江苏徐州地区1954例慢性乙型肝炎患者血清HBV耐药突变分析

目的:探讨江苏徐州地区HBV耐药基因突变分布特征及在评价抗病毒药物疗效中的作用。方法:2010年8月至2013年5月在徐州医学院附属医院就诊的门诊及住院慢性乙型肝炎(CHB)患者血清标本共1 954份,采用核酸扩增技术结合荧光标记探针杂交方法检测血清HBV DNA,通过测序分析进行耐药突变的检测。结果:1 954份标本共检测到病毒变异1 079例,无变异875例,变异率55.22%。检测到变异频次2 114例次,其中同一个位点变异≥5例的例次共有2 036例次。变异率较高的位点有204位点(25.75%)、180位点(17.71%)、181位点(11.62%),其中204+180位突变335例次(17.14%)。拉米夫定相关变异1 411例次(72.21%),阿德福韦酯相关变异873例次(44.68%),替比夫定耐药相关的204位点Ⅰ变异294例次(15.05%),恩替卡韦耐药必需的180M+204V或者180M+204V/I共204例次(10.44%)。未检出替诺福韦酯主要耐药位点rtA194T。结论:拉米夫定、阿德福韦酯耐药变异率相对较高,替比夫定、恩替卡韦经典耐药发生率相对较低,尚未发现替诺福韦酯耐药。

伴有自身免疫性疾病的慢性乙型肝炎患者的抗病毒治疗

慢性乙型肝炎患者伴有自身免疫性疾病在临床上比较常见,大部分这类患者需要抗乙型肝炎病毒治疗.核苷(酸)类似物和干扰素等抗乙型肝炎病毒药物在治疗此类患者时各有优劣,收益与风险并存.因此,临床实践中应该充分评估患者伴发的自身免疫性疾病种类和严重程度,选择最合适的抗乙型肝炎病毒药物,避免造成医源性损伤.

家族聚集的自身免疫性疾病的文献复习及病例报告

目的探讨家族聚集的自身免疫性疾病的发病原因及临床特点。方法对家族聚集的自身免疫性疾病进行文献复习,并对1例家族中3位患者同时出现自身免疫性疾病的临床资料进行总结分析。结果家族聚集性自身免疫性疾病常具有家族中2位以上女性发病、多器官发生自身免疫性疾病、多种自身抗体阳性等特点。结论对于不明原因肝功能损伤的患者仔细询问家族史,家族中有其他的自身免疫性疾病患者,对于诊断自身免疫性疾病有重要的参考价值。

HBV持续感染患者调节性T细胞检测及其意义

目的研究调节性T细胞(Treg)在慢性乙型肝炎(CHB)发病机制中的作用,为寻找治疗CHB的新方法奠定基础。方法用流式细胞仪检测了75例CHB患者和30例慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带者外周血中Treg含量,CHB患者中HBeAg阳性患者39例,HBeAg阴性患者36例,慢性HBV携带者中HBeAg阴性和HBeAg阳性患者各15例。并对其中23例CHB患者服用核苷(酸)类似物前后外周血Treg含量进行检测。结果 CHB患者外周血Treg含量明显高于慢性HBV携带者(P<0.05),而CHB和慢性HBV携带者中HBeAg阴性和HBeAg阳性患者外周血Treg含量均无明显差异(P>0.05)。经核苷(酸)类似物治疗12周后,CHB患者外周血Treg含量较治疗前有所降低(P<0.05)。结论 Treg在HBV致病机制中起一定的作用,体外调控Treg含量和功能可能为治疗HBV感染提供一个新的途径。

江苏徐州地区慢性乙型肝炎病人HBV耐药突变分析

目的分析徐州地区慢性乙型肝炎(CHB)病人乙型肝炎病毒(HBV)基因型及耐药变异位点的分布特点。方法收集2013年5月—2013年11月在我院就诊的门诊及住院CHB病人216例,采用核酸扩增技术结合荧光标记探针杂交方法检测病人血清HBV DNA,通过测序分析检测病人血清中的HBV基因分型及耐药变异位点。结果本组216例病人中,HBV基因C型207例(95.83%),B型9例(4.17%);病毒变异的85例,无变异的131例,变异率为39.35%;变异位点有rtV173、rtL180、rtA181、rtT184、rtS202、rtM204、rtV207、rtS213、rtV214、rtQ215、rtN236、rtN238。各突变位点中,rtM204和rtL180位点的突变检出率较高,分别为21.30%和13.89%。与拉米夫定、阿德福韦酯、替比夫定耐药相关的病毒基因位点的突变检出率分别为29.63%、20.37%、12.96%。结论徐州地区HBV基因型分布以C型多见,突变株占检测病毒株的39.35%;与拉米夫定和阿德福韦酯耐药相关的基因位点突变检出率相对较高,与恩替卡韦耐药相关的基因位点突变检出率相对较低。

慢性乙型肝炎患者血清铁、铁蛋白水平与脂质过氧化损伤的关系

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者血清铁（SI）、铁蛋白（SF）水平与脂质过氧化损伤的关系。方法选择79例CHB患者，用比色法测SI、放射免疫法测SF、硫代巴比妥酸法测丙二醛（MDA）、黄嘌呤氧化酶法测超氧化物歧化酶（SOD）。结果各组CHB患者SI、SF和MDA水平均高于对照组（P〈0．05～0．01），SOD水平均低于对照组（P〈0．01）。79例CHB患者SI、FE水平与MDA水平均正相关（r=0．493，P〈0．01；r=0．745。P〈0．01）；SI水平与SOD水平负相关（r=-0．27，P〈0．05）。结论CHB患者SI、SF水平与脂质过氧化损伤有相关性，过重的铁负荷协同乙肝病毒加重肝损伤。

替比夫定和恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者早期疗效分析

目的比较替比夫定与恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者24周疗效及安全性。方法将60例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者随机分为替比夫定组和恩替卡韦组,比较两组治疗第12周和24周的疗效。结果在治疗12周时,两组患者HBV DNA低于检测水平和ALT复常率相比较,差异无统计学意义(P>0.05),替比夫定治疗组HBeAg阴转率和HBeAg血清学转换率高于恩替卡韦组(36.7%对14.3%,26.7%对6.7%,P<0.05);在治疗24周时,两组HBV DNA低于检测水平、ALT复常率、HBeAg血清学转换率相比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而替比夫定组HBeAg阴转率高于恩替卡韦组(P<0.05);多因素Logistic回归分析发现仅基线ALT水平高的患者更易出现HBeAg血清学转换。结论替比夫定和恩替卡韦治疗CHB患者疗效相当,但替比夫定治疗患者HBeAg阴转率稍高于恩替卡韦治疗。

乙型肝炎肝硬化患者血清铁和铁蛋白水平与脂质过氧化损伤的相关性研究

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者血清铁(SI)、铁蛋白(FE)水平与脂质过氧化损伤的关系。方法选择61例不同Child-Pugh分级的乙型肝炎肝硬化患者,采用采用比色法检测SI,放射免疫法检测FE,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)和硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)。结果乙型肝炎肝硬化患者血清SI和FE水平均明显高于对照组;SI、FE、MDA水平依Child-Pugh分级而呈上升趋势,而SOD水平则依次降低;SI和FE水平与MDA水平均呈正相关(r=0.562,P<0.01;r=0.535,P<0.01),与SOD水平均呈负相关(r=-0.429,P<0.01;r=-0.422,P<0.01)。结论乙型肝炎肝硬化患者血清SI和FE水平与脂质过氧化损伤有相关性,过重铁负荷加重了肝细胞损害。

对阿德福韦酯自然变异耐药与抗病毒后耐药的慢性乙型肝炎患者血清HBV P基因序列比较

目的通过对慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血乙型肝炎病毒(HBV)聚合酶RT区序列分析,观察对阿德福韦酯(ADV)自然变异耐药及继发耐药的异同。方法 PCR产物直接测序法检测78例对ADV耐药患者外周血HBV RT区基因序列。其中曾用ADV治疗患者30例(治疗组),未抗病毒治疗48例(未治疗组),并对两组ADV相关耐药变异位点发生频数进行比较。结果未治疗组ADV耐药的主要变异类型为rtA181V/T 10例(20.8%),rtN/H238T/D/S 10例(20.8%)和rtV214A变异13例(27.1%);而治疗组发生的ADV耐药变异主要为rtA181V/T 16例(53.3%),没有发现rtN/H238T/D/S变异,仅发现1例rtV214A变异。结论CHB患者中存在相当严重的ADV自然变异耐药变异,主要变异类型为rtN/H238T/D/S及rtV214A,而抗病毒治疗后该变异位点发生频数反而相对减少。rtA181V/T变异既可以为自然变异也可以由ADV抗病毒治疗而诱发。

α-干扰素治疗慢性乙型肝炎患者外周血调节性T细胞比例及单核细胞程序性死亡受体-1配体表达的变化及意义

目的 分析α-干扰素治疗过程中慢性乙型肝炎患者（CHB）外周血调节性T细胞（Treg）比例及单核细胞程序性死亡受体-1配体（PD-L1）分子表达的变化及其临床意义.方法 21例HBeAg阳性CHB患者接受α-干扰素治疗24周,用流式细胞仪检测治疗前后外周血Treg比例和单核细胞PD-L1表达水平,采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测治疗前后血清乙型肝炎病毒（HBV DNA）水平,通过时间分辨荧光免疫法检测治疗前后乙型肝炎病毒标志物,全自动生化分析仪检测治疗前后谷氨酸氨基转移酶（ALT）水平.结果 治疗前CHB患者外周血Treg比例和单核细胞PD-L1表达水平与HBV DNA水平成正相关;治疗24周后,Treg水平明显下降,而单核细胞PD-L1表达无明显变化.在不同应答病例,治疗24周后外周血Treg和单核细胞PD-L1水平较治疗前变化不同.结论 CHB患者外周血Treg和单核细胞PD-L1水平影响α-干扰素抗HBV疗效,测定外周血Treg比例和单核细胞PD-L1的表达,可作为α-干扰素抗HBV疗效预测的免疫学指标之一.

声触诊组织量化技术无创评价慢性肝病肝纤维化程度的初步研究

目的探讨声触诊组织量化（VTQ）技术无创评价慢性肝病患者肝纤维化程度的可靠性及肝脏的剪切波速（SWV）与肝病患者其他指标的相关性。方法利用VTQ技术测定165例慢性肝病患者（研究组）和161例健康体检者（NC组）肝脏Swv。研究组中131例慢性肝病患者行肝组织活检，分析SwV与体重指数（BMI）、肝功能、AST与血小板比值（APRI）、PLT、凝血酶原国际标准化比值（INR）、血清学肝纤维化指标、肝脏炎症程度（G）及纤维化程度（S）的相关性。结果纤维化分级S0、S1的慢性肝病患者的swv无明显差异（P=0．145），其他分级差异均有统计学意义：S4组〉s3组〉S2组〉S1组〉NC组（P均〈0．05），而纤维化（S0组）的慢性肝病患者与NC组的SWV无明显差异（P=1．972）。轻度纤维化（S0组、S1组、S2组）、重度纤维化（S，组）和肝硬化（S4组）组间比较，差异均有统计学意义（p均〈0．05），三组与NC组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。当S≥S，时，ROC曲线下面积为0．988（95％C10．976～1．000）；ROC曲线下面积为0．989（95％C10．978～1．000）；以1．570m／s为界值，诊断S≥S，的敏感度为93．1％，特异度为92．5％；当S=s。时，以1．870m／s为界值，诊断S=s。的敏感度为97．7％，特异度为91．7％。INR、APRI、LN、HA、IV．C、PⅢP、TBil、G、S与swV均呈正相关（P均〈0．05），其中S与SwV高度相关；PLT与swv呈负相关（P=0．000），PLT值越低，测得swv越高，而年龄、性别和BMI与swv无相关性（P均〉0．05）。结论Swv与肝脏病理纤维化分级及血清肝纤维化指标之间存在一定的相关性，可用来评价慢性肝病患者的肝纤维化程度，VTQ技术具有广阔的应用前景。

基因1b型慢性丙型肝炎患者DAAs天然耐药突变分析

目的探讨未经抗病毒治疗的基因1b型慢性丙型肝炎患者天然耐药突变情况。方法应用RT-PCR法扩增丙型肝炎病毒（HCV）NS3及NS5B部分片段序列，用克隆测序方法进行核苷酸序列测定。在氨基酸水平与已有报道的蛋白酶抑制剂耐药突变位点（V36、T54、V55、Q80、R155、A156、D168和V170）和聚合酶抑制剂耐药突变位点（$282、C316、S365、M414、L419、M423和Y448）进行比较。结果9例患者中3例存在直接抗病毒药物（DAAs）耐药突变，在3例检测到蛋白酶抑制剂耐药突变的患者中2例为T54S突变，1例为A156T突变，存在A156T突变的患者中同时检测到聚合酶抑制剂耐药突变M414L。结论中国DAAs初治患者中天然存在着蛋白酶抑制剂耐药突变T54S、A156T和聚合酶抑制剂耐药突蛮M414L。

ESAT-6诱导的外周血单个核细胞γ-干扰素反应对结核性脑膜炎的诊断价值

目的探讨6-kDa早期分泌靶抗原（ESAT-6）刺激的外周血单个核细胞（PBMC）γ-干扰素（IFN-γ）反应对结核性脑膜炎的诊断价值。方法研究对象共82例，其中结核性脑膜炎组20例，病毒性脑膜炎组25例，一般细菌性脑膜炎组17例，并设健康对照组20例。Ficoll法分离PBMC并培养，分别以ESAT-6、纯化结核菌素（PPD）、植物血凝素（PHA）和生理盐水处理。ELISA法测定各组上清IFN-γ浓度。结果ESAT-6处理引起结核性脑膜炎组显著的IFN-γ反应（与生理盐水处理相比P〈0．01）。PPD刺激在结核性脑膜炎组亦均引起IFN-γ升高反应（与生理盐水处理相比P〈0．01），但程度低于ESAT-6处理，差异有统计学意义（P〈0．01）。ROC曲线分析显示，ESAT-6处理曲线下面积为0．918（P〈0．01），95％C10．831～1．0；PPD处理曲线下面积为0．725（P〈0．05），95％C10．56～0．89。结论ESAT-6诱导的PBMCIFN-γ反应对结核性脑膜炎的诊断具有良好的敏感度和特异度，且具有较高的临床易行性。

抗HCV是否步入以DAA为主的特异性治疗时代?

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染是导致慢性肝脏疾病的原因之一.直接抗病毒(direct-acting antiviral,DAA)药物的问世无疑给不能耐受或不适合干扰素治疗的患者带来了希望.2014-2015年国外已经发布了6部关于抗HCV治疗的指南,而2015-10我国也更新了HCV感染的诊治的指南.本文对抗HCV的治疗现状及趋势作一简要概述.

树突状细胞与人免疫缺陷病毒1型感染

树突状细胞在人免疫缺陷病毒1型感染过程中发挥重要作用。一方面树突状细胞可以清除病毒,另一方面人免疫缺陷病毒1型感染也会造成树突状细胞数量的减少和功能的削弱,从而逃避免疫清除。研究树突状细胞与人免疫缺陷病毒1型之间的相互作用,对于基于树突状细胞的人免疫缺陷病毒疫苗研发具有重要意义。

自体CIK细胞治疗慢性乙型肝炎的护理体会

细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）是一种新型的免疫活性细胞,它是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后,产生的一类细胞群,它具有显著的抗病毒、抗肿瘤的活性。2009年6月～2010年3月采用自体细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）治疗慢性乙型病毒性肝炎患者19例，通过对19例患者抽取自身外周血进行CIK细胞经肝动脉回输，

原发性胆汁性肝硬化16例临床分析

目的分析原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床特征,提高对于该病诊治的认识。方法分析16例PBC患者的一般资料、临床表现、血清学、免疫学指标等改变。结果本组患者中男女之比为1∶4.3,确诊时平均年龄(52.6±9.9)岁。最常见症状为乏力(68.8%)、皮肤瘙痒(43.8%)。所有患者碱性磷酸酶(ALP)及谷氨酰转肽酶(GGT)明显增高,分别为(452.44±365.45)U/L和(385.25±192.67)U/L,10例(62.5%)患者血清总胆红素(TB)增高,血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平呈轻至中度升高,分别为(94.13±48.38)U/L及(101.5±73.58)U/L。10例患者血清IgM增高,所有患者血清抗线粒体抗体(AMA)或AMA-M2亚型阳性。结论PBC好发于中老年女性,长期慢性乏力、皮肤瘙痒,血清ALP、GGT、TB及血清IgM水平升高及AMA/AMA-M2阳性有助于诊断本病。

肝硬化并发大量顽固性腹水的治疗

目的：探讨抽放腹水后，使用腹带加压包扎在肝硬化并发大量腹水的治疗中的作用。方法：每周三次，每次抽放腹水1．5L。抽放腹水术后，治疗组患者给予腹带加压包扎，所加的压力以使患者感到与术前的腹胀程度相似为宜；对照组患者术后仅给于常规包扎。在相同的治疗周期内，比较治疗组与对照组患者的腹围缩小程度。结果：治疗组患者的腹围由治疗前的80．24±6．80cm缩小为71．93±6．40cm，治疗前后的腹围差异有统计学意义（P〈0．01）；对照组患者的腹围由治疗前的80．24±6．80cm缩小为75．90±5．55cm，治疗前后的腹围差异亦有统计学意义（P〈0．01）；治疗后。治疗组患者的腹围缩小了8．07±2．54cm，对照组的腹围缩小了4．06±1．98cm，治疗组较对照组缩小得更为明显（P〈0．01）。结论：抽放腹水术后使用腹带加压包扎，有助于加快腹围的缩小，简单易行，经济实用，值得在临床上推广应用。

HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清Mig、RANTES和IL-9水平与HBV前C/BCP区变异的关系及其对聚乙二醇琢-干扰素治疗应答的影响

目的研究HBeAg阳性CHB患者血清干扰素-γ诱导的单核因子(Mig)、调节活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子(RANTES)和IL-9水平与HBV前C区和BCP区变异之间关系及其对聚乙二醇α-干扰素治疗应答的影响。方法纳入43例接受聚乙二醇α-干扰素治疗的HBeAg阳性CHB患者,采用PCR技术扩增治疗前患者血清HBV前C区和BCP区基因片段,并测序分析。采用微量样本多指标流式蛋白定量(CBA)技术检测血清Mig、RANTES和IL-9水平。结果在43例HBeAg阳性CHB患者中,检测到HBV前C区和(或)BCP区野生型(WT)24例(55.8%)和突变型(MT)19例(44.2%);野生组血清RANTES和IL-9基线水平分别为(3274.24±814.79)pg/mL和(9.40±0.89)pg/mL,突变组则为(2742.40±764.24)pg/mL和(10.78±2.73)pg/mL,两组间差异均具有统计学意义(P<0.05);在治疗48 w时,突变组患者获得CR者9例(47.4%),野生组患者4例(16.7%),两组间差异有统计学意义(P<0.05);突变组和野生组对聚乙二醇α-干扰素治疗实现完全应答的CHB患者IL-9、Mig和RANTES基线水平均无显著性差异;突变组中治疗24 w时HBsAg下降幅度>1 log10的CHB患者血清Mig基线水平为(138.17±96.57)pg/mL,而HBsAg下降<1 log10的CHB患者为(89.74±78.25)pg/mL,两组间差异有统计学意义(P<0.05);聚乙二醇α-干扰素治疗过程中,突变组血清IL-9基线水平为(10.78±2.73)pg/mL,治疗12 w和24 w时分别为(8.83±1.94)pg/mL和(8.91±1.97)pg/mL,均明显低于基线水平(P<0.05),而野生组中未发现有类似的变化。结论 HBV前C或(和)BCP区变异与IL-9水平升高密切相关,但是IL-9水平与聚乙二醇α-干扰素抗病毒的疗效无关。Mig基线高水平可能有利于突变组CHB患者在聚乙二醇α-干扰素治疗过程中实现HBsAg的清除。

45例重型病毒性肝炎患者的护理体会

目的：探讨重症肝炎患者有效护理措施.方法：回顾性分析我科收治的重症肝炎患者45例临床资料.结果：本组45例,死亡8例,平均住院天数35d.结论：重症肝炎患者正确的治疗的同时行科学有效地护理可以预防并发症,改善预后,降低病死率.