LncRNA DLEU2通过自噬机制调节甲状腺乳头状癌细胞增殖与凋亡

目的:探讨LncRNA DLEU2是否通过自噬影响甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)细胞增殖和凋亡。方法:免疫组织化学和实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术方法检测17对甲状腺乳头状癌及癌旁组织Beclin-1和ATG7的表达;qRT-PCR检测DLEU2在TPC-1细胞与正常甲状腺细胞中的表达;以Lipofectamine TM 3000转染试剂分别将DLEU2沉默载体(shDLEU2)及对照载体(shNC)转染至甲状腺乳头状癌TPC-1细胞系,实验分为:空白对照组(无转染的TPC-1细胞)、DLEU2沉默组(TPC-1细胞转染shDLEU2)、阴性对照组(转染照载体shNC)。利用生长曲线、划痕实验及Transwell检测TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力;流式细胞术检测shDLEU2对TPC-1凋亡的影响;Western blot和免疫细胞化学染色检测DLEU2对TPC-1细胞Beclin-1、ATG7和LC3表达的影响。结果:免疫组织化学染色结果显示:ATG7与Beclin-1在甲状腺乳头状癌高表达(P<0.05),shDLEU2组TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭能力下降(P<0.05),Western blot显示沉默DLEU2基因,Beclin-1与ATG7的表达量增加,LC3 A/B比值减小(P<0.05)。结论:沉默DLEU2基因,可能通过自噬促进TPC-1的凋亡,抑制其增殖、迁移和侵袭。

三叶因子3对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的探讨TFF3基因在非小细胞肺癌中的作用及其对凋亡的影响。方法免疫组织化学法检测组织芯片31例肺腺癌、21例肺鳞癌、10例正常肺组织TFF3表达阳性率;慢病毒包装TFF3基因ORF序列及TFF3-shRNA基因质粒、转染、嘌呤霉素筛选获得稳定过表达及沉默TFF3基因的A549细胞株;实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法验证TFF3基因和蛋白表达水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和信号通路分子Akt表达水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果肺腺癌和鳞癌组织TFF3蛋白阳性表达率显著高于正常肺组织(P<0.05),Ⅲ级肺癌组织中TFF3阳性表达率高于Ⅰ~Ⅱ级(P<0.05),有淋巴结转移的肺腺癌和鳞癌组织中TFF3阳性表达率高于无淋巴结转移组织(P<0.01)。过表达TFF3的A549细胞(A549-TFF3)中TFF3基因及蛋白水平显著高于对照组,沉默TFF3基因的A549细胞(A549-shTFF3)中TFF3 mRNA及蛋白水平较对照组明显降低(P值均<0.01)。Western blot检测Bcl-2/Bax、p-Akt、p-Akt/Akt在A549-TFF3组显著高于对照组(P<0.01);在A549-shTFF3组Bcl-2/Bax、p-Akt表达水平显著低于对照组(P<0.01),p-Akt/Akt表达水平低于对照组(P<0.05),Akt表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞结果显示A549-TFF3细胞凋亡率较低(P<0.01),A549-shTFF3细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。结论非小细胞肺癌组织TFF3高表达,与病理分级及淋巴结转移有相关性。过表达TFF3在非小细胞肺癌细胞中可能通过激活Akt信号通路抑制肺癌细胞凋亡,促进肿瘤细胞恶性增生。

雌激素上调TFF3促进甲状腺乳头状癌细胞增殖的研究

目的探讨雌激素与三叶因子3(trefoil factor family 3,TFF3)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)癌细胞增殖中的作用。方法免疫组织化学法检测雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)在PTC组织和癌旁组织中的表达及其与临床病理参数的关系;不同浓度雌激素刺激甲状腺乳头状癌K1细胞24 h后,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测TFF3基因和蛋白水平变化,MTT法检测K1细胞增殖率;ER抑制剂ICI182780与10 nM雌激素作用K1细胞后,Western blot与MTT法分别检测TFF3蛋白水平和细胞增殖活力的变化;双荧光素酶报告基因检测不同浓度雌激素作用K1细胞24 h后TFF3荧光素酶活性的变化;qPCR检测TFF1、Bcl-2、cyclin D mRNA水平变化。结果PTC组织中ERα阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),与性别、临床分期、淋巴结转移、TFF3阳性表达率具有相关性(P<0.05)。TFF3 mRNA及蛋白水平、K1细胞增殖率随雌激素浓度升高而增高(P<0.01);ICI182780能够抑制雌激素作用下K1细胞TFF3蛋白水平及增殖活力的增高(P<0.01)。雌激素显著提高了K1细胞TFF3荧光素酶活性,并提高K1细胞雌激素反应基因TFF1、抗凋亡基因Bcl-2、细胞周期基因cyclin D mRNA水平(P<0.01)。结论雌激素信号通路在PTC中促进了TFF3表达,进而促进了PTC癌细胞的增殖。

microRNA-7-5p在甲状腺乳头状癌中的表达及机制

目的探讨microRNA⁃7⁃5p(miR⁃7⁃5p)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织和细胞系的表达以及对PTC细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及相关分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real⁃time PCR,qRT⁃PCR)检测52例PTC及癌旁组织和人PTC细胞系TPC⁃1、BCPAP、K1及人正常甲状腺滤泡细胞系Nthy⁃ori 3⁃1中miR⁃7⁃5p的表达情况。分别将miR⁃7⁃5p mimics/inhibi⁃tor、mimics⁃NC/NC⁃inhibitor(NC⁃in)以脂质体Lipofectamin^(TM) 3000转染至TPC⁃1和K1细胞分为3组:(1)空白对照组(TPC⁃1/K1组);(2)阴性对照组(mimics⁃NC组/NC⁃in组);(3)实验组(mimics⁃7⁃5p组/inhibitor⁃7⁃5p组)。以生长曲线、小室侵袭实验和划痕实验检测3组细胞增殖、侵袭和迁移能力。双荧光素酶报告基因实验检测miR⁃7⁃5p与三叶因子3(TFF3)3′UTR区结合情况,Western blot检测miR⁃7⁃5p对TFF3蛋白表达的影响。结果PTC组织和3株PTC细胞系中miR⁃7⁃5p表达水平明显低于癌旁组织和Nthy⁃ori 3⁃1正常滤泡上皮细胞(P<0.01),且不同临床分期、肿瘤大小和淋巴结转移的PTC患者miR⁃7⁃5p表达差异有统计学意义(P<0.01)。上调miR⁃7⁃5p后,实验组TPC⁃1细胞的增殖活性、侵袭和迁移能力明显下降(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果表明mimics⁃7⁃5p/inhibitor⁃7⁃5p组的荧光酶活性低于/高于对照组(P<0.01)。结论miR⁃7⁃5p在PTC组织中低表达,miR⁃7⁃5p可以通过靶向TFF3抑制PTC细胞的增殖、侵袭及迁移能力。