PDTC逆转K562/AO_2细胞多药耐药性机制研究

目的研究核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)逆转K562/AO2细胞耐药效应及其机制。方法采用MTT比色法分别检测K562/AO2细胞的耐药性、PDTC对K562/AO2细胞增殖的影响以及非细胞毒剂量PDTC、维拉帕米(Ver)预作用后K562/AO2细胞药物敏感性的变化,采用免疫细胞组织化学法、RT-PCR检测K562、K562/AO2细胞NF-κB、mdr-1 mRNA表达水平以及PDTC作用一定时间对其影响。结果①K562/AO2细胞对阿霉素(ADM)的耐药性是K562细胞的59倍;非细胞毒剂量PDTC预作用后,ADM对K562/AO2细胞的半数抑制浓度(IC50)显著降低,相对逆转耐药效率为93.03%,强于经典耐药逆转剂Ver的作用81.07%(P<0.01);②K562/AO2细胞NF-κB表达水平高于K562细胞(P<0.01);PDTC可有效抑制K562/AO2细胞NF-κB表达,伴随mdr-1 mRNA表达减少,呈时间依赖性。结论抑制NF-κB异常活化可部分逆转K562/AO细胞耐药性,其机制与mdr-1 mRNA转录表达减少有关。

经导管介入治疗动脉导管未闭72例临床分析

目的：探讨介入治疗动脉导管未闭（PDA）的临床应用。方法：超声心动图确诊的动脉导管未闭（PDA ）72例患儿，均在 X 线透视及造影指引下经导管置入封堵器，术后24h 、1个月、3个月、6个月、12个月行心脏彩超随访进行评价。结果：PDA 形状：管型10例，漏斗型62例；直径：最窄处3～8．5mm ，平均4．94mm ，选用6／8～14／16mm PDA 封堵器。71例患儿一次封堵成功，1例患儿换用封堵伞后再次封堵成功。术中术后并发症少、轻微。术后1个月、3个月、6个月、12个月随访复查心脏彩超均无异常（其中53例术前心脏彩超提示左心室扩大者均恢复正常）。术后未出现心律失常、血红蛋白尿等并发症。结论：PDA 介入治疗成功率高、并发症少、疗效可靠。需掌握适应证，准确娴熟的操作技术可减少并发症。特殊病例可行个体化方案。

人脐血间充质干细胞移植联合mNGF治疗脑瘫大鼠的实验研究

目的研究经侧脑室内注入人脐血间充质干细胞(hUCB-MSCs)联合鼠神经生长因子(mNGF)对脑瘫大鼠治疗效果。方法采集足月新生儿脐带血100ml,分离、培养、纯化人脐血间充质干细胞并进行检测和鉴定。将七日龄SD大鼠100只随机分为正常组10只、实验组(缺血缺氧性脑瘫模型)90只,实验组随机分为5组:脑瘫模型组(CP组)、磷酸盐缓冲溶液(PBS)移植组、mNGF移植组、hUCB-MSCs移植组及hUCB-MSCs联合mNGF移植组。造模成功后1周,将hUCB-MSCs、mNGF分别注入左侧侧脑室,假移植组注射PBS液,移植后第1周、2周、3周,观察5溴-2脱氧尿核苷(BrdU)标记的脐血MSCs的存活、迁移,移植后第4周,对每组大鼠的神经行为学能力进行评估并检测大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白抗体(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达及观察脑组织的形态学变化。结果 1)人脐血MSCs主要分布在左侧侧脑室、额叶、顶叶皮质及白质,随时间进展,向四周脑组织转移,Brdu、NSE、GFAP阳性细胞逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.05);2)行为学评价:与模型组及假移植组比较,单移植组、联合移植组的足印潜伏期、迷宫逃避潜伏期缩短,足印重复间距及后足滑脱次数减小,联合移植组优于单移植组,差异有统计学意义(P<0.05);3)HE染色:MSCs和mNGF单移植组大鼠细胞形态及脑组织结构破坏较脑瘫组有所改善;联合移植组恢复情况更好,细胞形态恢复较单移植组好。结论外源性脐血MSCs联合mNGF经侧脑室移植,可改善脑瘫大鼠的远期行为及脑损害。

小干扰RNA干扰人CD4^+CD_(25)-T淋巴细胞MLL1基因的表达

目的探讨小干扰RNA(siRNA)对体外人CD4+CD25-T淋巴细胞MLL1基因表达的抑制效果及体外转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导调节性T淋巴细胞(iTreg)的影响,为治疗与Treg失衡相关的临床疾病提供理论基础。方法采用免疫磁珠分选方法从健康人外周血中分离出CD4+CD25-T淋巴细胞(纯度>85%)。MLL1基因的SET区对组蛋白3上的第4个赖氨酸位点的甲基化起重要作用,针对其设计并合成了不同的siRNAs,分别为带绿色荧光的siRNA(siRNA-FAM)、3个实验组(siRNA-1、siRNA-2、siR-NA-3)与1个阴性对照组(siRNA-NC)。采用脂质体法转染分选后培养24 h的人CD4+CD25-T淋巴细胞。先转染siRNA-FAM,于转染后的6 h,用荧光显微镜观察siRNA的转染效率,寻找最佳的转染条件。按照上述转染条件转染siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siR-NA-NC。于转染后的48 h,每组取2×106个细胞,提取细胞内RNA,然后反转录为cDNA,用聚合酶链反应扩增该片段,用琼脂糖凝胶检测扩增后的DNA。在MLL1基因表达受到抑制的情况下,采用流式细胞术检测TGF-β1诱导72 h iTreg的比例。结果当siR-NA为100 pmol,脂质体为5×10-6 L时,siRNA的转染效率最高为(50.80±0.61)%。该实验条件下,发现实验组siRNA-2对MLL1基因mRNA较对照组有明显削弱作用(F=5.820,P<0.05)。在MLL1基因表达削弱的情况下,TGF-β1诱导72 h iTreg比例有明显降低(F=4.046,P<0.05)。结论 siRNA可以有效抑制人CD4+CD25-T淋巴细胞中MLL1基因的表达,找到了具有较高转染效率的siRNA。TGF-β1体外诱导的iTreg受核因子MLL1的调节。