全身麻醉药促哺乳动物脑发育期神经元凋亡作用的实验研究进展

研究发现氯胺酮、咪达唑仑、N2O、异丙酚和异氟烷等全身麻醉药通过阻滞N-甲基-D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate glutamate recepors,NMDAR）和/或过度激活γ-氨基丁酸受体（gamma aminobutyric acid receptors,GABAR）触发了发育期脑易感区神经元凋亡性退行型病变.这一凋亡现象表现为以下特点：①与给药时间呈正相关;②呈剂量依赖性;③药物的联合应用显著增强了凋亡效应;④与鼠龄存在显著的相关性.神经功能行为学实验证实这一凋亡将对日后的学习记忆功能产生持久的影响.

不同吸入浓度七氟烷预处理对大鼠内毒素性急性肺损伤时Toll样受体4表达的影响

目的评价不同吸人浓度七氟烷预处理对大鼠内毒索性急性肺损伤时T0u样受体4（TLR4）表达的影响。方法健康雄性SD大鼠30只，体重200～250g，采用随机数字表法，将其分为5组（n=6）：生理盐水组（Ns组）、急性肺损伤组（Au组）和不同浓度七氟烷预处理组（S1-3组）。采用气管内滴注脂多糖（LPS）5mg／kg的方法制备大鼠内毒素性急性肺损伤模型。S1-3组分别吸入1．2％、2．4％、4．8％七氟烷30min，30min后开始制备模型。于滴注LPS或NS后12h时处死大鼠取肺组织，光镜下观察病理学结果，采用RT-PCR法检测TLR4mRNA表达，免疫组化法检测TLR4蛋白表达，EHSA法测定支气管肺泡灌洗液TNF—α和IL-1β的浓度，称重后计算肺湿干重比（W／D）。结果与Ns组比较，Au组和要S1-2组肺W／D、支气管肺泡灌洗液TNF-α和IL-1β浓度升高，TLR4mRNA及蛋白表达上调（P〈O．01）；与Au组比较，S2组和S3组各指标水平降低，S1组支气管肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β浓度降低，肺组织TLR4mRNA表达下调（P〈0．05或0．01）；与S1组比较，S2组和S3组各指标水平降低（P〈0．05）。S1-3组较ALI组肺组织病理学损伤明显减轻。结论七氟烷预处理可浓度依赖性地减轻大鼠内毒素性急性肺损伤，其机制可能与抑制肺组织TLR4表达上调，减轻炎性反应有关。

七氟烷预处理对脂多糖致大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 评价七氟烷预处理对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）所致大鼠急性肺损伤（acute lung injury,ALI）的影响.方法 72只SD大鼠随机分成6组：NS组、LPS组和七氟烷预处理（S-1 h组、S-6 h组、S-12 h组、S-24 h组）.通过气管内滴注LPS建立大鼠ALI模型.大鼠在气道内给予LPS或NS后6 h处死,检测不同时间点七氟烷预处理（2.4%,30 min）对支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中白细胞计数、细胞因子TNF-α和IL-1β水平,肺组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）活性,肺血管通透性及肺组织病理学等的影响.结果 与NS组相比,LPS组肺组织损伤程度,BALF白细胞计数以及TNF-α和IL-1β水平,血管通透性和肺组织MPO活性均显著增高（P〈0.01）.给予LPS前1 h和24 h七氟烷预处理能降低肺组织MPO活性,BALF中IL-1β水平及白细胞计数（P〈0.01）,而S-6h组和S-12 h组与IPS组相比无明显差别.七氟烷预处理均能够降低肺血管通透性和BALF中TNF-α水平（P〈0.01）,且以S-1 h和S-24h组为显著（P〈0.01）.提示七氟烷预处理对LPS所致肺损伤具有早期和延时的保护作用.结论 气道内给予LPS1 h和24 h前七氟烷预处理对LPS致大鼠ALI具有保护作用.

动脉瘤性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的低温治疗

脑血管痉挛（cerebral vasospasm，CVS）是导致动脉瘤性蛛网膜下腔出血（aneurysm subarachnoid hemorrhage，aSAH）患者死亡和残疾的主要原因之一。人们对SAH后CVS进行了广泛的研究，认为红细胞分解产物、血管内皮功能障碍以及分子机制在其发病起关键作用。目前对脑血管痉挛的治疗尚无确切治疗方法，近年来人们尝试应用低温治疗脑血管痉挛，现就SAH后CVS的病理生理机制和低温对于CVS的治疗进展作一综述。

依托咪酯后处理对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 观察依托咪酯（etomidate,Eto）后处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注（ischemia reperfusion,I/R）损伤的保护作用.方法 32只雄性SD大鼠,鼠龄约6个月,体重250 g～300 g,按完全随机分组方法分为4组（n=8）：假手术组（Sham组）、I/R组、脂肪乳组（L组）和依托咪酯后处理组（Eto组）.采用线栓法栓塞右侧大脑中动脉2 h制备脑I/R模型.I/R组、L组和Eto组分别于再灌注即刻腹腔注射生理盐水、脂肪乳（Eto溶剂）和Eto20 mg/kg（所有大鼠给药容积固定为1 ml/100 g）.于再灌注后12、24、72 h对大鼠进行神经功能缺损评分（neurologic severity scores,NSS）,并于72 h评分后处死大鼠,取大鼠脑切片行2,3,5-氯化三苯基四唑氮（2,3,5-triphenyltetrazolium,TTC）染色,计算大鼠脑梗塞面积.结果 各时点的NSS评分,Sham组均为0,I/R组和L组各时点NSS评分组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）;与I/R组和L组相比,Eto组各时点NSS评分降低（P＜0.05）.脑梗塞而积I/R组（40.1±2.3）%和L组（39.3±2.1）%显著高于Sham组（0）和Eto组（26.0±4.9）%（P＜0.05）,但I/R组和L组相比差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 腹腔注射20 mg/kg Eto后处理对大鼠局灶性脑I/R损伤有一定的保护作用.

二氯甲烷对盲肠结扎穿孔诱导大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 观察二氯甲烷对盲肠结扎穿孔模型大鼠急性肺损伤（acute lung injury,ALI）的保护作用.方法 40只SD大鼠按随机数字表法分为SHAM组、CLP组、MC组和DSF＋MC组4组,每组10只.10 h后右侧颈总动脉放血处死.左肺行支气管肺泡灌洗,灌洗液进行白细胞计数,检测蛋白浓度和TNF-α及IL-10水平;右肺下叶观察大鼠肺组织病理变化,其他肺叶匀浆后检测丙二醛和髓过氧化物（myeloperoxidasedeficieney,MPO）.另取40只大鼠随机分组处理同上,手术后分笼,观察其活动、刺激后反应;记录72 h生存率.结果 CLP组大鼠肺部炎症和损伤明显,与CLP组相比,MC组肺泡壁无增厚,肺泡内炎症细胞浸润减少,肺组织内TNF-α降低（55±16vs 164±36,P〈0.01）,IL-10增高（534.6±187.6 vs 75.2±26.1,P〈0.01）,丙二醛降低（7.8±1.7vs 30.4±2.2,P〈0.01）,术后72 h生存率显著增高（80%vs 0%,P〈0.01）.与MC组相比,MC＋DSF组肺泡壁增厚,肺泡内炎症细胞浸润增多;肺组织内TNF-α增高（138±23 vs 55±16,P〈0.01）,IL-10降低（138.3±26.4vs 534.6±187.6,P〈0.01）,丙二醛升高（26.5±1.9 vs 7.8±1.7,P〈0.05）,术后72 h生存率显著增高（80% vs0%,P〈0.01）.结论 二氯甲烷对盲肠结扎穿孔所致的ALI具有明显的保护作用.

七氟烷对急性肺损伤大鼠肺组织细胞凋亡的影响及其机制

目的 观察吸入七氟烷对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）致急性肺损伤（acute lung injury,ALI）大鼠肺组织细胞凋亡的影响,探讨可能机制.方法 18只雄性SD大鼠按照随机数字表分入3组,每组6只：①对照组;②模型组（LPS组）;③七氟烷预处理组.LPS组气管内滴注LPS 5 mg/kg,正常对照组气管内注入生理盐水,七氟烷组吸入2.5%七氟烷30 min后气管内滴注LPS 5 mg/kg.观察12 h后放血处死,取肺组织,行肺组织HE染色,观察病理变化,测定肺湿重/干重（W/D）比值,以透射电镜、流式细胞仪、TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化检测Fas（CD95分子）,western blot检测Bcl-2表达含量.结果 HE染色可见,LPS组较对照组肺泡间隔明显增宽、间质充血水肿、肺泡腔变窄、炎症细胞渗出及小气道损伤,七氟烷组损伤明显减轻.LPS组肺W/D（5.37±0.23）比对照组（4.35±0.37）明显增加（P＜0.01）,七氟烷组肺W/D（6.74±0.26）明显低于LPS组（P＜0.01）.透射电镜证实细胞凋亡样改变,七氟烷组肺损伤明显减轻.流式以及TUNEL法检测发现,LPS组肺组织内细胞凋亡指数（apoplosis index,AI）较对照组（11.2±2.3）,（8.6±0.5）%明显升高,七氟烷组（27.2±0.9）,（26.3±2.4）%较LPS组（48.1±1.9）,（46.6±1.2）%明显下降.LPS组Fas表达增加,Bcl-2表达下降（0.223±0.034,28.5±0.5）,七氟烷组较LPS组Fas表达减少,Bcl-2表达增加（0.131±0.021,81.2±5.2）.结论 LPS导致ALT大鼠肺组织产生大量凋亡细胞,七氟烷可能通过Fas途径减轻肺损伤程度,具有肺保护作用.

异氟烷对原代培养的缺氧／复氧损伤心肌细胞活力及线粒体通透性转换的影响

目的在原代培养SD乳鼠心肌细胞上观察异氟烷（isoflurane，Iso）对缺氧／复氧（hypoxia／reoxygenation，H／R）损伤心肌细胞活力及线粒体通透性转换（mitochondrial permeability transition，MPT）的影响。方法1d-3d龄SD乳鼠心肌细胞原代培养48h后，建立H／R模型。将培养细胞按孔随机分为5组（n=6），在缺氧期予Iso和苍术苷（atractyloside，Atra）处理：①Normal组：在37℃的CO2培养箱中孵育细胞5h（95％空气＋5％CO2）；②H／R组：缺氧（95％N2＋5％CO2）3h，复氧（95％空气＋5％CO2）2h；③Atra组：缺氧3h，缺氧期给予20仙的Atra，复氧2h；④Iso0．4组：缺氧3h，缺氧期给予0．4mmol／L Iso，复氧2h；⑤Atra＋Iso 0．4组：缺氧3h，缺氧期给予0．4mmol／L Iso和20μmol／LAtra，复氧2h。复氧50min后，以Calcein-AM染色心肌细胞，激光共聚焦显微镜观察细胞内线粒体通透性转换孔（mitochond Tial permeability transition pore，MPTP）的开放；复氧2h后，MTT法测定心肌细胞活力。结果复氧2h后，Normal组、H／R组、Atra组、Iso0．4组、Atra＋Iso0．4组吸光度分别为0．442±0．010、0．417±0．006、0．413±0．007、0．462±0．011、0．452±0．008，Normal组、Iso0．4组、Atra＋Iso0．4组明显高于H，R组、Atra组（P〈0．01）；H／R组吸光度与Atra组差异无统计学意义（P〉0．05）。复氧50min后，Normal组、Iso0．4组、Atra＋Iso0．4组Calcein保留在线粒体内，胞浆荧光强度较弱；H／R组、Atra组Calcein从线粒体释放到胞浆，胞浆荧光强度较强。结论①缺氧期Iso处理可以明显抑制心肌细胞MPTP开放，减轻缺血再灌注损伤（ischemia／reperfusioninjury，I／RI）引起的心肌细胞损伤，保存细胞活力；②缺氧期给予Atra不能逆转Iso的心肌保护作用。