医学院校研究生实验动物学教学思考

实验动物学是一门新兴的学科,实验动物学教学有许多问题亟需教学工作者去探索解决.从研究生实验动物学教学教材选择、教学内容安排、教学方法、课后的继续教育等方面作了初步探讨.

医学院校动物屏障系统开放性实验室的综合管理

探讨医学院校实验动物中心屏障系统作为开放性实验室的特殊性和难题。通过加强实验室工作人员和实验人员的管理、规章制度的建立以及规范实验室标准化操作规程(SOP),提高了动物实验室的管理效率,合理地利用了平台的资源,更好地满足了广大研究人员的动物实验需求。

医学院校开展数学建模课程和竞赛必要性的初探

医学院校开展数学建模课程和竞赛对于培养医学生的创新意识和科研能力发挥着积极作用。从医学院校开展数学建模课程的现状、数学建模课程开设对医学生的必要性和数学建模竞赛有利于培养医学生综合素质几个方面来阐明医学院校开展数学建模课程和竞赛的重要性。

公共服务动物实验中心的管理

作为江苏省3个开放性动物实验中心之一,我中心在近3年的工作中取得一定成绩,在管理上积累了一些经验。本文报告中心3年来硬件与软件建设和具体管理工作的成绩和存在的问题。

开放性实验动物中心屏障系统的运行管理探讨

结合徐州医学院实验动物中心实际,探讨科研发展新形势下高校实验动物中心屏障系统运行和管理中的问题。从屏障系统环境管理、垫饲料管理、实验动物管理和人员管理等方面分析影响屏障系统运行与管理的因素。根据徐州医学院实验动物中心屏障系统运行与管理中的经验提出解决问题的思路。

钙吸收利用与钙摄入量关系的动物实验研究

为探讨钙吸收利用与钙摄入量间的相互关系 ,给初断乳Wistar大鼠喂饲 3周缺钙饲料后 ,按体重随机分为缺钙组、钙适宜组和高钙组 ,进行 12周喂养 ,并于实验第 5周进行 3天代谢试验。结果表明 ,适宜补钙可明显增加骨钙、骨密度、骨矿物质含量和股骨的重量 (P <0 0 5 ) ,加大补钙剂量 ,补钙效果未见增加。相关分析发现摄入钙与骨钙、骨密度、骨矿物质含量呈正相关 ,而与吸收率、存留率呈负相关。量效研究发现 ,大鼠钙摄入量 (X)与吸收率 (^Y)间的关系呈双曲线函数形式 ,所得回归方程为 :^Y =e6 80 68×X- 0 882 1 +2 0 ,(F =47 315 4,P <0 0 0 0 1)。实验结果显示 ,用原子吸收分光光度计测定 。

蛋壳粉补钙效果观察的动物实验研究

目的 探讨蛋壳粉对大鼠生长发育和吸收利用的影响 ,比较蛋壳粉、骨粉、碳酸钙补钙效果之差别。方法 给初断乳Wistar大鼠喂饲 3周缺钙饲料后 ,按体重随机分为基础饲料十蛋壳粉 ,基础饲料十骨粉 ,基础饲料十碳酸钙和基础饲料4个组 ,喂养 12周 ;第 5周进行 3天代谢试验 ,实验结束时摘眼球采血 ,断头处死动物 ,测定各项指标。结果 补钙组骨钙、骨密度、骨矿物质含量 ,股骨重量均高于缺钙组 (P <0 0 1或P<0 0 5 )。补钙组间 ,蛋壳组骨钙含量明显高于碳酸钙组 (P <0 0 5 ) ,但骨矿物质含量、骨密度、股骨重量未见差别。缺钙组钙吸收率、存留率均明显高于各补钙组 (P <0 0 1) ;在补钙组中 ,蛋壳钙的吸收率、存留率最高 ,但差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。市售骨粉铅含量超过国家标准。结论 蛋壳粉的补钙效果优于碳酸钙 ,其制备简单 ,价格低廉 ,安全性好 ,是一种值得深入研究和开发的生物钙源。

戊巴比妥钠在实验动物兔麻醉中的应用分析

目的 比较分析各麻醉方式的麻醉效果。方法 采用静脉、肌肉、腹腔和皮下四种方式注射3％戊巴比妥钠，分别以30mg／kg、30mg／kg、30mg／kg、40mg／kg的剂量对兔施行麻醉，记录实验中每只动物的麻醉时间、睡眠时间、麻醉后睫毛反射、刺痛反应、体温、呼吸频率及苏醒后恢复时间等，统计所得数据。结果 用确定剂量，各麻醉方式的麻醉时间为0～17min，睡眠时间范围为46～89min，恢复时间范围为26～41min。结论 实验者在实验时可根据需要用所确定剂量选择不同麻醉方式对实验动物兔施行麻醉。

ATRA增强HSV_1-TK/GCV系统联合topotecan治疗卵巢癌的动物实验

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)提高Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes si mplex virus thy-midine kinase,HSV1-TK)/丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)系统联合拓扑替康(topotecan,TPT)对卵巢癌的体内治疗作用。方法首先用携带HSV1-TK基因的重组逆转录病毒上清转染人卵巢癌细胞系SKOV-3,在含有G418的培养液中筛选获得抗性克隆细胞(命名为SKOV-3/TK)。PCR方法检测HSV1-TK基因整合情况;用SKOV-3细胞与SKOV-3/TK细胞按8∶2比例混合建立荷瘤鼠模型,作为HSV1-TK/GCV组、HSV1-TK/GCV+TPT组、ATRA联合HSV1-TK/GCV组及ATRA联合HSV1-TK/GCV+TPT组4个实验组,再单用SKOV-3细胞建立荷瘤鼠模型作为对照组;从用药第1天开始每5d测量肿瘤体积1次,至用药结束后1周,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,并取瘤组织做病理学检查。结果各组肿瘤体积与对照组比较抑瘤率分别为38.8%、53.2%、62.3%及95.7%,差异均有显著性(P<0.01),而且联合ATRA组与未用ATRA组比较差异亦有显著性(P<0.01)。病理结果显示实验组肿瘤组织均出现不同程度的点、片状坏死,以ATRA联合HSV1-TK/GCV+TPT组为重。结论HSV1-TK/GCV系统联合TPT治疗卵巢癌可起到协同作用;ARTA可以提高HSV1-TK/GCV系统联合TPT对卵巢癌的体内杀伤作用。

江苏省徐淮盐连地区1991年首批实验动物生产应用单位现状

根据江苏省科委、技术监督局联合会签发的苏科条(91)89号文“关于九一年首批实验动物生产使用单位检查验收的通知”精神,徐州医学院实验动物中心,承担了苏北徐州、淮阴、盐城、连云港地区首批实验动物生产、应用单位的环境设施条件检查验收工作。以中心领导同志为主,抽调技术人员组成4人检查验收组,携带检测仪器、药品试剂,自1991年4月16日至6月26日,走经4市7县,行程3000多公里,选验了6个系统41家单位的环境支撑条件,初步掌握了这些地区实验动物工作现况,为我省贯彻执行国家及我省实验动物管理条例,提供基础资料。现将结果报告如下。

慢性肾衰竭大鼠模型的建立

目的建立两种慢性肾衰竭大鼠模型,观察瘦素蛋白在大鼠组织、器官中的表达。方法建立两种慢性肾衰竭CRF动物模型:(1)大鼠肾大部分切除诱发肾衰(Platt法)。(2)腺嘌呤诱发大鼠慢性肾衰竭的动物模型(Yokozawa法)。分别测定血清中血尿素氮(BUN),血肌酐(Scr)Ca2+、P5+等含量。取肾脏组织,HE染色,行免疫荧光,检测瘦素蛋白在两种慢性肾衰竭大鼠模型中的表达情况。结果模型组大鼠血清中血尿素氮(BUN),血肌酐(Scr)等含量明显升高,免疫荧光检测显示两种模型大鼠肾脏组织瘦素蛋白的表达。结论成功建立两种慢性肾衰竭CRF动物模型,显示不同模型组织部位的瘦素蛋白的表达。为进一步探讨瘦素蛋白在动物体内的生物学作用提供实验基础。

银杏内酯A对缺血/再灌注损伤的大鼠心功能的影响

目的探讨银杏内酯A(Ginkgolide A,GA)对离体大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的心功能的影响。方法 Langendorff灌注离体大鼠心脏,用停灌复灌的方式制备心肌缺血/再灌注损伤模型,记录左心室收缩峰压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、收缩压和舒张压最大变化速率(±LVdp/dtmax)和心率(HR)的变化,并测定复灌后冠状动脉流出液中LDH和SOD的含量及心肌梗死面积。分离单个细胞进行GA预处理,模拟缺血/再灌注培养后检测心肌细胞存活率和单个心肌细胞的收缩幅度。结果 GA预处理以后,LVSP、-dp/dtmax和HR在复灌10 min时较缺血/再灌注组具有明显的改善(P<0.05),并增加心率,减少LDH的生成,增加SOD的活性,降低心肌梗死面积。经GA预处理的心肌细胞存活率明显提高,10μmol.L-1GA能够明显提高缺血后单个心肌细胞的收缩幅度。结论 GA对缺血/再灌注损伤的心肌具有一定的改善作用。

外源5-氨基乙酰丙酸对干旱胁迫下甘草种子萌发及幼苗生理特性的影响

以药用植物甘草种子和幼苗为材料,在20%PEG-6000模拟干旱胁迫条件下,测定了不同浓度外源5-氨基乙酰丙酸(ALA)处理甘草种子的发芽势(Gv)、发芽率(Gr)、发芽指数(Gi)和活力指数(Vi)的变化,以及ALA处理幼苗叶片的质膜透性、丙二醛(MDA)含量、可溶性糖含量、游离脯氨酸含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性。结果显示:(1)在20%PEG-6000胁迫下,甘草种子萌发受到显著抑制,而各项萌发指标经过不同浓度的ALA进行恢复处理后均有明显提高,且均以10 mg.L-1ALA处理的各项指标值最大,其种子发芽势(75%)、发芽率(91%)比干旱胁迫对照显著提高了35%和30%,发芽指数(36.2)和活力指数(709.7)分别提高至干旱胁迫的2.6和3.5倍。(2)各ALA处理较对照均显著提高了干旱胁迫下甘草幼苗总生物量、可溶性糖的含量及脯氨酸含量,却显著降低了甘草叶片的MDA含量和质膜透性,同时显著提高了干旱胁迫下甘草叶片中的SOD、POD和CAT的活性,且以10 mg.L-1ALA处理后的酶活性最强。研究表明,适宜浓度(10 mg.L-1)的ALA能显著提高干旱胁迫下甘草种子的萌发能力,通过调节渗透调节物质含量和保护酶活性来有效减缓干旱胁迫对甘草幼苗的伤害,提高甘草种子及幼苗的抗旱能力。

中国荷斯坦牛Toll样受体4基因的遗传多态性与体细胞评分的关联分析

试验旨在研究中国荷斯坦牛Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)基因的遗传多态性及其与体细胞评分(somatic cell score,SCS)的关联性,寻找与乳房炎相关的分子标记,加快中国荷斯坦牛的抗病育种。利用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术对30个公牛家系的610头中国荷斯坦牛TLR4基因进行多态性检测,用最小二乘均数法对TLR4基因的多态位点与SCS进行相关分析。结果发现,试验共检测到2个单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs),TLR4基因5′侧翼区存在SNP-226G>C突变,经PCR-RFLP检测发现3种基因型:GG、GC和CC,基因型频率分别为0.208、0.482和0.310;外显子3存在SNP 1760C>T突变,经PCR-SSCP检测发现3种基因型:CC、TC和TT,基因型频率分别为0.738、0.225和0.007,以上2位点均偏离Hardy-Weinberg平衡。对于SNP-226G>C位点,基因型个体的SCS差异不显著;对于SNP 1760C>T位点,CC基因型个体的SCS最小二乘均值极显著低于TT和TC基因型个体(P<0.01)。SNP 1760C>T的CC基因型对于中国荷斯坦牛的SCS有较大的遗传效应,可作为分子标记应用于奶牛乳房炎抗性筛选。

普瑞巴林对SNL模型大鼠镇痛作用及对脊髓背根神经节p-JNK表达的影响

目的：探究普瑞巴林（pregabalin,PGB）对脊神经结扎（spinal nerve ligation,SNL）模型大鼠的镇痛效果及对脊髓背根神经节（dorsal root ganglia,DRG）磷酸化氨基末端蛋白激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK）表达的影响。方法：将SD大鼠随机分为5组,假手术C组、SNL组、PGB治疗P1组、P2组和P3组,于术后第11天开始,PGB 3组分别每天一次灌胃PGB 15、30、60 mg/Kg,C组和SNL组给予生理盐水,连续4 d（D11-D14）。于术后第14天,测定给药前、给药后30、60、90、120、180 min各时间点的机械痛阈和热缩足反射潜伏期的变化,测定后每组随机取10只大鼠L_5 DRG,免疫荧光法测定p-JNK在DRG的表达情况。结果：与C组相比,术后第14天,SNL、P1、P2、P3组的机械痛阈值和缩足反射潜伏期明显降低（P〈0.01）,给药后,与SNL组相比,P1、P2、P3组的机械痛阈值和缩足反射潜伏期值逐渐增加,镇痛效果在100 min左右达到最大,并呈剂量依赖。SNL组p-JNK存在高表达现象,P2组和P3组p-JNK表达明显下调。结论：普瑞巴林可以抑制脊神经结扎引起的痛敏现象,镇痛作用在给药后90~120 min达到最大,并呈剂量依赖,其机制可能是通过降低p-JNK在DRG的表达而产生镇痛作用。

MK801对大鼠全脑缺血／再灌注ASK1信号通路影响以及神经元的保护

目的探讨MK801(dizocilpine,地佐环平)对全脑缺血/再灌注后神经型一氧化氮合成酶(nNOS)介导的凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)信号通路及海马CA1区细胞凋亡的影响。方法采用四动脉结扎法构建大鼠全脑缺血模型。SD大鼠腹腔注射MK801(30mg·kg-1)。通过"生物素转化法"(Biotin-Swich method)检测蛋白质的S-亚硝基化。然后运用免疫印迹、免疫共沉淀和免疫组织化学等方法对蛋白质的磷酸化以及蛋白质之间的相互作用进行研究;应用焦油紫染色的方法检测脑缺血/再灌注后海马CA1区的细胞凋亡情况。结果脑缺血/再灌注引起了ASK1的S-亚硝基化;MK801明显地抑制了脑缺血/再灌注诱导的ASK1的S-亚硝基化的增加;MK801明显降低了Thr845的磷酸化水平、增加了Ser83位的磷酸化水平,从而降低了ASK1的活性;MK801引起ASK1下游MKK4/7-JNK信号通路及下游凋亡的核通路也产生了相应的变化。结论 MK801能够抑制SD大鼠全脑缺血/再灌注引起ASK1的S-亚硝基化,进而影响ASK1凋亡信号通路,对神经元损伤起到保护作用。

小鼠皮肤快速冷冻:体外长期保存的方法

为探讨小鼠皮肤体外长期保存的方法,选择清洁级8周龄雄性昆明小鼠40只,随机数字表法分为冷冻皮肤移植组(30只)和新鲜皮肤移植组(10只)。皮肤冷冻采用二步法冷冻,用冷冻液EFS40对皮肤进行快速玻璃化冷冻,用0.5 mol/L蔗糖液解冻,解冻后小鼠皮肤自体移植,冷冻皮肤移植组于2周后接受经过冷冻解冻处理后自体皮肤移植,移植时在脊柱的另一侧剪去略小于植片的皮肤,将皮片平铺于植床上,吻合后缝合。新鲜皮肤移植组备皮后,将皮片置于杜氏磷酸缓冲液中15 min后移植于原来部位。移植14,28d进行移植效果的评价。结果表明,①新鲜皮肤移植成活率达到100%(10/10)。②解冻后皮肤移植14,28d成活率分别为77%(23/30),70%(21/30)。冷冻过程也造成小鼠皮肤表皮层和毛囊部分细胞损伤。因此,小鼠皮肤快速冷冻可以作为一种皮肤体外保存的方法。

Lats1基因敲除小鼠卵巢玻璃化冷冻的研究

目的对小鼠卵巢玻璃化冷冻的方法和冷冻液进行研究,摸索出一种简便的小鼠卵巢冻存法。方法用玻璃化冷冻液EFS40对Lats1基因敲除杂合子小鼠卵巢进行玻璃化冷冻,冷冻效果通过解冻后的卵巢肾包膜下易位移植、卵巢囊原位移植和对移植后的成活卵巢进行组织学检查来判定。对出生的后代进行Lats1基因检测,来判定卵巢原位移植结果的可靠性。结果与结论解冻后的卵巢肾包膜下移植733%成活,并具有正常的功能;卵巢囊移植后卵巢存活率为467%,受体怀孕率为333%,平均产仔数为(37±22)只,后代中能检出Lats1基因;试验中还发现,受体的发情时间普遍提前10d左右。

ERK1/2信号通路在IGF-1诱导新生小鼠海马神经干细胞增殖分化中的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路在胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)诱导新生小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖分化中的作用。方法:取新生C57BL/6J小鼠海马体外分离、培养NSCs,分别加入终浓度100 ng/ml的IGF-1和20μmol/L的抑制剂U0126。CCK-8试剂盒检测IGF-1对NSCs增殖的影响;免疫荧光细胞染色法检测IGF-1对细胞分化的影响;Western blot检测ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表达,并对各组进行比较。结果:CCK-8测定细胞增殖,第3 d U0126组相对OD值显著低于IGF-1组,第7 d时IGF-1组OD值则显著高于对照组和U0126组(P<0.05)。倒置荧光显微镜下可观察到IGF-1组βⅢTubulin和GFAP阳性分化率均明显高于对照组和U0126组(P<0.05)。Western blot结果显示:IGF-1组蛋白表达量显著高于对照组和U0126组(P<0.05),IGF-1促进ERK磷酸化,U0126则抑制ERK的活化。结论:IGF-1可显著诱导NSCs的增殖和分化,ERK1/2信号通路可能具有重要作用,同时IGF-1可能参与ERK1/2的活化。

大鼠SNL神经性疼痛模型的建立

目的建立大鼠L5和L6脊神经结扎(Spinal nerve ligation,SNL)疼痛模型并进行评价。方法根据大鼠痛阈值测定结果,选择90只符合要求的SD雄性大鼠进行手术操作,术后每隔1 d测定大鼠后足的机械痛阈值,比较术前和术后大鼠对疼痛刺激的反应变化。结果术后大鼠左足的痛阈值逐渐降低,至10 d后趋于稳定,与术前有明显差异(P≤0.01);右足的痛阈值微有升高,保持在稳定的水平内。结论本研究建立的大鼠SNL模型机械痛阈变化明显,稳定性好,可靠性高,可以作为大鼠一种神经病理性疼痛的模型。