hTERT和β-catenin在胆囊癌中的表达及其临床意义

目的检测hTERT和-βcatenin在胆囊癌中的表达情况,分析其与临床病理特征及病人生存期之间的关系。方法收集正常及炎性胆囊、胆囊癌非相关息肉、胆囊癌相关息肉和胆囊癌各20、19、16、82例。用免疫组化方法分别检测hTERT、-βcatenin蛋白表达。结果①hTERT在正常及炎性胆囊、胆囊癌非相关息肉、胆囊癌相关息肉和胆囊癌中阳性率分别为0、5.3%、37.5%、84.1%,后两组hTERT表达率显著高于前两组(P<0.05),胆囊癌组hTERT表达率亦显著高于第3组(P<0.001)。-βcatenin在正常及炎性胆囊、胆囊癌非相关息肉、胆囊癌相关息肉和胆囊癌中异位表达率分别为5.0%、10.5%、50.0%、51.2%。后两组-βcatenin表达率显著高于前两组(P<0.05)。②hTERT在T1+T2、T3+T4和淋巴结阳性、阴性组中的表达率分别为72.7%、92.8%(P<0.05)和93.6%、71.4%(P<0.05),差异有显著性。hTERT表达水平与胆囊癌分化程度、浸润深度、淋巴结有无转移的相关系数分别为0.5、0.4、-0.5(P<0.01)。-βcatenin在T1+T2、T3+T4和淋巴结阳性、阴性组中异位表达率分别为33.3%、63.3%(P<0.01)和57.4%、42.9%(P<0.05),差异有显著性。③胆囊癌hTERT阴性、阳性表达累积生存率分别为22.8%、5.9%(P<0.05)。胆囊癌异位-βcatenin阴性、阳性表达累积生存率分别为17.1%、5.7%(P<0.05)。④胆囊癌hTERT蛋白与-βcatenin异位蛋白表达呈正相关(r=0.311,P<0.05)。结论hTERT和-βcatenin蛋白异位表达与胆囊的恶性病变密切相关。hTERT表达与胆囊癌相关息肉及其恶性转化有关。hTERT和-βcatenin蛋白与肿瘤不良预后有关。-βcatenin异位表达增加与胆囊癌hTERT表达增强相关联。

hTERT-siRNA抑制胆囊癌细胞端粒酶活性及增殖运动的研究

目的:了解hTERT-siRNA对GBC-SD细胞代谢、侵袭和端粒酶活性、hTERT mRNA、hTERT蛋白、β-catenin mRNA、-βcatenin蛋白的作用,并探讨其相关机制。方法:在质粒pGCsi-H1/GFP-hTERT干扰后,采用端粒酶TRAP、半定量RT-PCR和Western blot方法检测胆囊癌细胞GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和-βcatenin基因mRNA、蛋白质表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)光吸收法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、运用Transwell小室了解癌细胞侵袭情况。结果:pGCsi-H1/GFP-hTERT对GBC-SD端粒酶活性、SDH活性、侵袭、hTERT mRNA、hTERT蛋白均有抑制作用并随浓度升高而增强。pGCsi-H1/NEGative对上述指标无明显抑制作用,与pGCsi-H1/GFP-hTERT抑制作用比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:pGCsi-H1/GFP-hTERT可以抑制端粒酶、SDH活性及其侵袭力,其机制与hTERT mRNA及蛋白表达降低有关。

吲哚美辛和hTERT-siRNA对胆囊癌细胞的作用

目的研究吲哚美辛和hTERT-siRNA对胆囊癌细胞株GBC-SD的端粒酶活性、细胞增殖、运动的抑制作用；并试从β-catenin／hTERT信号转导途径揭示其分子机制。方法采用端粒酶TRAP、半定量RT-PCR和Western Blot印迹方法检测GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和β-catenin基因mRNA、蛋白质表达水平。四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法检测琥珀酸脱氢酶（SDH）活性并做细胞增殖计数、运用Transwell小室和划线了解癌细胞侵袭与运动情况。结果质粒pGCsi-H1／GFP-hTERT转染GBC-SD细胞6～24h再加入吲哚美辛后对GBC-SD细胞的端粒酶、SDH活性、细胞增殖、运动、侵袭力均具有很明显的抑制作用，分别同阴性对照pGC-si-H1／NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较，差异有显著性（P〈0．01）。pGCsi-H1／GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛，检测hTERT mRNA和hTERT蛋白表达，分别与pGCsi-H1／NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较，差异有显著性（P〈0．01）。pGCsi-H1／GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛，检测β-catenin mRNA和p-catenin蛋白表达．分别与pGCsi-H1／NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较，无明显差异（P〉0．05）。结论吲哚美辛可增强hTERT-siRNA抑制GBC-SD细胞端粒酶、SDH的活性，及其增殖、运动、侵袭力，降低hTERTmRNA和hTERT蛋白表达，其机制与β-catenin／hTERT信号转导途径受抑存在一定联系。

hTERT-siRNA抑制胆囊癌细胞端粒酶活性及增殖运动的研究

[目的]探讨hTERT-siRNA对GBC-SD端粒酶活性、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、侵袭、hTERTmRNA、hTERT蛋白的作用及其相关机制。[方法]在质粒pGCsi-H1/GFP-hTERT干扰后,采用端粒酶TRAP、半定量RT-PCR和Westernblot方法检测GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和β-catenin基因mR-NA、蛋白质表达水平。四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收法检测SDH活性,运用Transwell小室了解癌细胞侵袭情况。[结果]pGCsi-H1/GFP-hTERT对GBC-SD端粒酶活性、SDH活性、侵袭、hTERTmRNA、hTERT蛋白均有抑制作用并随浓度升高而增强。pGCsi-H1/negative对上述指标无明显抑制作用,与pGCsi-H1/GFP-hTERT抑制作用比较差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]pGCsi-H1/GFP-hTERT通过降低hTERTmRNA及蛋白表达降低,进而抑制端粒酶、SDH活性及其侵袭力。

端粒酶逆转录酶-siRNA抑制胆囊癌细胞端粒酶活性及代谢侵袭的研究

目的了解端粒酶逆转录酶(hTERT)-siRNA对GBG-SD细胞代谢、侵袭和端粒酶活性、hTERT mRNA、hTERT蛋白、β-catenin mRNA、β-catenin蛋白的作用,并探讨其相关机制。方法在质粒pGCssi-H1-GFP-hTERT干扰后,采用端粒酶TRAP、半定量逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)和Westem blot方法检测GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和β-catenin基因mRNA、蛋白质表达水平。噻唑蓝(MTT)比色法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、运用Transwell小室了解癌细胞侵袭情况。结果pGCsi-H1/GFP-hTERT对GBC-SD端粒酶活性、SDH活性、侵袭、hTERT mRNA、hTERT蛋白均有抑制作用并随浓度升高而增强。pGCsi-H1/NEGative对上述指标无明显抑制作用,与pGCsi-H1/GFP-hTERT抑制作用比较差异有统计学意义(P＜0．01)。结论pGCsi-H1/GFP—hTERT可以抑制端粒酶、SDH活性及其侵袭力,其机制与hTERT mRNA及蛋白表达降低有关。