标。

异种皮作微粒皮移植覆盖物治疗深度烧伤效果观察

目的:探讨深度烧伤治疗中异种皮作微粒皮移植覆盖物的临床应用效果。方法:选取80例深度烧伤患者,依据随机数字表法分为观察组和对照组各40例。对照组采用异体皮作微粒皮移植覆盖物治疗,观察组采用异种皮作微粒皮移植覆盖物治疗,对2组患者术后第4周微粒皮成活率和创面愈合时间进行分析。结果:观察组患者的术后创面愈合时间显著短于对照组(P<0.01),但2组患者术后第4周微粒皮成活率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:深度烧伤治疗中异种皮作微粒皮移植覆盖物安全可行,术后愈合快,疗效与异体皮作微粒皮移植覆盖物治疗相当。

Skp2及p27kip1在原发性胃癌组织的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探究S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)及细胞周期素依赖的蛋白激酶抑制物(Cyclin dependent protein kinase inhibitor,p27kip1)在原发性胃癌组织的表达及si-Skp2对胃癌细胞增殖、凋亡和p27Kip1表达的影响。方法组织学实验:临床入组2018年12月~2021年12月唐山市开滦总医院林西医院归档的资料齐全完整的63例原发性胃癌患者,获得患者的癌组织和癌旁组织,通过qPCR对两组患者胃癌组织和胃癌旁组织Skp2和p27Kip1mRNA表达水平进行检测。细胞学实验,将人胃癌细胞SGC-7901分为对照组和si-Skp2组,对照组转染NC质粒,si-Skp2组转染si-Skp2质粒,CCK8法检测各组细胞24 h、48 h和72 h增殖能力,流式细胞分别分析两组细胞细胞存活、早期凋亡和晚期凋亡,Western blot检测两组细胞Skp2和p27kip1蛋白表达水平。结果组织学实验表明,相比于癌旁组织,癌组织中Skp2mRNA表达显著上升,p27Kip1表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。细胞学实验表明,与对照组相比,si-Skp2组细胞24 h、48 h和72 h细胞增殖能力显著降低;细胞存活显著降低、细胞晚期凋亡显著增加(P<0.01),细胞早期凋亡没有显著的统计学差异(P>0.05);Western blot实验表明si-Skp2组细胞Skp2表达显著降低,p27Kip1蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。结论原发性胃癌组织中Skp2表达显著高表达,p27Kip1显著低表达,si-Skp2具有显著抑制胃癌细胞增殖,促进细胞晚期凋亡的作用,其机制与p27Kip1的调控相关。

慢病毒介导miR-145对骨肉瘤MG-63细胞侵袭和迁移力的影响

目的探讨慢病毒介导miR-145对成骨肉瘤细胞MG-63侵袭及迁移能力的影响。方法通过慢病毒携带miR-145表达载体转染骨肉瘤MG-63细胞,实验分为:转染组(转染miR-145阳性序列)、对照组(转染阴性对照序列)、空白组(PBS)。利用生物信息学软件预测血管内皮生长因子(VEGF)为miR-145的候选靶基因,利用双荧光素酶报告基因检测验证miR-145对靶基因VEGF的直接调控作用。实时荧光定量PCR检测基因表达,Western-blot检测蛋白表达,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移运动能力。结果与对照组比较,转染组细胞内荧光素酶活性明显下降(P<0.05);与对照组和空白组比较,转染组miR-145mRNA的表达量显著增加(P<0.05),VEGF mRNA及蛋白表达量显著减少(P<0.05),穿膜细胞数及细胞划痕愈合率均显著降低(P<0.05)。结论 miR-145通过靶向VEGF基因,进而抑制骨肉瘤MG-63细胞的侵袭及迁移能力。