miRNA-125b经p53通路调控Alisertib耐药细胞代谢的机制研究

目的探讨Alisertib耐药的分子机制并寻找Alisertib耐药的潜在靶点。方法用Alisertib连续处理结肠癌细胞系建立耐药细胞株并命名为HCT-8-7T细胞,将HCT-8-7T细胞及人结肠癌细胞系HCT-8接种至免疫缺陷小鼠体内,观察小鼠其他器官转移瘤的情况。采用细胞克隆实验及Transwell迁移实验检测细胞的增殖及迁移能力,采用Seahorse分析仪检测细胞糖酵解及谷氨酰胺代谢能力的差异,Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应检测糖酵解及上皮-间质转化(EMT)标志物相关蛋白表达水平及mRNA水平。结果接种HCT-8-7T细胞的小鼠肝脏、肺脏、肾、卵巢等转移灶数量多于接种HCT-8细胞的小鼠(均P<0.05)。HCT-8-7T细胞腺嘌呤核苷三磷酸水平[(0.10±0.01)mmol/L]、糖酵解水平[(81.77±8.21)mpH/min]及糖酵解能力[(55.50±3.48)mpH/min]均高于HCT-8细胞[分别为(0.04±0.01)mmol/L、(27.77±2.55)mpH/min和(14.00±1.19)mpH/min,均P<0.05]。HCT-8-7T细胞中p53蛋白表达水平及mRNA表达水平低于HCT-8细胞(均P<0.05)。HCT-8-7T细胞中miR-125b表达水平(2.21±0.12)高于HCT-8细胞(1.00±0.00,P<0.001)。在HCT-8-7T细胞中,过表达p53导致细胞克隆数[(162.00±24.00)个]及细胞迁移率[(18.53±5.67)%]低于空白对照组[分别为(274.70±40.50)个和(100.00±29.06)%,均P<0.05]。miR-125b mimic组HCT-8-7T细胞糖酵解水平[(25.28±9.51)mpH/min]低于空白对照组[(54.38±12.70)mpH/min,P<0.05]。与空白对照组HCT-8-7T细胞比较,miR-125b mimic组HCT-8-7T细胞中p53和β-catenin蛋白水平升高,PFK1和HK1蛋白水平降低(均P<0.05)。结论miR-125b沉默p53是导致Alisertib耐药的机制之一,靶向miR-125b是克服Alisertib耐药的潜在可用之策。