红花黄色素抑制RIP3硝化对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究红花黄色素（SY）对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的保护作用，以及受体相互作用蛋白3（RIP3）硝化与MIRI关系。方法72只雄性SD大鼠随机分为6组，每组12只。冠状动脉结扎法建立大鼠心脏缺血再灌注（I／R）模型，除假手术组（Sham组）外，余各组均缺血30min，再灌注120min；于再灌注前1min，SY干预组经股静脉输注剂量分别为10mg／kg（SY10组）、30mg／kg（SY30组）和90mg／kg（SY90组）的SY溶液，依达拉奉组（Eda组）输注依达拉奉10mg／kg，Sham组和缺血再灌注组（I／R组）输注等容积生理盐水。再灌注末，处死动物采集血液和心肌组织标本，检测血浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肌酸激酶同工酶（CK—MB），TUNEL染色检测缺血区心肌细胞凋亡率，免疫印迹法测定RIP3硝化、受体相互作用蛋白1（RIP1）磷酸化的表达水平。结果与I／R组相比，SY90组和Eda组大鼠血浆中SOD活性升高、MDA浓度降低，CK—MB活性降低；心肌细胞凋亡减少；RIP3硝化及RIPl磷酸化水平下降；差异均有统计学意义（P〈O．05）；但SY90组和Eda组比较差异无统计学意义。SYl0组和SY30组与I／R组相比，各项指标差异均无统计学意义。结论剂量为90mg／kg的SY和依达拉奉对MIRI有保护作用，RIP3硝化、RIPl磷酸化水平增加并促进心肌细胞凋亡参与MIRI形成；SY的保护机制与清除过量产生的氧自由基、抑制RIP3-RIPl信号通路有关。

小鼠热休克蛋白GP96基因真核表达载体的构建及其表达

目的构建小鼠热休克蛋白GP96（GP96）基因真核表达载体并在真核细胞293T中表达。方法用RT—PCR法从小鼠脾脏扩增出GP96的成熟肽基因片段，先克隆于pMD19-T载体，再亚克隆到真核表达载体peDNA3．1中。以脂质体法将重组质粒转入293T细胞，免疫印迹法鉴定GP96的蛋白表达。结果限制性内切酶酶切和测序结果表明，扩增出GP96基因完全正确；免疫印迹法检测表明，转染的重组质粒能在293T细胞中高效表达。结论构建的pcDNA3．1-GP96重组载体在293T细胞系中高效表达，为深入研究GP96作为DNA疫苗在病毒性心肌炎中的作用及机制打下基础。