徐州地区汉族青年淋巴细胞对糖皮质激素反应的差异

目的通过检测地塞米松(Dex)对体外培养的120名徐州地区健康的汉族青年外周血淋巴细胞(PBLs)活化及分泌的影响,探讨该群体对糖皮质激素(GC)反应敏感性(LSS)的差异。方法以PBLs为研究标的细胞,用植物血凝素(PHA)及不同浓度Dex(10-8～10-6mol/L)处理,培养72h后用流式细胞仪检测CD3、CD25表达率,以酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-2(IL-2)水平,3个月后重复实验。分别计算GC对PBLs活化和分泌的最大抑制率(Imax1和Imax2)。结果根据Imax1,分别有28人和87人表现为GC抵抗和GC敏感;根据Imax2,分别有25人和88人表现为GC抵抗和GC敏感;两项指标结果一致的有103人,其中23人均表现为GC抵抗,80人均表现为GC敏感。不同浓度Dex均可显著抑制GC敏感者PBLs活化和分泌(P<0.01),并呈现剂量依赖关系;GC抵抗者不同浓度Dex组之间PBLs活化和分泌均无显著性差异;同一个体2次实验Imax的差异显著小于同一次实验中不同个体Imax的差异(P<0.01)。结论Imax是反映LSS的一项非常稳定的参数,可以估计个体PBLs对GC的反应。徐州地区汉族人的LSS存在差异性,结合活化和分泌两项指标,筛选出的GC抵抗者高达20.9%,说明正常人群中存在一定比率的对GC抵抗的个体,推测他们的遗传背景可能与GC敏感者不同。

乳腺癌耐药蛋白ABCG2对胰腺癌SW1990细胞耐药性影响的实验

目的探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞SW1990中ABCG2的表达及其与化疗耐药的关系。方法胰腺癌细胞SW1990用DMEM培养液常规培养,用0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48和72 h后,使用流式细胞仪测其细胞凋亡率,Western blot检测ABCG2蛋白的表达,RT-PCR检测ABCG2 mRNA的表达,并且分析ABCG2表达水平与化疗耐药的关系。结果 0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48和72 h后,细胞凋亡率分别为(21.1±0.61)%、(13.4±2.17)%、(6.4±1.34)%,不同时间点两两相比P均<0.05。0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48、72 h后与对照组相比,ABCG2 mRNA分别上升了(2.21±0.11)倍、(3.30±0.08)倍和(4.72±0.12)倍,蛋白上升了(2.17±0.14)倍、(3.61±0.09)倍和(4.98±0.13)倍,且组间比较P均<0.05,有统计学意义。结论吉西他滨能抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖,但随着时间延长,药物抵抗逐渐增强,这可能与吉西他滨作用细胞后上调ABCG2的表达有关。

自身细胞因子诱导的杀伤细胞过继性免疫治疗恶性肿瘤的临床观察

背景与目的:细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)具有增殖快、杀瘤活性强和杀瘤谱广的特点。但用于临床肿瘤治疗的报告较少,本文旨在评估用CIK细胞过继回输治疗晚期肿瘤的疗效。方法:用淋巴细胞分离液分离患者末梢血单个核细胞,然后将末梢血单个核细胞加入含有IFN-γ、IL-2和CD3单抗的培养基中进行培养扩增,再将培养后的CIK细胞回输给病人;患者一个疗程接受CIK细胞总数在5×109～15×109之间。在CIK细胞治疗前有47例患者做了化疗,3例做了放疗。化放疗与CIK细胞治疗间隔时间在2～4周以上。结果:在63例接受治疗者中,部分缓解(PR)+微效(MR)为28例(44.46%)。20例CEA增高者,治疗后有14例减低,6例增加;10例AFP增高者,治疗后有9例减低,1例增加。CD3、CD4和CD8T淋巴细胞绝对值在CIK细胞治疗后均增加45%以上。治疗后63例中有51例患者有食欲增加、32例患者睡眠和体力改善,18例患者中有13例疼痛减轻,结论:用自身CIK细胞过继性回输治疗能明显提高癌症患者细胞免疫功能,改善临床体征,且无毒副作用。

检测端粒酶活性在肺癌早期诊断中的价值

目的 探讨端粒酶作为肺癌肿瘤标记物的可能性 ,评价端粒酶活性对肺癌的早期诊断价值。方法 采用改良银染 -端粒重复序列扩增法 (TRAP)检测 40例原发性支气管肺癌手术标本及 40例CT扫描疑诊为肺癌患者的纤维支气管镜活检标本的端粒酶活性。结果 两组中小细胞肺癌端粒酶阳性率均为 10 0 % ,非小细胞肺癌分别为 84.8%、95 .7%。 40例手术切除肺癌组织的端粒酶阳性率为 87.5 % ( 3 5 /40 ) ,癌旁肺组织为7.5 % ( 3 /40 ) ,正常肺组织无表达 ( 0 /40 ) ,三组间比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。 40例CT扫描疑诊为肺癌患者的纤维支气管镜肺活检标本的端粒酶阳性率为 82 .5 % ,肺癌检出的敏感度为 96.4% ,特异度为 71.4% ,准确性为 91.4% ;尤登指数 (Youden’sIndex)J =0 .678,SE(J) =0 .174。结论 端粒酶是灵敏的肺癌肿瘤标记物 ,对纤维支气管镜活检标本行端粒酶活性检测有助于肺癌的早期诊断。

RECK、基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子在子痫前期患者胎盘组织中的表达

目的检测子痫前期患者胎盘组织中RECK、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)的基因表达,探讨它们与胎盘滋养细胞浸润过程的调控关系。方法采用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学检测120例妊娠足月剖宫产(正常妊娠、轻度子痫前期、中度子痫前期、重度子痫前期各30例)胎盘组织中RECK、MMP-9、VEGF的基因表达。结果 3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF的mRNA表达水平均显著低于正常妊娠组(P<0.05);重度子痫前期组中RECK mRNA的表达显著高于正常妊娠组(P<0.05);3组子痫前期患者胎盘组织中MMP-9及VEGF蛋白表达均显著低于正常妊娠组(P<0.05),中度和重度子痫前期组中RECK蛋白表达显著高于正常妊娠组(P<0.05)。结论子痫前期患者胎盘中RECK与MMP-9、VEGF之间存在负相关性,它们可能参与了胎盘滋养细胞浅浸润过程的调控。

银杏叶提取物增强细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤肿瘤细胞活性的研究

探讨银杏叶提取物对人细胞因子诱导的杀伤细胞 ( CIK细胞 )杀伤肿瘤细胞活性的影响。在体外用不同浓度的银杏叶提取物诱导人 CIK细胞和肿瘤细胞 ,以观察银杏叶提取物对人 CIK细胞活性和对肿瘤细胞的影响。在银杏叶提取物浓度为 50 0μg/ ml,作用CIK细胞 4h后能明显增强 CIK细胞杀伤肿瘤细胞的活性 ,与对照组和其它浓度组相比 P<0 .0 1 ;CIK细胞对经银杏叶提取物处理后的 K562 (人红白血病细胞株 )和 SGC-790 1 (人胃癌细胞株 )杀伤活性也明显高于对照组 P<0 .0 1。银杏叶提取物在一定浓度时能明显提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性 ;经银杏叶提取物处理的 K562和 SGC-790 1更易被

肿瘤细胞基因转导载体聚乙烯亚胺的合成及筛选

背景与目的:选择合适的载体是基因治疗成功的关键之一,近年来一种新型多聚阳离子化合物——聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)作为高效低毒的基因转导载体得到广泛重视。本研究应用光化学法制备系列不同粒径的PEI纳米凝胶,初步探讨其转导效率与粒径之间的关系,筛选理想的肿瘤基因转导载体。方法:光化学法制备PEI,光相干光谱仪测定粒径,并用扫描电子显微镜和原子力显微镜表征;以PEI为载体将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)报告基因分别转入Bel7402细胞和A549细胞,荧光显微镜下计数和流式细胞仪检测转染率。结果:光相干光谱仪检测PEI粒径38～200nm,扫描电子显微镜和原子力显微镜检测其形貌多为球形。荧光显微镜下计数和流式细胞仪检测86.9nmPEI(4μg)介导EGFP基因(2μg)时转染率最高,Bel7402细胞分别为(32.75±1.01)%、(32.40±1.41)%,A549细胞分别为(29.81±1.84)%、(30.00±1.86)%;与脂质体相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:光化学法合成的PEI是有效的基因转导载体,PEI粒径为86.9nm转染最为有效。

CT导向肺活检标本端粒酶活性检测对肺癌的早期诊断价值

目的 研究肺活检标本端粒酶活性检测对肺癌的早期诊断价值。资料与方法 经X线平片与CT扫描疑诊为早期肺癌 5 2例患者 ,分别进行纤维支气管镜活检与经皮针刺切割活检 ,并使用银染端粒酶重复序列扩增法(TRAP)检测活检标本端粒酶活性 ;而后将早期肺癌 (T1N0 M0 )与非癌病变组对照研究。结果 经手术病理证实为早期肺癌患者 2 2例 ,肺活检标本端粒酶活性表达阳性率为 86 .4 % (19/ 2 2 ) ;经手术或随访 2年以上证实为良性病变者 2 4例 (肺囊肿 3例 ,结核 6例 ,炎性假瘤 5例 ,肺炎 10例 ) ,端粒酶活性表达阳性率为 4 .2 % (1/ 2 4 )。两组有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 端粒酶可以作为肺癌定性的一个敏感的肿瘤标志物 ,结合病理学检查 。

人骨髓间充质干细胞体外定向诱导成骨细胞的研究

目的为建立一种简便有效的下颌骨缺损修复治疗的新方法——利用体外分离纯化人骨髓间充质干细胞(marrowstromal cells,MSCs),诱导向成骨细胞转化后再用于临床。方法 Ficoll密度梯度离心后贴壁培养法,分离纯化MSCs体外培养,经连续传代培养,加入10-7mol/L地塞米松,10-2mol/Lβ-甘油酸钠,500 ug/L的维生素C诱导液。结果 MSCs诱导后细胞形态向成骨细胞转化,经RT-PCR、流式细胞仪、细胞碱性磷酸酶活性、细胞糖原染色鉴定为成骨细胞。结论 hMSCs经定向诱导显示成骨细胞特性,为临床下颌骨缺损组织工程修复提供种子细胞。

流式细胞仪检测淋巴细胞亚型中若干问题探讨

对流式细胞仪检测淋巴细胞亚型中可能的影响因素进行探讨。证明可随时取样，存放室温可达４８ｈ，但不应存放冰箱，双色荧光直标试剂优于单色直标试剂。对样品处理、不同试剂、药物干扰等进行了实验探讨。

自体骨髓干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的疗效观察

目的观察自体骨髓干细胞移植治疗下肢慢性缺血性疾病的临床疗效,初步总结全程医护配合模式在治疗过程中的作用。方法我院2010-02-10收治2型糖尿病致左下肢糖尿病足(坏疽型)患者1例,2010-06-01收治下肢动脉粥样硬化并血栓形成致左下肢动脉闭塞症患者1例。均采用自体骨髓干细胞移植治疗,移植3次,移植过程中采用全程医护配合模式。随访2年观察治疗效果及不良反应。结果患者1干细胞移植治疗前,左足第四足趾坏死、溃烂,趾根和脚面连接处可见脓性分泌物,疼痛,不能行走;双下肢动脉彩超示双足背动脉粥样硬化闭塞症且双下肢股总、股深、股浅、腘动脉粥样硬化,电子计算机断层扫描血管造影(CTA)显示左足部供血血管稀疏。治疗后1个月足部疼痛减轻。治疗后3个月皮温较前升高,可感觉到微弱足背动脉搏动。治疗后6个月患者溃疡面开始出现愈合,皮温亦继续升高,色泽转红润。治疗后1年溃疡愈合面积继续增大。治疗后2年时CTA示供血血管较前有再通,仅有一小块溃疡未愈合。患者2干细胞移植治疗前,左下肢酸痛、无力,呈间歇性跛行发作,直立或行走后疼痛加剧,休息可得到部分缓解。查体见左足第四、五足趾发绀、粗糙,足背动脉搏动微弱、皮温下降;双下肢CTA示左侧股动脉远端、左腘动脉、左胫前动脉、左胫后动脉节段性管腔闭塞且左小腿动脉显影浅淡。治疗后1个月站立时疼痛减轻,足背动脉搏动增强,皮温较前升高。治疗后3个月行走距离增长,疼痛次数减少。治疗后6个月左足第四、五足趾色泽转红润。治疗后1年左足第四、五足趾光滑不再粗糙。治疗后2年CTA示供血血管较前丰富。3次移植,均未见注射局部及全身有明显不良反应发生。结论自体骨髓干细胞通过局部肌内注射法移植治疗下肢缺血性疾病是一种可行、方便、安全、有效的方法;全程医护配合有利于自体骨髓干细胞移植治疗的实施。

肾组织单细胞悬液制备方法的比较研究

目的 寻找更好的肾组织单细胞悬液制备方法。方法 以肾缺血再灌注大鼠肾为标本 ,分别采用剪碎法和研磨法制备肾组织悬液。经台盼蓝染色测细胞存活率 ,并进行流式细胞术 (FCM )分析。结果 剪碎法细胞形态完整、存活率高 ;2种方法细胞凋亡水平 (APO)、CV(coefficiencyofvariation)值有显著性差异 (P <0 .0 1)。

聚乙烯亚胺对小鼠组织器官氧化损伤的研究

目的光化学法制备一系列不同粒径的聚乙烯亚胺纳米凝胶(polyethylenimine,PEI),并研究其在小鼠体内对组织器官的氧化损伤情况及其影响因素。方法PEI单体在紫外光照射下引发聚合,生成粒径分布较窄且粒径可控的高分子纳米凝胶,并表征。腹腔给予不同剂量的PEI,化学比色法测定小鼠肝脏、肾脏和肺脏组织内GSH和MDA含量及SOD活力。结果光相干光谱仪检测,PEI纳米凝胶粒径为38nm^200nm;扫描电子显微镜和原子力显微镜下多为球形。大剂量时肝脏、肾脏和肺脏组织的GSH和MDA含量及SOD活力均与对照组有明显差异(P<0.05),且MDA随PEI的粒径增大而增高,GSH、SOD含量则有相反的趋势;小剂量时各组织器官的GSH和MDA含量及SOD活力与对照组无差别(P>0.05)。结论大剂量时PEI对小鼠组织器官可造成氧化损伤,PEI的粒径增大其损伤也增加;小剂量分次给予时不明显。MDA的测定和GSH、SOD的测定相互配合,可反映PEI对机体组织器官产生的氧化损伤。

Rho激酶抑制剂Y-27632干预大鼠骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的变化

背景:Rho激酶抑制剂可以调节细胞骨架重构,激活转录因子,促进细胞增殖和分化。目的:观察Rho激酶抑制剂Y-27632对大鼠骨髓间充质干细胞分裂增殖和细胞周期的影响。方法:采用贴壁细胞培养法体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,并传代。取生长状态良好的第2代骨髓间充质干细胞分组:实验组加入10μmol/LRho激酶抑制剂Y-27632,对照组正常培养。结果与结论:①骨髓间充质干细胞增殖:细胞生长曲线呈"S"型,Rho激酶抑制剂Y-27632作用后,3d左右进入平台期,细胞生长加速,生长曲线上移。②骨髓间充质干细胞的细胞周期:对照组G0/G1期细胞比例为(80.640±5.516)%,S期细胞比例为(13.397±2.511)%;实验组G0/G1期细胞比例为(61.723±8.829)%,S期细胞比例为(29.380±7.630)%,实验组S期细胞比例高于对照组(P<0.05)。表明Rho激酶抑制剂Y-27632可以促进骨髓间充质干细胞DNA的合成,促进细胞分裂和增殖。

银染端粒重复序列扩增法检测肺癌端粒酶活性

目的 评价端粒酶能否作为肺癌诊断的一个肿瘤标志物。方法 采用改良的银染端粒重复序列扩增法 (TRAP)检测 34例人肺癌手术标本 (包括癌组织、相应癌旁组织与正常组织标本各 34份 ,2 8个相应淋巴结 )的端粒酶活性。另有肺囊肿、肺炎性假瘤各 3例作为对照。结果 88.3% (30 / 34 )的肺癌癌组织端粒酶阳性 ,正常组织全部阴性。结论 端粒酶可以作为肺癌诊断的一个肿瘤标志物 ,改良的银染TRAP法成本低、污染少 。

流式细胞术AV与PI双参数法检测胃癌早期凋亡的定量研究

目的 :应用流式细胞术AV/PI法研究胃癌组织的早期凋亡情况。方法 :手术标本分离单细胞悬液 ,经AV -FITC与PI标记后流式细胞仪测定凋亡率。结果 :分离的单细胞经标记检测后可明确区分凋亡细胞、坏死细胞与活细胞的比例 ;其比例关系在肿瘤组织与对照组之间有显著性差异。结论 :AV/PI双参数法流式细胞仪检测可用于胃癌组织的早期凋亡的检测 。

骨髓间充质干细胞体外诱导分化为胰岛样细胞的降血糖作用

背景:移植胰岛及胰岛细胞治疗糖尿病已初见成效,但由于胰岛来源匮乏和免疫排斥反应而研究受阻。目的:移植将大鼠骨髓间充质干细胞在体外诱导分化为胰岛样细胞,观察其对糖尿病大鼠的治疗作用。方法:将大鼠骨髓间充质干细胞用碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子等诱导,免疫细胞染色等检测诱导情况。SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,建模成功后,随机分为对照组移植诱导胰岛样细胞的实验组,实验组经肾包囊移植诱导后的胰岛样细胞,对照组移植相同体积生理盐水,观察移植后糖尿病大鼠血糖和体质量变化。结果与结论:大鼠骨髓间充质干细胞体外经肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子等因子诱导后可以向胰岛样细胞转化。细胞移植后,对照组大鼠血糖无明显变化(P>0.05),实验组大鼠血糖与对照组和移植前相比较,明显降低(P<0.05)。大鼠骨髓间充质干细胞经含肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子等的诱导体系可诱导成胰岛样细胞,经诱导的细胞有一定胰岛素分泌能力,将诱导后细胞通过肾包囊途径移植入糖尿病大鼠体内,可降低大鼠血糖水平。

非小细胞肺癌患者T细胞亚群变化的临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌患者T细胞亚群变化的临床意义。方法 对 39例非小细胞肺癌患者应用流式细胞仪 (FCM)进行外周血T细胞亚群测定 ,并比较肿瘤大小与T细胞亚群的关系。结果 非小细胞肺癌患者CD4 (+)细胞显著降低、CD8(+)细胞显著升高 ,CD4 (+) /CD8(+)比值明显降低。肿瘤病灶直径≥ 5cm的患者CD4 (+)细胞、NK细胞较 <5cm的患者减低 ,CD4 (+) /CD8(+)比值无差异。结论 非小细胞肺癌患者T细胞亚群异常 ,细胞免疫功能紊乱。

流式细胞仪测定小儿恶性肿瘤细胞DNA倍体及细胞周期的临床意义

目的探讨小儿恶性肿瘤细胞核DNA倍性分布、细胞周期特征,并分析其临床意义。方法应用流式细胞仪测定20例小儿恶性肿瘤细胞核DNA倍体模式、DNA指数、增殖指数和S期细胞比例熏并研究这些参数与肿瘤组织分期之间关系。结果二倍体肿瘤主要分布于细胞分化较好的肿瘤;随着肿瘤细胞病理分级的发展,异倍体肿瘤的检出率逐渐上升。相对于低分化组而言,高、中分化组的DI、SPF及PI有显著性差异。结论流式细胞仪测定小儿肿瘤细胞核DNA倍体模式及细胞周期特征在评估小儿肿瘤恶性程度上有重要意义,测定结果应与临床、病理资料相结合,为恶性肿瘤预后判断提供依据。

非小细胞肺癌的早期诊断———CT与p53、p16、DNA对比研究

目的 研究非小细胞肺癌 (NSCLC)的CT征象与p5 3、p16基因蛋白异常表达及癌细胞核DNA含量之间的关系。方法 应用免疫组化SABC法对 5 2例经手术病理证实的NSCLC石蜡包埋标本 ,检测p5 3、p16基因蛋白表达 ;在此基础上 ,应用流式细胞术 (FCM)测定了其中 39例细胞核DNA含量并与相应的CT征象对照 ,分析p5 3、p16基因蛋白表达及DNA含量 (DNA指数 ,DI)与CT表现之间的内在联系。结果 ①正常肺组织、癌旁肺组织和肺癌组织中 ,p5 3基因蛋白阳性表达率逐渐增高 ,p16基因蛋白阳性表达率逐渐降低。随着肿瘤分化程度的降低 ,p5 3基因蛋白阳性表达率逐渐增高 ,p16基因蛋白阳性表达率逐渐降低 (P <0 .0 5 )。TNM分期中 ,Ⅰ、Ⅱ期NSCLCp5 3基因蛋白阳性表达率低于Ⅲ期和Ⅳ期 ;而p16蛋白阳性表达率明显高于Ⅲ期和Ⅳ期 (P <0 .0 5 )。②NSCLC的DI值明显高于癌旁肺组织和正常肺组织 ;NSCLC的细胞分化程度越差 ,TNM分期越高 ,异倍体率 (AT % )越高 ,SPF值也越大。③CT显示NSCLC最大直径 >3cm及有淋巴结肿大组p5 3基因蛋白阳性表达率、p16基因蛋白阴性表达及DI值、SPF值均高于直径≤ 3cm组及无淋巴结肿大组 ;肿块轮廓出现深分叶征、棘状突起征 ,边缘出现短毛刺征组p5 3基因蛋白阳性表达率高 ,p16基因蛋白阳性表达率低 ,同时?