2型糖尿病伴急性多发性脑梗死患者焦虑、抑郁情绪与认知功能障碍的相关性

目的研究2型糖尿病伴急性多发性脑梗死患者焦虑、抑郁情绪与认知功能障碍的相关性。方法 2型糖尿病患者69例,根据头颅MRI影像学检查结果分为2型糖尿病伴急性多发性脑梗死组(研究组)34例,平均年龄(66.53±9.25)岁;不伴脑梗死的单纯2型糖尿病组(对照组)35例,平均年龄(62.34±9.77)岁。受试者均测定身高、体重、血压、血脂谱、糖化血红蛋白(Hb A1c),采用汉密尔顿焦虑(HAMA)、抑郁(HAMD)量表评定两组焦虑、抑郁状况,采用蒙特利尔认知评估(Mo CA)量表测评两组认知功能。结果研究组收缩压及HAMA、HAMD评分均显著高于对照组(P<0.05)。研究组Mo CA评分显著低于对照组HAMD(P<0.001)。相关分析显示,研究组HAMD评分呈显著正相关(P<0.001),HAMD评分与Mo CA评分呈负相关(P<0.05)。结论 2型糖尿病伴急性多发性脑梗死患者比单纯糖尿病患者存在更多的焦虑、抑郁情绪及认知功能障碍,焦虑、抑郁情绪常同时存在,抑郁情绪越明显,认知功能障碍越严重。

过表达N-cadherin基因慢病毒表达载体的构建及稳定细胞株的建立

目的建立稳定过表达N-cadherin的人类胃癌MGC-803细胞系。方法从含有N-cadherin的质粒中利用PCR技术克隆N-cadherin基因编码序列。制备并浓缩慢病毒颗粒,将构建好的过表达N-cadherin慢病毒载体感染MGC-803细胞,并稳定遗传,嘌呤霉素筛选的阳性克隆传代培养5代后鉴定细胞内N-cadherin的表达。结果荧光显微镜下过表达N-cadherin组细胞有绿色荧光表达;PCR扩增得到含N-cadherin基因编码序列的特异性条带;重组的过表达N-cadherin载体中,过表达N-cadherin编码序列与目标序列几乎一致;Western blotting结果显示,在分子量为98 k D处有相应条带。结论成功建立稳定过表达N-cadherin的人类胃癌MGC-803细胞,此研究为进一步探讨N-cadherin基因的功能提供了良好的研究基础。

色素上皮衍生因子对高浓度地塞米松刺激下成骨细胞迁移、分化的影响

[目的]研究色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)在高浓度地塞米松刺激下,体外培养的成骨细胞迁移及分化的影响,探讨PEDF对成骨细胞功能的保护作用。[方法]将体外培养的MC3T3-E1细胞分为六组,分别为对照组、高浓度地塞米松(dexamethasone,DEX 10-6mol/L)组,PEDF干预地塞米松组,PEDF干预地塞米松组又按照PEDF的浓度分为3组(2、10、50 nmol/L)及成骨诱导培养组。采用Transwell小室及划痕实验于48 h后观察细胞的迁移情况。于14 d时采用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,并进行细胞化学染色(茜素红染色、油红O染色),运用Western Blot检测细胞内PPARγ-2、Runx2蛋白的表达。[结果]在高浓度地塞米松作用下,细胞迁移能力受到抑制,细胞分化能力减弱,胞浆中出现脂滴,Western Blot结果显示脂肪细胞标志蛋白PPARγ-2表达增高,成骨细胞标志蛋白Runx2表达减少。而PEDF干预后可明显逆转高浓度地塞米松抑制细胞迁移及分化的作用。[结论]大剂量应用糖皮质激素可能抑制成骨细胞的迁移及成骨分化能力,促进成骨细胞转分化为脂肪细胞,而PEDF可以有效地逆转这一过程,起到保护细胞功能的作用。

色素上皮衍生因子对高剂量地塞米松作用下MC3T3-E1细胞成脂转分化及骨保护素／核因子-κB受体活化因子配体表达的影响

目的观察色素上皮衍生因子（PEDF）对高剂量地塞米松（DEX）作用下MC3T3-E1细胞成脂转分化及骨保护素（OPG）／核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）表达的影响。方法将体外培养的MC3T3-E1细胞分为5组，分别为对照组、DEX（10^-6mol／L）组、PEDF干预DEX组，PEDF干预DEX组又按照加入的PEDF分为3个浓度组，依次为2、10、50nmol/L组。各组细胞培养14d时采用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化，进行细胞染色[碱性磷酸酶（ALP）染色、茜素红染色]及通过免疫荧光法检测OPG及RANKL的表达，并运用Western blot检测细胞OPG及RANKL蛋白的表达。结果成骨细胞ALP染色呈阳性，免疫荧光化学检测RANKL、OPG表达阳性。在高剂量DEX作用下，MC3T3-E1细胞发生明显成脂转分化，而PEDF的干预明显地抑制了这种转分化。与对照组（0．790±0．020）比较，高剂量DEX组（0．910±0．015）明显地上调了RANKL的表达水平（P=0．008）。加入PEDF后，RANKL的表达水平随着PEDF呈剂量依赖性下调。而OPG的表达水平随着PEDF呈剂量依赖性地增高。对比各组OPG／RANKL的表达水平，与DEX组（0．560±0．012）比较，PEDF干预DEX各亚组的OPG／RANKL的表达水平（0．821±0．025、1．290±0．018及1．405±0．120）随着PEDF的加入出现显著上调（P=0．003、0．000、0．019）。结论PEDF可有效地逆转高剂量DEX导致的成骨细胞成脂转分化，并且上调成骨细胞的OPG／RANKL的表达水平，从而保护成骨功能。