大肠癌CD133(+)、Musashi-1(+)干细胞与临床病理学因素及MGMT、ERCC1、TS关系的研究

目的探讨大肠癌CD133(+)、Musashi-1(+)干细胞与临床病理因素及MGMT、ERCC1、TS的关系。方法应用免疫组织化学方法(SP法)检测42例大肠癌组织的CD133、CD138、Musashi-1、MGMT、ERCC1、TS蛋白,对各指标之间的相关关系及其与临床病理学因素之间的关系进行分析。结果①CD133与组织类型、Dukes分级、静脉侵袭、远处转移及毛细血管密度(MVD)等有关(P<0.05);CD138、Musachi-1与组织类型、浆膜侵犯、静脉侵袭、淋巴管侵袭、淋巴结转移、远处转移及MVD等有关(P<0.05),CD138并与神经纤维间隙侵袭(NI)有关(P<0.05);CD133与CD138的表达呈负相关(P<0.01),与Musashi-1的表达呈正相关(P<0.01)。②MG-MT、ERCC1与组织类型有关(P<0.05);TS与组织类型、Dukes分级、淋巴管侵袭、淋巴结转移有关(P<0.05);MGMT表达与ERCC1、TS表达呈负相关(P<0.01),ERCC1表达与TS表达呈正相关(P<0.01)。③CD133、Mu-sashi-1的表达均与MGMT的表达呈负相关(P<0.01),与TS、ERCC1的表达呈正相关(P<0.01)。结论①CD133(+)、Musashi-1(+)细胞在大肠癌的浸润与转移中起重要协同作用。②CD133(+)、Musashi-1(+)细胞与MGMT、TS、ERCC1耐药基因蛋白的表达具有密切关系,后者在大肠癌的侵袭中也具重要作用。

牛膝多糖联合5-氟尿嘧啶对食管癌的作用及相关机制的探讨

目的:探讨牛膝多糖(Achyranthesbidentatapolysaccharides,ABPS)及其联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对食管癌EC9706细胞的作用及可能机制。方法:通过MTT法检测ABPS(3个浓度100、200、300μg/ml)及联合5-Fu对食管癌细胞的增殖的作用;用流式细胞术检测细胞周期改变及凋亡率,Western blot检测ABPS对食管癌细胞周期相关基因p21和p27表达的影响;免疫细胞化学检测凋亡相关基因bax、bcl-2的表达。结果:(1)ABPS可以抑制食管癌EC9706细胞的增殖;ABPS与5-Fu联合应用对食管癌细胞的增殖抑制作用强于两者单用;(2)ABPS作用后的EC9706出现了G0/G1期的阻滞和早期凋亡;其机制可能分别涉及p21和p27基因表达的增加以及bax基因表达的增加和bcl-2基因表达的减少。结论:ABPS对食管癌细胞的增殖有抑制作用;ABPS与5-Fu联合使用具有协同抗肿瘤作用。

大肠腺管开口分型与hMLH1和hMSH2蛋白表达在染色放大内镜下的相关性

目的:探讨染色放大内镜下大肠病变的腺管开口分型与病变组织hMLH1和hMSH2蛋白表达的关系.方法:根据Kudo分型方法,染色放大内镜下大肠病变腺管开口分为Ⅰ-Ⅴ型;所有病灶性质由病理组织学分别确诊为非肿瘤性病变、腺瘤性病变及癌性病变;免疫组织化学方法检测活检组织hMLH1和hMSH2蛋白的表达.结果:应用染色放大内镜对146例患者的大肠黏膜进行细微结构形态学观察,共检出息肉样病变256枚.随着腺管开口分型序数的递增,活检组织中hMLH1与hMSH2蛋白的丢失率逐渐增高,Ⅰ-Ⅴ型hMLH1丢失率分别为0.00%(0/11)、1.61%(1/62)、19.68%(25/127)、33.33%(1/3)、32.26%(10/31)、36.36%(8/22);hMSH2蛋白丢失率分别为0.00%(0/11)、3.22%(2/62)、16.53%(21/127)、33.33%(1/3)、35.48%(11/31)、40.90%(9/22),组间两两比较差异有统计学意义(均P<0.01);74例大肠黏膜非肿瘤性病变中2例hMLH1表达阴性,占2.70%(2/74),3例hMSH2表达阴性,占4.05%(3/74);130例腺瘤组织中30例hMLH1表达阴性,占23.07%(30/130),22例hMSH2表达阴性,占16.92%(22/130);52例癌变组织中13例hMLH1表达阴性,占25%(13/52),16例hMSH2表达阴性,占30.76%(16/52),癌性病变组hMLH1与hMSH2蛋白的丢失率明显高于腺瘤性病变组及非肿瘤性病变组(均P<0.01);hMSH2与hMLH1蛋白的丢失率在不同病变组织中(非肿瘤性病变、腺瘤性病变及癌性病变)无相关性(均P>0.05).结论:随着大肠腺管分型序数的递增,hMLH1和hMSH2蛋白的丢失率逐渐增加,与大肠病变病理诊断中的丢失率具有一致性,提示DNA错配修复基因突变或功能缺失可能是大肠发生癌变进程中的早期事件,染色放大内镜下随访大肠腺管组织中hMLH1和hMSH2蛋白的丢失率有助于发现癌前病变、大肠癌.

Bmi-1-siRNA对食管癌细胞株EC9706的影响

目的:探讨Bmi-1-siRNA对食管癌EC9706细胞的影响。方法:将不同浓度(50、100、150 nmol/L)的Bmi-1-siRNA转染EC9706细胞24、48、72 h,MTT法检测各组各时间段细胞增殖情况,免疫细胞化学检测转染后EC9706细胞内Bmi-1、端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、P16蛋白的表达,原位杂交方法检测Bmi-1 mRNA的表达。结果:Bmi-1-siRNA对EC9706细胞的生长抑制率明显升高,且具有时间依赖性和剂量依赖性(F=1.322、2.881,P<0.001);EC9706细胞中Bmi-1、hTERT蛋白表达明显降低,P16蛋白表达升高(F=12.229、23.556、19.414,P<0.001)。结论:Bmi-1-siRNA有效抑制EC9706细胞的增殖,其机制可能为降低Bmi-1 mRNA及Bmi-1、hTERT蛋白的表达,上调P16蛋白的表达。

曲古菌素A上调食管癌CAR的表达及增强溶瘤腺病毒转染效率的体外研究

目的通过观察组氨酸去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古菌素(trichostatin A,TSA)对食管癌细胞株EC9706膜表面柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)表达水平的影响,观察TSA能否通过上调食管癌EC9706CAR表达而增强其对腺病毒基因转染效率。方法采用免疫细胞组织化学、RT-PCR、Western blot检测食管癌EC9706细胞CAR的表达情况,再用上述方法检测TSA作用EC9706细胞后,CAR mRNA和CAR蛋白表达的改变;同时采用流式细胞术测定病毒转染效率,MTT实验评价腺病毒携带的胸苷激酶(Ad-TK)的体外抗瘤效应。结果 0.5μmol/LTSA处理EC9706细胞12、24、48h后,CAR mRNA和蛋白表达量[分别为(0.44±0.01)、(0.37±0.02),(0.66±0.04)、(0.58±0.01),(0.77±0.05)、(0.70±0.03)]与未加TSA处理组[(0.27±0.02)、(0.22±0.03)]相比,CAR mRNA和蛋白表达水平显著提高(P<0.05,P<0.01),呈现出时间依赖关系。流式细胞仪分析Ad-GFP转染后GFP的表达发现,未加TSA处理细胞转染效率为(1.35±0.11)%,0.5μmol/L TSA作用12、24h和48h后,细胞转染效率分别为(2.58±0.17)%、(4.96±0.14)%、(6.36±0.15)%。MTT检测Ad-TK介导的体外杀伤作用结果显示,0.5μmol/L TSA作用48h比未加TSA增强8倍。结论 TSA通过上调CAR表达量从而增强腺病毒对食管癌细胞的腺病毒基因转染效率。

LTD4及MK571对人结肠癌细胞SW480、Caco-2凋亡和增殖作用的体外研究

目的 观察半胱氨酰白三烯D4（LTD4）及半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂MK571对人结肠癌细胞株SW480、Caco-2增殖和凋亡的影响.方法 MTT法检测细胞生长活性;FITC Annexin V/碘化丙啶（PI）双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;PI染色细胞,用流式细胞仪检测细胞周期.结果 12.5 ～ 400 μg/L的LTD4对结肠癌SW480细胞有促增殖作用,且存在时效和量效依赖性;而1.6～12.5μg/L的LTD4处理24、48 h,对SW480细胞的增殖抑制作用无明显影响,作用时间延长至72 h,可促进SW480细胞的增殖.50～ 400 μg/L的LTD4对结肠癌Caco-2细胞有促增殖作用,且存在时效和量效依赖性;而1.6-50 μg/L的LTD4对结肠癌Caco-2细胞的影响与对照组相比差异无统计学意义.6.25～200 μmol/L的MK571对结肠癌SW480细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而0.8 ～ 6.25 μmol/L的MK571对SW480细胞的影响与对照组相比无明显差异.25～ 200 μmol/L的MK571对结肠癌Caco-2细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而0.8～ 25 μmol/L的MK571对结肠癌Caco-2细胞的影响与对照组相比差异无统计学意义.与阴性对照组相比,25 ～ 100 μg/L的LTD4对2种结肠癌SW480细胞和Caco-2细胞有促凋亡作用,且存在时效和量效依赖性;而100、200 μmol/L的MK571对2种结肠癌的凋亡无明显作用.与阴性对照组相比,25 ～ 100 μg/L的LTD4可以降低2种结肠癌细胞株G0/G1期比例,增加G2/M及S期比例;而100、200 μmol/L的MK571增加2种结肠癌细胞G0/G1期的比例,降低G2/M及S期比例.结论 LTD4具有促进人结肠癌SW480、Caco-2细胞株增殖的作用,该作用可能的作用机制是抑制凋亡、增加G2/M及S期细胞比例.MK571可抑制2种结肠癌细胞株的增殖,但对凋亡无明显影响,其抑制增殖作用的可能机制是阻滞细胞于G0/G1期.

三氧化二砷对结肠癌小鼠移植瘤淋巴管形成与MMP-9表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As：O，）对结肠癌淋巴管形成与MMP-9表达的影响。方法建立结肠癌小鼠移植瘤模型，分为1mg／（kg·d）As2O3，组、2mg／（kg·d）As：0，组和生理盐水组（注射等体积生理盐水）。应用免疫组织化学方法检测肾小球足突细胞黏蛋白（podoplanin）、血管内皮生长因子C（VEGF—C）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达并计数微淋巴管密度（MLD）。结果As2O3处理组VEGF—C和MMP-9的表达均较生理盐水组明显减弱，2mg／（kg·d）As2O3组VEGF—C和MMP-9的表达明显弱于1mg／（kg·d）As2O3组；As2O3处理组MLD较生理盐水组明显减少，2ms／（kg·d）As2O3组MLD明显少于1mg／（kg·d）As2O3组；以上差异均具有统计学意义。结论As2O3对小鼠结肠癌移植瘤的淋巴管形成与MMP-9表达均有抑制作用。

免疫组化在前列腺穿刺活检中的诊断价值

目的分析免疫组化在前列腺穿刺活检中的诊断价值。方法资料随机选自2013年2月至2014年2月本院采集的35例男性前列腺穿刺活检标本,分析应用免疫组化五项指标(在本组前列腺病变患者穿刺活检标本中的阴性、阳性检出情况。结果 CK5/6、34βE12、P63对前列腺病变即前列腺癌、前列腺增生、前列腺上皮内瘤、前列腺转移性癌阳性检出率均较低,P504S阳性检出率较高,PSA在前列腺转移性癌检测为阴性外,其他三项检测均为阳性。结论免疫组化五项指标均有一定阳性、阴性检出率,联合应用诊断效果较佳,有重要研究价值。

去乙酰化酶抑制剂对乳腺癌细胞周期作用及分子机制的探讨

目的研究去乙酰化酶抑制剂(MS-275)对乳腺癌细胞(MCF7)周期的作用及机制。方法 0.5、1.0、1.5μmol/L MS-275作用MCF7细胞24 h,用噻唑蓝(MTT)观察不同浓度MS-275对MCF7细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞生长及周期;Westernblotting检测MS-275对乳腺癌细胞周期相关基因的表达。结果 1.0μmol/L浓度的MS-275对MCF7细胞生长有抑制作用并呈现一定的量效关系,1.0μmol/L浓度以上明显诱导阻滞乳腺癌细胞MCF7细胞周期,明显增加p21,p27基因的表达,明显降低CCND1、CDK4D基因的表达。结论一定剂量的MS-275抑制乳腺癌MCF7细胞的生长,可通过调控多个细胞周期相关基因诱导乳腺癌细胞细胞周期阻滞,细胞阻滞的发生与p21,p27基因表达的增加及CCND1、CDK4D基因表达的减少相关。

牛膝多糖联合顺铂对食管癌细胞EC1细胞增殖的影响

本实验旨在研究牛膝多糖联合顺铂CDDP对食管癌EC1细胞增殖的影响。方法:单用CDDP和单用牛膝多糖作用于EC1细胞24h、48h、72h后,MTT法检测EC1细胞增殖的影响。牛膝多糖联合应用低剂量CDDP作用48h后MTT法检测对EC1细胞增殖的影响。结果:随着单独采用牛膝多糖、顺铂浓度的增高,作用时间的延长,其对EC1细胞的抑制作用增强。牛膝多糖与小剂量CDDP联合作用明显抑制EC1细胞的增殖,与独用CDDP、牛膝多糖组相比,细胞生存率显著降低,对照组、牛膝多糖组细胞的活性均随着CDDP浓度的增加而降低,在同一浓度,牛膝多糖与CDDP联合应用可显著提高EC1细胞对化疗药物的敏感性。结论:牛膝多糖与小剂量CDDP联合,可以抑制食管癌细胞的增殖,加强食管癌细胞对化疗药物的敏感性,因此牛膝多糖有望成为食管癌治疗的辅助药物。

鼻咽癌的多排螺旋CT表现与E-cadherin蛋白表达关系的研究

探讨E-cadherin蛋白表达与鼻咽癌多排螺旋CT影像表现的关系。方法:多排螺旋CT扫描经病理证实的鼻咽癌25例,分析CT征象,免疫组织化学方法检测鼻咽癌中E-cadherin蛋白,比较分析CT征象与E-cadherin蛋白表达的相应关系。结果:E-cadherin蛋白阳性表达率在鼻咽癌多侧壁肿块组与单侧壁肿块组分别为73.11%与84.23%,差异无显著性意义(P>0.05);在无咽旁脂肪间隙消失组与有咽旁脂肪间隙消失组分别为100.00%与10.21%,差异有显著性意义(P<0.05);无后鼻道累及组与后鼻道有累及组分别为94.85%与62.28%,差异有显著性意义(P<0.05);无侵犯上颌窦组与侵犯上颌窦组分别为90.48%与56.84%,差异有显著性意义(P<0.05)。无颅底骨质破坏组与有颅底骨质破坏组,E-cadherin蛋白阳性表达率分别为100.00%与38.50%,差异有显著性意义,(P<0.05),无颈部淋巴结转移组与有颈部淋巴结转移组分别为83.00%与54.00%,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:E-cadherin蛋白在鼻咽癌转化中至关重要,其表达高低与鼻咽癌的浸润深度、淋巴结转移有一定的相关性,E-cadherin蛋白表达率可作为评估鼻咽癌CT表现恶性程度及预后指标。