脑损伤诱导神经细胞凋亡的动物实验研究

为探讨脑损伤诱导神经细胞凋亡的作用及其机制，应用大鼠液压冲击脑损伤模型，在脑损伤后不同时间段（３ｈ，１２ｈ，２４ｈ，４８ｈ，７２ｈ）处死动物，分别应用ＨＥ染色、流式细胞仪检测、ＴＵＮＥＬ法测定、ＤＮＡ凝胶电泳分析，免疫组化研究神经细胞凋亡的改变。结果显示：动物经中度脑损伤处理后，其受伤各时间段脑组织可见凋亡的神经细胞及ＴＵＮＥＬ阳性细胞，ＤＮＡ呈现“梯状”断裂现象，细胞凋亡百分率为９．８％￣１４．

血清糖化蛋白测定在急性脑血管疾病中的应用价值

35例DACVD、59例ACVD及65名正常人同时检测血清糖化蛋白及血糖,发现ACVD组与正常组比较,其血糖P值<0.001,糖化蛋白P值>0.05;DACVD组与ACVD组比较,其糖化蛋白P值<0.05,血糖P值>0.05。说明ACVD组的血糖升高为应激性高血糖。血清糖化蛋白测定,为临床正确区分糖尿病神经病变和应激性高血糖带来便利。

MSC-CNTF靶向性治疗变态反应性脑脊髓炎动物对病情和炎症的影响

目的探讨重组腺病毒转导的骨髓间充质细胞(MSC)导向的睫状神经营养因子(CNTF)基因靶向性治疗C57小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE),对动物病情和和炎症的影响。方法用成功构建的Ad-CNTF-IRES-GFP载体,体外观察Ad-CNTF-IRES-GFP转染MSC(MSC-CNTF)对MSC表达CNTF的影响,再用MOG35-55建立C57BL/6小鼠的EAE模型,将MSC-CNTF移植治疗EAE小鼠,观察EAE动物病情评分;ELISA法观察外周血的促炎症因子TNF-α、IFN-γ,IL-12p35和抗炎症因子IL-10的水平,HE染色观察脑和脊髓炎症细胞浸润,用免疫荧光和免疫组化观察病变部位CD3(+)T细胞、炎性细胞因子TNF-α、IFN-γ的表达水平。结果(1)MSC-CNTF在MOI等于100的情况下,分泌的CNTF较DIL染色的MSC(MSC-DIL)、或Ad-eGFP转染的MSC(MSC-GFP)增高20倍(P<0.01)。(2)MSC-CNTF治疗的EAE小鼠病情显著减轻。不仅平均发病时间缩短,发病率下降,病情减轻,而且病情严重程度也明显减轻。(2)MSC-CNTF治疗明显减低EAE小鼠外周血TNF-α和IFN-γ水平,明显升高外周血IL-10水平。(3)MSC-CNTF治疗EAE小鼠可明显降低病变部位的炎症细胞数量和炎性细胞因子TNF-α水平,而对IFN-γ表达几乎影响不大。结论MSC-CNTF移植治疗的EAE动物病情明显减轻,其机制是:减低外周血TNF-α和IFN-γ水平,降低病变部位CD3(+)细胞数量和炎性细胞因子TNF-α水平。

椎管内肿瘤的诊断和治疗(附102例分析)

椎管内肿瘤102例，其中髓内肿瘤15例，髓外硬膜内肿瘤67例，硬膜外肿瘤20例。手术治疗98例，4例诊断为转移瘤予以化疗和放射治疗。MRI问世前，诊断方法首选脊髓造形术，包括CT—脊髓造形术。结论：MRI能明确显示肿瘤的部位、界限、性质。手术应持积极态度，早期诊断，尽早手术治疗，对种经功能的恢复有着重要的意义。

靶向IGF1R的siRNA抑制人肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤的实验研究

背景与目的:利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法。本研究探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)的短发夹环RNA对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤的抑制作用。方法:设计并合成特异性靶向IGF1R的siRNA片段,构建SMMC7721-IGF1R-siRNA表达质粒,将其转入SMMC7721细胞。通过G418筛选出稳定株,移植裸鼠成瘤。同时设立对照组。根据体积的均数值绘制肿瘤生长曲线,以HE染色法观察质粒处理后瘤组织的病理改变,Westernblot检测肿瘤组织中IGF1R的表达变化,免疫组化SP法检测检测瘤组织内微血管密度,原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果:SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤体积与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721组相比差异有统计学意义(P<0.05)。病理学检查及TUNEL检测发现,SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞凋亡指数[(50.2±6.4)%]明显高于SMMC7721-IGF1R-mutation组[(5.4±1.0)%]和SMMC7721组[(6.0±2.1)%](P<0.05)。SMMC7721-IGF1R-siRNA组与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721相比,瘤内IGFIR蛋白表达明显下调。SMMC7721-IGF1R-siRNA组微血管密度(11.3±4.4)与SMMC7721-IGF1R-mutation组(36.7±7.6)、SMMC7721组(28.4±6.5)相比明显下降(P<0.05)。结论:构建的SMMC7721-IGF1R-siRNA具有RNA干扰作用,能抑制SMMC7721细胞裸鼠移植瘤的生长。

运用siRNA建立稳定低表达IGF1R基因的肝癌细胞株的实验研究

目的运用siRNA技术在肝癌细胞株中建立稳定低表达人胰岛素样生长因子1类受体(IGF1R)基因的细胞株。方法构建包含封闭IGF1R基因的真核表达载体pSUPER-IGF1R-siRNA,转染SMMC7721和Hep3B细胞,G418筛选表达稳定的细胞株。通过RT-PCR、Western-blot分析与鉴定IGF1R mRNA和蛋白及cyclin D1、cyclinB1蛋白的表达,并绘制细胞生长曲线。结果在SMMC7721和Hep3B细胞中成功建立低表达IGF1R基因的细胞株,其生长明显减慢(P<0.05),且其cyclinD1表达亦明显下降(P<0.05)。结论pSUPER-IGF1R-siRNA能抑制SMMC7721和Hep3B细胞的生长。

兴奋性氨基酸与神经系统疾病

兴奋性氨基酸与神经系统疾病董瑞国综述庄柏翔审校近年来，随着对兴奋性氨基酸（ＥｘｃｉｔａｔｏｒｙＡｍｉｎｏＡｃｉｄ，ＥＡＡ）研究的深入，已有越来越多的证据表明它与多种神经系统疾病的发病、病生、预后、治疗等方面有着密切关联。本文将对有关问题进行探讨，着重...

蛋白激酶R与丙型肝炎病毒核心蛋白相互作用区域定位

目的:观察丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(CP)对蛋白激酶R(PKR)表达的影响;定位PKR与CP直接结合的区域。方法:对Huh-7、转染表达CP的Huh-7及含有全长HCV复制子(replicon)Huh-7细胞株的PKR表达水平及干扰素(IFN)诱导前后replicon Huh-7细胞中HCV结构蛋白和非结构蛋白表达水平作比较;对CP与PKR进行免疫共沉淀试验、谷胱苷肽S转移酶(GST)结合试验。结果:Replicon Huh-7中PKR表达水平高于Huh-7及转染表达CP的Huh-7;IFN诱导后PKR表达增加,且明显抑制HCV结构和非结构蛋白的表达;PKR能与CP直接结合,依赖于PKR的N端1-180氨基酸(aa)。结论:CP能直接作用于PKRN端1-180aa,导致PKR组成性激活,从而干扰PKR介导的相关信号转导通路。CP与PKR的相互作用是HCV病毒蛋白与细胞蛋白相互作用又一新的模式,在HCV持续感染及肝癌2者发病机制方面可能起重要作用。

人胰腺癌不同转移潜能细胞株的分离筛选和鉴定

目的获得不同转移潜能的胰腺癌细胞株。方法通过有限稀释法获得人胰腺癌细胞系AsPC-1中不同的单细胞克隆细胞瘤,经过侵袭实验初筛后选择转移潜能不同的2株亚细胞株N1的N7,利用细胞生长曲线测定、软琼脂克隆形成实验、细胞周期检测、裸鼠种植癌转移状态来分析它们的生物学性质。结果N7体外生长速度明显快于N1;N7软琼脂克隆形成率为109±13,明显高于N1的26±5（P〈0.05）;N7的G2/M比率为26.3±1.9,明显高于N1的8.3±1.3（P〈0.01）;N7裸鼠体内种植癌肝转移率为100%,明显高于N1的0。结论从同一亲本筛选出转移潜能高低的2个亚细胞系,N7为高转移潜能亚细胞系,N1为低转移潜能亚细胞系。

多排螺旋CT血管成像（MSCTA）诊断椎动脉入横突孔异常（附14例报告）

目的探讨多排螺旋CT血管成像（MSCTA）对动脉人横突孔异常诊断价值。方法回顾性分析了15例椎动脉入横突孔异常患者的临床资料及其多排螺旋CT札管成像（MSCTA）表现。结果14例均在多排螺旋CT血管成像（MSCTA）上显示椎动脉入横突孔异常，部分合并椎动脉狭窄。其临床主要表现椎基底动脉供血不足及眩晕，表现较为典型单一。结论诊断椎动脉入横突孔异常诊断主要靠影像学，多排螺旋CT血管成像（MSCTA）可作为一种安全有效的影像诊断手段，对诊断椎动脉入横突孔异常颇有意义。

人朊病毒病——Creutfeldt-Jakob病

人朊病毒病———ＣｒｅｕｔｆｅｌｄｔＪａｋｏｂ病徐州医学院附属第一医院（２２１００２）庄柏翔ＣｒｅｕｔｆｅｌｄｔＪａｋｏｂ病（ＣＪＤ）是人类最常见由人朊病毒引起的人畜共患疾病（Ｚｏｏｎｏｓｅｓ），今就国内外文献研究进展叙述如下。ＣＪＤ首次由Ｃｒｅ...

疟疾儿童血液学分析

目的探讨疟疾患儿外周血三系、血沉及骨髓像变化。方法使用希森美康KX-21血液分析仪检测22例疟疾患儿血细胞,血沉用魏氏法,骨髓进行人工形态学分析。结果疟疾患儿22例Hb<110g/L占68.2%;WBC<4×109/L占41.0%;PLT<100×109/L占77.3%;至少2项低于正常水平占63.6%,3项指标均低占36.4%。血沉增高占95.5%。增生性贫血骨髓像占59.1%,继发性血小板减少骨髓像占77.3%;两者合并占54.5%。结论疟疾患儿外周血3系改变较大。其中PLT和Hb降低最为突出;血沉极大多数增高。骨髓多呈增生性贫血及继发性血小板减少性骨髓像。

急性脑血管病血糖、糖化蛋白测定及其意义探讨

观察无糖尿病史的ＡＣＶＤ９５例。通过糖化蛋白的测定，发现其中有１０例为糖尿病神经病变。余８５例结果显示ＡＣＶＤ轻中型者血糖值（５．９±２．４ｍｍｏｌ／Ｌ）与对照组（５．１±１．３ｍｍｏｌ／Ｌ）无显著差异，ＡＣＶＤ重型者血糖值（８．３±３．９ｍｍｏｌ／Ｌ）与对照组及ＡＣＶＤ轻中型者有显著差异；脑梗塞组、脑出血组和对照组血糖值之间无显著性差异。作者认为是否引起应激性血糖升高，关键在于ＡＣＶＤ病情严重程度，而与ＡＣＶＤ的诊断分类（如脑梗塞、脑出血）无关。故检测ＡＣＶＤ患者血糖、糖化蛋白，能及时通过应激性血糖情况，正确地判断病情和指导治疗。

乳腺癌超声征象与腋淋巴结转移及肿瘤微淋巴管密度的关系

目的 应用免疫组织化学技术检测肿瘤微淋巴管密度（LMVD）,通过乳腺癌原发病灶彩色多普勒超声各征象与病理腋淋巴结转移及肿瘤LMVD的相关性研究,探讨乳腺癌病灶超声征象与肿瘤生物学行为及腋淋巴结转移的关系. 方法浸润性乳腺癌患者95例,年龄（50.2±12.4）岁.手术前均未进行化疗或放疗,均于术前1周内进行乳腺超声检查,观察并记录病灶大小、前后径与左右径比值（AP/W）、边缘毛刺征、病灶周围高回声晕、边界、肿瘤内及肿瘤周边血流信号分布情况以及动脉血流峰速值（PSV）、阻力指数（RJ）.随机选取30例术后肿瘤石蜡标本切片进行免疫组织化学VEGFR-3染色,计数LMVD.对病灶超声征象及血流参数与病理腋淋巴结状况及LMVD关系进行研究. 结果手术后病理结果显示,腋淋巴结转移占35.8%（34/95）,未转移占64.2%（61/95）.病灶测值最大径〉2 cm、AP/W〉1、边缘毛刺及边界模糊是发生腋淋巴结转移的危险因素（P〈0.05）,OR（95%CI）分别为5.6（2.1～14.7）、5.2（2.0～13.1）、5.5（2.0～15.2）和6.0（1.9～19.0）;彩色及能量多普勒血流征象及血流动力学参数与淋巴结转移关系的单因素分析中,病灶血流信号分级、血流分布类型及PSV〉25 cm/s与腋淋巴结转移有关（P〈0.05）;超声声像图显示病灶边界模糊组肿瘤LMVD高于边界清晰组（P〈0.05）. 结论浸润性乳腺癌病灶病灶超声征象与腋淋巴结转移相关;超声边界模糊与肿瘤LMVD相关.

精细化护理干预对股骨颈骨折行人工髋关节置换术患者的影响

目的:探讨精细化护理干预对股骨颈骨折行人工髋关节置换术患者的影响。方法:将60例股骨颈骨折行人工髋关节置换术患者根据术后护理干预方式不同分为对照组和研究组各30例,对照组给予常规护理,研究组给予精细化护理干预,比较两组护理效果。结果:研究组术后下肢深静脉血栓形成(DVT)发生率低于对照组( P<0.05),髋关节疼痛情况较对照组轻(P < 0.05 ),术后1、3个月髋关节功能Harris评分高于对照组( P <0.05)。两组护理后健康状况调查简表(SF-36)评分高于护理前( P < 0.05),研究组护理后SF-36评分高于对照组( P <0.05)。结论:对股骨颈骨折行人工髋关节置换术患者实施精细化护理干预措施效果较好,可有效减轻患者关节疼痛,加速髋关节功能恢复,降低术后DVT发生风险,改善生活质量。

RNA干涉胰岛素样生长因子1类受体的研究

RNAi技术的关键是siRNA的制备，实验结果证实，通过发卡结构的小RNA（shRNA）载体表达siRNA可以抑制特定靶基因表达。我们通过将针对IGFIR基因的RNA干扰片段装入特定质粒PSUPER中，再转染入人肝癌细胞株SMMC7721中，并筛选出稳定株。

缺氧和机械损伤诱导大鼠神经细胞凋亡的体外研究

目的 探讨神经细胞凋亡与缺氧和机械损伤的关系。 方法 体外原代培养大鼠神经元细胞 ,经低氧或机械损伤处理后 ,应用光镜、电镜、末端脱氧核苷酸介导的X -dUTP缺口末端标记 (TdT -mediateddUTPneikendlabeling ,TUNEL)法、流式细胞仪、DNA凝胶电泳及免疫组化分析细胞凋亡及其相关基因表达的改变。 结果 经低氧或机械损伤后神经细胞出现凋亡的形态改变 ;其DNA呈现“梯状”断裂现象 ;细胞凋亡百分率分别为 10 .8%和 4.8% (对照组为 1.6 % ) ,凋亡相关基因 (c-myc、fas、fasL)表达明显增加。结论 缺氧及机械损伤可诱导神经细胞凋亡 ,其分子机制可能与某些凋亡相关基因表达改变有关。