17β-雌二醇保护6-羟基多巴胺损伤的多巴胺能神经细胞的作用机制

研究17β-雌二醇（17β-E2）对6-羟基多巴胺（6-OHDA）所致的黑质多巴胺（DA）能神经细胞损伤作用的机制。方法：新生2～3d的SD雄性大鼠行常规中脑脑片培养，6-OHDA诱导损伤，脑片分为空白对照组、实验对照组（加6-OHDA，浓度为200tanol／L）、17β-E2组（加6-OHDA后再加浓度为10-9mol／L17β-E2）。免疫荧光显色检测脑片中酪氨酸羟化酶（TH）的表达；免疫印迹检测脑片中TH、p-Akt、Bcl-2的表达。结果：17β-E2组中TH阳性神经细胞数量32．83±3．61与实验对照组16．67±2．42相比，差异有统计学意义。免疫印迹结果显示，与空白对照组相比，实验对照组中TH、磷酸化（P）-Akt和Bcl-2的表达量均降低；与实验对照组相比，17β-E2组中TH、P-Akt、Bcl-2的表达量升高。结论：17β-E2对DA能神经细胞的保护作用，可能由PI3-K／Akt信号通路介导并通过影响Akt下游的Bcl-2实现的。

胶质细胞源性神经营养因子和雌二醇对多巴胺能神经元的协同保护作用

目的:研究胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和雌二醇(E2)联合使用对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致的黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用及其机制.方法:新生2～3 d的雄性SD大鼠行常规中脑脑片培养,6-OHDA诱导损伤,脑片分为正常对照组、溶剂对照组、GDNF组、E2组、GDNF+ E2组、PI3-K特异性阻断剂(wortmannin) +GDNF组、wortmannin+ E2组、wortmannin+ GDNF+ E2组.免疫印迹检测各组脑片中酪氨酸羟化酶(TH)、p-Akt、procaspase-3的表达.结果:在GDNF+ E2组,TH的表达比单用GDNF或E2时显著升高,且procaspase-3的表达也比单用GDNF或E2时增高,差异均有统计学意义;GDNF、E2及GDNF+E2组中Akt磷酸化水平均是升高的,与相应的溶剂对照组相比差异有统计学意义;所有加入wortmannin组与相应的未加wortmannin各组相比,TH和procaspase-3的表达均是降低的,差异有统计学意义.结论:GDNF和E2联合使用对6-OHDA所致的黑质多巴胺能神经元损伤有保护作用,其机制可能是通过PI3K/Akt信号通路介导并且调节Akt下游的procaspase-3的表达变化实现的.

Bcl-2和Bad参与GDNF协同雌二醇对多巴胺能神经细胞的保护作用

目的：研究GDNF和雌二醇（E2）联合使用对6-羟基多巴胺（6-OHDA）所致的多巴胺能神经细胞损伤的影响并探讨其作用的机制.方法：新生2～3d的雄性SD大鼠行常规中脑脑片培养,6-OHDA诱导损伤,脑片分为8组：正常对照组、溶剂对照组、E2组、Wortmannin（PI3-K特异性阻断剂）＋E2组、GDNF组、Wortmannin＋GDNF组、GDNF＋E2组、Wortmannin＋GDNF＋E2组.免疫荧光染色观察黑质致密部（SNc）酪氨酸羟化酶（TH）的表达情况;Western Blot检测各组脑片中Bcl-2及Bad的表达.结果：免疫荧光染色结果显示,在GDNF＋E2组,TH的表达比单用GDNF或E2时显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;阻断PD-K/Akt信号通路后,TH的表达与未阻断组相比降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western Blot检测结果显示,在GDNF＋ E2组,Bcl-2的表达比单用GDNF或E2时升高,而Bad的表达比单用GDNF或E2时降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;阻断PI3-K/Akt信号通路后,Bcl-2的表达与未阻断组相比降低,而Bad的表达是升高的,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：GDNF和E2联合使用对6-OHDA所致的黑质多巴胺能神经细胞损伤有保护作用,其机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bad的表达变化实现的.

自噬参与辣椒素对U251胶质瘤细胞凋亡的影响

目的：研究辣椒素对胶质瘤细胞的影响及其作用机制.方法：U251细胞常规培养,不同浓度的辣椒素作用于U251细胞,MTT法检测细胞存活率;然后将U251细胞分为正常对照组、辣椒素组、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、辣椒素＋3-MA组,免疫荧光显色检测Smac蛋白的表达,RT-PCR检测beclin 1和Smac的mRNA表达水平,免疫印迹检测procaspase-3蛋白的表达.结果：MTT结果显示,辣椒素浓度在100 μmol/L时,U251细胞的存活减少,之后再增加辣椒素的浓度,细胞的存活几乎不变.免疫荧光显色结果显示,在辣椒素＋ 3-MA组中,Smac蛋白的表达与正常对照组、辣椒素组、3-MA组相比,其荧光强度显著增强.RT-PCR结果显示,在辣椒素＋3-MA组中,beclin 1的mRNA表达与正常对照组、辣椒素组、3-MA组相比,其表达量显著降低,而Smac的mRNA表达量升高.免疫印迹结果显示,在辣椒素＋ 3-MA组中,procaspase-3的表达与正常对照组、辣椒素组、3-MA组相比,其表达量显著降低.结论：辣椒素能够诱导胶质瘤U251细胞的凋亡.抑制自噬能够促进辣椒素的促凋亡作用,这种作用主要是通过促进Smac释放到细胞质中,从而激活caspase-3实现的.

两种横纹肌染色方法的比较

横纹肌包括骨骼肌和心肌,常规的H-E染色方法对正常横纹肌中横纹显示不清楚,所以为了显示与观察横纹,常常需要用到特殊的横纹肌染色方法.传统的横纹肌染色包括Mallory磷钨酸苏木精染色法(PTAH)和Heidenhain氏铁苏木素染色法等.作为医学检验方法,以简单快速为首选,而要制作教学切片,则对染色的效果,切片存放时间等要求高.为了寻求一种稳定的,效果好的,适合制作大量教学切片的染色方法,我们将上述2种横纹肌的染色方法做了比较.

成年小鼠氯胺酮慢性注射后行为改变以及海马CA3区小清蛋白和c-Fos的表达

目的 观察小鼠氯胺酮慢性中毒产生精神分裂症样症状后,海马CA3区小清蛋白（parvalbumin,PV）和c-Fos蛋白的表达.方法 将60只成年昆明小鼠随机分为生理盐水组（NS）和氯胺酮给药组：50 mg/kg（K1）、100 mg/kg（K2）和150 mg/kg（K3）.每5天腹腔给药1次,连续注射6次,于给药完成后第5天,观察刻板行为和旷场实验的行为改变;免疫组织化学方法检测海马CA3区PV和c-Fos蛋白的表达.结果 与生理盐水组相比,给药组小鼠刻板行为和旷场实验得分明显增加（P〈0.01）,随剂量增加而递增;海马CA3区PV的表达低于生理盐水组,随剂量增加而递减,以K2、K3组差异有统计学意义（P〈0.01）;海马CA3区c-Fos的表达低于生理盐水组,随剂量增加而递减（P〈0.05）.结论 氯胺酮慢性中毒后,成年小鼠可产生精神分裂症样症状;海马CA3区PV和c-Fos蛋白的表达受抑制,随药物剂量的增加逐渐减少,可能与小鼠氯胺酮慢性中毒后产生精神分裂症样症状有关.

17β-雌二醇对6-OH多巴胺损伤的多巴胺能神经细胞的影响

目的研究17β-雌二醇（17β-E2）对6-羟基多巴胺（6—0HDA）所致的黑质多巴胺（DA）能神经细胞损伤的影响，探讨17β-E2是否具有神经保护作用。方法新生2～3d的雄性SD大鼠行常规中脑脑片培养，6．0HDA（200μmol／L）诱导损伤后分为实验对照组和17β-E2组，实验对照组继续常规培养，17β-E2组又分为1．0×10^-8mol/L、1．0×10^-9mol／L和1．0×10^1-mol/L 3个亚组，分别按上述浓度添加17β-E2进行干预。Westem blomng方法检测每组细胞干预15min、30min、60min后酪氨酸羟化酶（TH）的表达。结果1．0×10^-9mol/L 17β-E2组TH的表达最高，与实验对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；增加或减少17β-E2的浓度均不能上调TH的表达；3个不同时间点中，17β-E2作用15min时，TH的表达最高，延长作用时间并不能增加TH的表达量。结论适当浓度（1．0×10^-9mol/L）17β-E2作用一定时间（15min）可以对受损的DA能神经细胞起到保护作用。