纳洛酮对蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经细胞自噬的影响

目的探讨纳洛酮对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马区神经细胞自噬的影响。方法将108只健康雄性清洁级SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、SAH组、纳洛酮组,每组36只。假手术组只进行造模手术不刺破血管,SAH组利用颈内动脉穿刺法制成大鼠SAH动物模型,纳洛酮组在造模成功后立即给予纳洛酮(1 mg∕kg体质量)腹腔注射,每12小时注射1次,用药至处死的各时相点。假手术组和SAH组采用同样方法注射同等体积的0.9%氯化钠溶液。每组又按6 h、24 h、72 h时间点分为3个亚组(每个亚组12只SD大鼠)。穿梭箱实验观察三组大鼠的行为学变化;苏木素-伊红(HE)染色观察海马区神经细胞形态变化;免疫组织化学检测自噬特异性标志物Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)在大鼠海马区神经细胞的表达。结果与假手术组相比,SAH组6 h、24 h、72 h各时间点逃避反应次数减少[(24.83±3.24)次比(14.41±1.98)次,(25.33±2.64)次比(16.25±2.18)次,(25.16±2.82)次比(18.33±2.57)次](P<0.05),逃避反应时间增加[(3.54±0.99)s比(9.09±1.38)s,(3.55±0.84)s比(8.73±1.13)s,(3.54±0.83)s比(8.00±1.04)s](P<0.05),海马区正常神经细胞数量减少[(122.67±5.55)个比(84.25±12.63)个,(122.25±5.50)个比(75.58±11.11)个,(121.58±5.68)个比(67.75±10.55)个](P<0.05),表达Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的阳性细胞数量增高[(20.50±3.45)个比(31.41±4.96)个,(20.33±2.77)个比(47.67±7.35)个,(20.50±3.59)个比(43.17±6.46)个;(17.08±3.00)个比(27.42±3.40)个,(17.50±2.31)个比(39.83±4.67)个,(17.41±2.57)个比(31.50±4.06)个](P<0.05)。与SAH组比较,纳洛酮组各时间点逃避反应次数增多[(14.41±1.98)次比(16.50±1.93)次,(16.25±2.18)次比(19.25±2.30)次,(18.33±2.57)次比(22.50±2.20)次](P<0.05),逃避反应时间减少[(9.09±1.38)s比(8.05±1.24)s,(8.73±1.13)s比(6.56±1.09)s,(8.00±1.04)s比(5.36±0.97)s](P<0.05),海马区正常神经细胞数量增多[(84.25±12.63)个比(94.75±11.06)个,(75.58±11.11)个比(84.50±9.21)个,(67.75±10.55)个比(77.33±9.88)个](P<0.05),表达Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的阳性细胞数量增高[(31.41±4.96)个比(36.17±4.06)个,(47.67±7.35)个比(57.58±6.68)个,(43.17±6.46)个比(52.75±7.35)个;(27.42±3.40)个比(30.92±4.19)个,(39.83±4.67)个比(48.33±5.66)个,(31.50±4.06)个比(38.58±5.40)个](P<0.05)。结论纳洛酮的干预可适度激活SAH大鼠海马区神经细胞自噬的表达,并具有脑保护作用。

尼莫地平对蛛网膜下腔出血大鼠海马CA1区自噬的影响

目的探讨尼莫地平对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马CA1区自噬的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠48只,按随机数字表法分为Sham组(假手术组,12只)、SAH组(12只)、NMDP组(SAH+尼莫地平,12只)、3-MA组(SAH+尼莫地平+3-甲基腺嘌呤,12只)。颈内动脉刺破法制备SAH动物模型。NMDP组造模成功后30 min腹腔注射尼莫地平。3-MA组于造模前1 h腹腔注射3-MA,且造模后30 min腹腔注射尼莫地平。干预24 h后给予穿梭箱实验观察大鼠神经功能,随后取海马CA1区脑组织进行苏木素-伊红染色观察细胞形态,免疫组化及Western blotting观察自噬相关蛋白[Beclin-1及微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)]的表达。结果与Sham组比较,SAH组大鼠躲避反应次数减少[(17. 9±2. 6)次比(26. 3±2. 7)次],躲避反应时间延长[(10. 0±3. 3) s比(3. 5±1. 0) s],海马CA1区正常形态神经细胞数目减少[(72±28)个比(118±27)个,P <0. 05],Beclin-1及LC3-Ⅱ阳性细胞增多[分别为(39±9)个比(22±11)个、(39±12)个比(12±5)个],Beclin-1蛋白表达水平升高(0. 59±0. 12比0. 36±0. 03),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率上升(0. 51±0. 13比0. 20±0. 05),差异均有统计学意义(均P <0. 05);与SAH组比较,NMDP组大鼠躲避反应次数[(22. 3±2. 3)次]增多,躲避反应时间[(5. 0±1. 5) s]减少,海马CA1区正常神经细胞数目[(86±20)个]增多,Beclin-1及LC3-Ⅱ阳性细胞[分别为(50±11)、(48±11)个]增多,Beclin-1蛋白表达水平(0. 97±0. 24)增高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率(0. 87±0. 12)上升,差异均有统计学意义(均P <0. 05),而3-MA组大鼠各项差异均无统计学意义(均P>0. 05)。结论尼莫地平可增强自噬的激活,减少海马CA1区神经细胞损伤,改善大鼠的神经功能。