CX26第86位氨基酸多态性与遗传性聋相关性分析

目的本研究在细胞生物学水平,对第86位氨基酸分别为Thr,Ser,Arg的CX26蛋白的膜定位生物学功能进行鉴定,进而结合临床数据分析该位点不同多态性突变的潜在致聋可能性。方法本研究借助GFP融合型慢病毒表达系统,分别将第86位氨基酸为Thr,Ser,Arg的CX26-GFP融合蛋白在小鼠螺旋神经节细胞中进行表达,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的细胞膜定位现象。结果第86位氨基酸发生Ser突变后,CX26蛋白仍能够正常定位于细胞膜表面,并形成间隙链接结构,这一表型与(第86位氨基酸为Thr的)野生型CX26蛋白并无明显差异;只有当第86位氨基酸突变为Arg时,导致CX26蛋白功能丧失。结论这些现象表明CX26 T86R可能为潜在致聋突变,而CX26 T86S为不影响蛋白功能的氨基酸多态性突变。该结论与临床筛查经验性结果一致。

小型猪与大鼠不同记录部位诱发VEMP的比较

目的分析正常小型猪不同记录部位(颈部伸肌、咬肌)的前庭诱发肌源性电位(vestibular evoked myogenic potential,VEMP)波形图,并与大鼠的VEMP波形图进行比较;方法各选取12只前庭功能正常的大鼠和小型猪,进行麻醉之后,用自制装置进行固定,1000Hz强短声诱发颈部伸肌、咬肌肌源性电位,并记录其波形;结果大鼠颈部伸肌诱发的肌源性电位,第一个正向波P的潜伏期为6.45±0.23ms,振幅约1.45±0.49uv,80dB SPL引出率为58%;咬肌诱发肌源性电位,第一个正向波P的潜伏期为6.38±0.34ms,振幅约1.57±0.35uv,阈值80dB SPL引出率为50%。小型猪颈部伸肌诱发肌源性电位,第一个正向波P的潜伏期7.65±0.64ms,振幅1.66±0.34uv,80dBSPL的引出率为58%;咬肌诱发肌源性电位,第一个正向波P的潜伏期7.60±0.78ms,振幅1.31±0.28uv,80dBSPL的引出率为50%。结论小型猪和大鼠不同部位记录得到的VEMP,只有振幅和引出率的差异,而潜伏期没有统计学意义;从波形的重复性、波幅的大小、引出率以及潜伏期的综合考虑,小型猪咬肌部位记录的VEMP波形优于颈部伸肌,大鼠颈部伸肌记录得到的VEMP波形优于咬肌;在相同部位记录到VEMP第一个正向P波的潜伏期时间、波幅的大小方面小型猪较大鼠的稍高。

动物前庭功能的评价方法

前庭神经系统障碍可导致人和动物空间定向和平衡功能的紊乱;前庭是内耳的重要组成部分,其起源与耳蜗相同,发育早于耳蜗,哺乳动物出生时前庭发育基本完成^([1-3]);随着各种前庭功能障碍的动物模型(大鼠"异食癖"晕动病模型、水貂呕吐模型等)不断建立,人们对该系统组织结构、功能的认识更加深入;系统的动物前庭功能评价方法不仅对动物前庭的基础研究至关重要,而且有助于对临床上前庭疾病的诊疗。评价人前庭功能的方法有很多:对半规管功能进行检测的冷热试验检查、对球囊斑功能进行检测的c VEMP、对椭圆囊斑进行检测的o VEMP等,由于人的实验研究受制于伦理学的限制,只有进行动物实验才能更深入地了解前庭的功能和结构,不断提升前庭系统临床疾病的诊断与治疗水平^([4])。本综述主要介绍几种用于实验动物的前庭检查方法,并简述其与临床前庭功能检查的异同。

小型猪肌源性诱发前庭电位的检测

目的探索小型猪肌源性诱发前庭电位(Vestibular-evoked myogenic potential,VEMP)的最佳检测方法。方法选取正常成年的雌性小型巴马香猪,以3%戊巴比妥钠+速眠新Ⅱ进行麻醉之后,用自制装置进行固定,1000Hz强短声诱发颈部伸肌肌源性电位和咬肌肌源性电位,并记录其波形;结果颈部伸肌诱发肌源性电位,第一个正向波P的潜伏期7.65±0.64ms,振幅1.66±0.34uv,80dBSPL的引出率为75%;咬肌诱发肌源性电位,第一个正向波P的潜伏期7.60±0.78ms,振幅1.31±0.28uv,80dBSPL的引出率为66%。结论小型猪颈部伸肌和咬肌在强声下诱发的肌源性电位潜伏期和阈值均一致;颈部伸肌部位所记录到的VEMF波幅稍高于咬肌部位记录到波幅;但相比之下,咬肌位置表浅,便于定位,肌肉组织发达,肌紧张性强,更易于肌源性诱发电位的记录。

婴幼儿人巨细胞病毒感染不同病毒载量与脑干听觉诱发电位异常关系的探讨

目的：探讨婴幼儿人巨细胞病毒（human cytomegalovirus， CMV）感染后体内病毒载量不同与脑干听觉诱发电位（brainstem auditory evoked potential ， BAEP）异常之间的关系。方法经病原学诊断为CMV感染的住院患儿160例，年龄10天～3个月，尿CMV-DNA拷贝数为1．797×10^4/ml ～5．62×10^7/ml ，按照尿病毒拷贝数的幂指数分为104（n＝72）、105（n＝40）、106（n＝28）和107（n＝20）4组，分别对其进行BAEP检测。结果尿CMV-DNA拷贝数的不同与BAEP的异常改变之间存在关联。①客观听阈值随CMV-DNA拷贝数的增加而增高（ P＜0．01）。②Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ波的潜伏期随CMV-DNA拷贝数的增加而延长（P＜0．01），Ⅰ～Ⅲ、Ⅲ～Ⅴ、Ⅰ～Ⅴ波间期随CMV-DNA拷贝数的增加而延长（P＜0．01）。结论婴幼儿CMV感染后尿液中病毒载量增高与进行性感音神经性听力丧失发生风险增高有关。

腺相关病毒介导脑源性神经营养因子在体外螺旋神经节细胞中的表达分析

目的：构建携带脑源性神经营养因子（ BDNF）基因的重组腺相关病毒（ rAAV）载体，并检测其体外表达目的基因的能力。方法利用基因重组技术，采用BamHI和EcoRI双酶分别将pcDNA3中的BDNF目的基因片断切出，再克隆到质粒pAAV－MCS中， PCR酶切测序鉴定序列。与腺相关病毒包装质粒pAAV－RC、pHelp-er，用磷酸钙法共转染HEK 293细胞，包装得到含转基因过表达BDNF的病毒载体（ rAAV－BDNF）。 rAAV感染体外培养的小鼠螺旋神经节细胞（ SGC）后，RT－PCR和Western blot法检测细胞BDNF基因及蛋白表达情况。结果成功地构建BDNF基因的rAAV载体，并可在SGC中表达BDNF。结论 SGC能稳定、高效表达外源BDNF，为将其进一步应用于感音神经性耳聋性疾病治疗的研究奠定了方法学基础。