形成性评价在药剂学实验教学中的应用研究

药剂学实验是药剂学教学的重要环节。将形成性评价纳入药剂学实验教学,并对其教学效果进行分析。教学结果表明采用形成性评价的班级其实验态度、实验操作和实验结果均较其它班级有所提高。这次教学实验表明形成性评价在药剂学实验教学中起到了很好的效果。

咖啡因及代谢产物的尿药浓度测定方法建立及临床应用

目的建立同时测定尿液中咖啡因及3种代谢产物茶碱、副黄嘌呤和可可碱浓度的方法并应用于临床。方法以咖啡因-13C3-d3为内标,尿液样本经乙腈沉淀蛋白后,采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术测定咖啡因及3种代谢产物的浓度。以Waters ACQUITY UPLC?BEH HILIC为色谱柱,60 mmol/L乙酸铵溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5mL/min,柱温为38℃,进样量为2μL。采用电喷雾离子源,以多反应监测模式进行正离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 195.1→110.0(咖啡因)、m/z 181.1→124.0(茶碱)、m/z 181.1→124.0(副黄嘌呤)、m/z 181.1→138.0(可可碱)、m/z 198.1→140.1(内标)。采用上述方法测定19例早产儿呼吸暂停(AOP)患儿尿液中咖啡因及3种代谢产物的浓度。结果咖啡因、茶碱、副黄嘌呤、可可碱检测质量浓度的线性范围分别为0.200~200、0.050~50.0、0.050~50.0、0.100~100μg/mL(r均大于0.990),定量下限分别为0.200、0.050、0.050、0.100μg/mL;日内、日间精密度的RSD均不高于10.37%,基质因子为85.68%~109.90%,提取回收率为93.53%~109.40%(RSD均小于15%),稳定性试验的RSD均小于15%。19例AOP患儿尿液中咖啡因及3种代谢产物的质量浓度分别为(27.346±7.951)、(0.351±0.223)、(0.428±0.395)、(0.472±0.374)μg/mL。结论所建HPLC-MS/MS法操作简单、灵敏度高,可用于AOP患儿尿液中咖啡因及3种代谢产物浓度的测定。

向天果中柠檬苦素类化合物对氧化损伤下INS-1细胞保护作用研究

为了探究向天果中swietenine(Stn)及swietenolide(Std)对氧化损伤下INS-1细胞保护作用。使用不同浓度的过氧化氢作用于INS-1细胞4 h,CCK-8法筛选出合适的造模条件;将向天果正丁醇层活性成分Stn、Std和阳性药格列齐特(Gli)作用于INS-1细胞24 h,CCK-8法筛选出化合物的安全作用浓度;在过氧化氢损伤模型下,将化合物作用于INS-1细胞24 h后,分别检测细胞活力并计算细胞存活率和ROS水平变化;使用胰岛素ELISA试剂盒检测葡萄糖浓度分别为3.3 mM和16.7 mM刺激下的胰岛素分泌量,模拟BIS和GSIS下胰岛素分泌量。化合物Stn、Std可以提高氧化损伤下INS-1细胞的存活率,促进胰岛素分泌,降低ROS水平,促进细胞增殖,改善细胞凋亡状况。化合物Stn、Std可保护氧化损伤下INS-1细胞。

基于纳米技术的液体活检对CTCs捕获与检测的进展与突破

肿瘤细胞在外周血中的循环大多被认为是癌症进展或全身侵袭的先决条件,它与恶性肿瘤的关键标志—转移相关。循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)是癌症转移的标志,其占所有癌症相关死亡的比重极高,因此它们的检测和表征对癌症生物学和临床实践具有重要意义。本综述讨论了纳米技术用于循环肿瘤细胞捕获与检测的进展和突破。基于纳米技术的液体活检能够对分子或细胞生物标志物进行无创和动态分析,因此对疾病诊断、预后、进展、治疗效果监测、疾病机制的理解以及药物开发具有重要的意义。

莓叶委陵菜化学成分含量分析

本研究对民间传统中药莓叶委陵菜提取物的主要化学成分进行了系统分析,建立了莓叶委陵菜中三种主要化学成分(E)-caffeoylisocitric acid、(+)-儿茶素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸的HPLC含量测定方法。研究结果显示莓叶委陵菜中3种主要成分均呈良好的线性关系(r≥0.999),平均加样回收率(n=6)为103.15%~103.90%(RSD<3%,n=6)。用该法测得莓叶委陵菜中的(E)-caffeoylisocitric acid(1)、(+)-儿茶素(2)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(3)含量分别为1.67 mg/g、0.20 mg/g以及0.95 mg/g。该含量测定方法操作简便,重复性好,结果准确可靠,可用于莓叶委陵菜中药材及其相关制剂的质量控制与评价。

基于胆汁酸稳态调控的维生素D对结直肠癌的抑制作用及机制研究

目的考察维生素D(vitamin D,VD)是否可以通过调控胆汁酸内稳态,进而抑制AOM+DSS诱导的小鼠结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的发生发展,并探讨其可能机制。方法将小鼠随机分为Control组、CRC组、CRC+VD组,采用AOM+DSS诱导建立CRC小鼠模型。HE染色检测组织病理情况;LC-MS/MS检测血清和结肠中各类型的胆汁酸含量;qPCR检测FXR、CYP7A1 mRNA的表达。结果CRC组小鼠结肠组织呈浸润性生长、病理性核分裂像可见;与CRC组相比,CRC+VD组小鼠结直肠长度增加,HE染色显示结肠各层结构相对清晰。CRC组小鼠血清中11种胆汁酸含量降低,而结肠组织中疏水性胆汁酸含量明显升高;而CRC+VD组T-LCA,LCA,T-CA,T-DCA,T-HDCA水平升高,结肠部位疏水性胆汁酸水平趋于正常。CRC组FXR、CYP7A1mRNA表达明显升高,而CRC+VD组CYP7A1 mR-NA表达较CRC组降低。结论CRC小鼠体内胆汁酸内稳态失衡,维生素D可调控CRC状态下循环及结肠部位胆汁酸稳态水平,调节疏水性胆汁酸比例,进而影响CRC的发生发展。

白蛋白修饰的仿脂蛋白载体的肿瘤靶向性研究

目的构建肿瘤靶向性好、生物安全性高的重组高密度脂蛋白载体。方法参照盘状高密度脂蛋白的结构,以相同的脂质成分和比例采用薄膜分散法制备脂核,选择白蛋白代替载脂蛋白AI孵育包裹于脂核周围形成脂蛋白载体;并对其微观形态、粒径、Zeta电位、紫杉醇于载体中的包封率和释药特性、肿瘤细胞摄取、小动物活体成像和生物安全性进行考察。结果重组脂蛋白载体粒径为(228.3±3.5)nm,Zeta电位为(-27.3±1.9)m V,包封率为(85.6±0.6)%,呈现明显的药物缓释特征;Hep G2细胞对重组脂蛋白的摄取量明显高于药物溶液组及LO2细胞;孵育白蛋白的载体在小鼠肿瘤部位可长时间、特异性蓄积,具有良好的肿瘤组织靶向性;细胞毒性和溶血性实验显示,重组脂蛋白载体具有良好的生物安全性。结论采用本实验方法制备的紫杉醇重组脂蛋白载体具有良好的肿瘤靶向特性和生物安全性,有望成为紫杉醇的新型靶向输送制剂。

中药翻白草化学成分的研究

为了研究中药翻白草Potentilla discolor Bge.的主要化学成分。采用正相硅胶、反相硅胶、Toyopearl HW-40C、Sephadex LH-20和MCI柱色谱,高效液相制备色谱对翻白草提取物进行分离纯化,对于分离得到的化合物,根据其理化性质、1H NMR、13C NMR和其它光谱数据进行结构解析。从翻白草中分离鉴定了9个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(1)、槲皮素(2)、邻苯二甲酸二异丁基酯(3)、异鼠李素(4)、委陵菜酸(5)、没食子酸(6)、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷(7)、硬脂酸(8)和山柰酚(9)。化合物3和8为首次从该属植物中分离出的化合物。

生物药剂学与药物动力学实验教学改革探索

加强实践教学和突出能力培养是科研创新型人才教育的重点,而实验教学是医学院校培养药学生动手操作技能的关键教学步骤。生物药剂学与药物动力学是药学相关本科教学的重要专业课之一。根据该课程的特征和徐州医科大学药学学科的自身特点,对该课程的实验教学从教学内容、教学模式和教学体系三个方面进行分析与研究,并进行一系列相应的实验教学改革探索与实践,以探索该课程的实验教学在药学科研创新型人才培养过程中的具体实施方案,为更好地培养科研创新型药学人才提供一定的理论指导和教学方法。

中药翻白草黄酮类化学成分及其降糖活性研究

以翻白草为材料,探究黄酮类化学成分及其降糖活性降糖活性。采用系统溶剂法、柱色谱分离法对翻白草的化学成分进行分离,并鉴定化合物结构。基于HepG2细胞,筛选出具有降糖活性的化合物;采用胰岛素抵抗模型,筛选具有改善胰岛素抵抗的化合物。从翻白草乙醇提取物中分离得到13个化合物,分别鉴定为芹菜素(1)、木犀草素(2)、山柰酚(3)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(5)、山柰酚-3-O-β-D-半乳糖苷(6)、山柰酚-3-O-ɑ-L-阿拉伯糖苷(7)、槲皮苷(8)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(11)、异鼠李素(12)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(13)。正常HepG2细胞实验中,化合物3、4、11、12、13组葡萄糖含量显著下降(P<0.05);胰岛素耐受细胞实验中,化合物3、9、11、13组葡萄糖含量显著下降(P<0.05),化合物3、13组的PPARγ蛋白表达显著上升(P<0.05)。化合物3、4、11、12、13能够促进正常的HepG2细胞葡萄糖消耗,化合物3、9、11、13能够改善胰岛素抵抗的HepG2细胞葡萄糖消耗。

坎地沙坦酯脂质体冻干粉的制备及在大鼠体内药动学研究

目的制备并评价泊洛沙姆407修饰的坎地沙坦酯脂质体(CC/PLip),考察其口服给药后在大鼠体内药动学过程。方法用薄膜分散法制备坎地沙坦酯脂质体,经冷冻干燥制成冻干粉。动态光散射(DLS)测定其Zeta电位和粒径,透射电镜(TEM)观察其形态,超滤离心法测定包封率;采用口服给药,观察肠道黏膜渗透行为,分析药物在大鼠体内的药代动力学参数。结果泊洛沙姆407修饰的坎地沙坦酯脂质体呈现球形,粒径为(182.67±4.10)nm,Zeta电位为(-8.98±0.19)m V,包封率为98.94%±0.60%;体外释放试验结果表明其具有明显的缓释效果;肠道黏膜渗透试验表明坎地沙坦酯脂质体在小肠易被吸收;药动学实验中,参比坎地沙坦酯片和坎地沙坦酯脂质体的AUC_(0→48 h)分别为(13 112.6±5 343.7)、(19 522.8±3 973.7)ng·h·mL^(-1);C_(max)分别为(656.8±345.0)、(1 199.1±330.7)ng·mL^(-1);T_(max)分别为(7.3±3.0)、(2.7±1.4)h。结论坎地沙坦酯脂质体包封率较高,粒径较小,具有缓释效果,能提高在小肠的吸收,可显著提高在大鼠体内的生物利用度。

中药配伍辅酶Q10凝胶剂的制备工艺优化研究

制备中药配伍辅酶Q10的凝胶剂并对工艺进行优化探究。以多种中药进行大组方配伍,选择最优配比,采用水煮法和乙醇浸泡提取法制备大组方中药提取物浸膏,运用中药提取物与辅酶Q10结合,以卡波姆凝胶为载体,制成外用中药凝胶剂。空白卡波姆凝胶的最优比例为3%,中药配伍辅酶Q10的凝胶剂中的中药提取物浸膏占比3%,辅酶Q10占比1%,按照配伍进行制备,最后得到产品。结论:本实验制得的中药配伍辅酶Q10的凝胶剂对痤疮疗效较好,质量稳定。

七指蕨的化学成分研究

采用多种柱色谱结合重结晶对七指蕨乙醇提取物进行分离纯化,获得7个化合物,利用核磁共振波谱分析鉴定其结构为β-D-呋喃果糖基(2→5)-吡喃果糖苷(1),甲基-α-D-呋喃果糖苷(2),5-羟基-2-羟甲基吡啶(3),对甲氧基苯甲酸(4),甲氧基苯甲酸(5),3,4-二羟基苯乙醇(6),3-羟基丙酸(7)。所有化合物均为首次从七指蕨科植物中获得。

正交设计法优选美白复方中药提取工艺及体外抗氧化活性研究

目的:采用正交设计法优选美白复方中药的提取工艺并进行体外抗氧化活性考察。方法:筛选具有美白活性的5种中药甘草、桑白皮、怀山药、白芍和芦荟,以乙醇为溶剂,在单因素试验基础上,采用正交设计法优化提取工艺,以酪氨酸酶抑制率和DPPH自由基清除率为综合指标评价复方中药提取物的美白功效。结果:该中药复方具有一定的酪氨酸酶抑制活性和DPPH自由基清除作用,正交设计确定的最优提取工艺为乙醇体积分数80%,料液比1∶7,提取时间2 h、提取次数1次,采取此提取工艺。结论:该中药复方具有一定的美白功效,可为中药资源在美白化妆品中的开发利用提供参考。

LC-MS代谢组学研究高糖对NRK-52E细胞的损伤机制

目的 通过液相色谱-质谱联用（LC-MS）代谢组学技术分析高糖干预后细胞内代谢物改变，来评价高糖对大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）的潜在损伤机制。方法 NRK-52E细胞经常规培养方法培养12 h后，随机分为低糖组（LG组，5.56 mmol/L，n=6）和高糖组（HG组，25 mmol/L，n=6），继续培养48 h，采用LC-MS检测细胞内所含代谢物，利用Mass Profile Professional（MPP）软件进行主成分分析（Principal component analysis, PCA）和偏最小二乘判别分析（Partial least squares t0 latent structure-discriminant analysis, PLS-DA）寻找差异代谢物。结果 高糖显著损伤细胞形态。细胞代谢物中共鉴定出亮氨酸、神经酰胺（d18：0/12：0, d20：0/16：0, d18：0/16：0, t18：0/16：0, d18：0/14：0）、磷脂酰丝氨酸（16：0/16：0, 14：0/12：0, 20：0/0：0）、次黄嘌呤、磷脂酰肌醇（17：2/20：2）、溶血磷脂酰乙醇胺（0：0/20：5, 0：0/20：2）、磷脂酰乙醇胺（16：0/0：0）等15种差异性代谢物。结论 高糖对NRK-52E细胞的损伤与细胞内氨基酸、嘌呤、磷脂等代谢密切相关。

沸石咪唑酯骨架材料/石墨相氮化碳量子点/乙酰胆碱酯酶复合物定量检测小鼠脑组织中的乙酰胆碱

以二水合乙酸锌、2-甲基咪唑、石墨相氮化碳量子点(g-CNQDs,7mg)和乙酰胆碱酯酶(AchE)为起始原料,采用一锅法制备了沸石咪唑酯骨架材料(ZIFs)包载g-CNQDs和AchE的酸度敏感型复合物ZIFs@g-CNQDs@AchE,并和患阿尔茨海默病(AD)小鼠的脑组织样品在pH 7.4磷酸盐缓冲溶液中室温反应2.5h,在380nm激发波长下测量体系在475nm处的荧光强度,用于测定乙酰胆碱(Ach)的含量。结果显示,合成的复合物呈十二面体结构,平均粒径约300nm,加入Ach后,Ach渗透进入复合物,被AchE催化生成乙酸,体系酸度增加,复合物结构瓦解,g-CNQDs释放,475nm处出现明显的荧光发射峰。Ach的浓度在5.5~82.5mmol·L^(-1)内和对应的体系荧光强度呈线性关系,检出限(3S/N)为1.83mmol·L^(-1);常见的干扰物质(葡萄糖、多巴胺)以及干扰离子(Fe^(2+)、Fe3+、Cu^(2+)、Mg^(2+)、Zn^(2+))对Ach的检测无干扰,复合物的特异性较高;按照标准加入法对阳性实际样品进行回收试验,成功检出了Ach,回收率为93.2%~112%,测定值的相对标准偏差(n=5)为0.82%~3.4%。构建的酸度敏感型复合物可作为一种潜在的载体,用于AD诊疗。

基于雌激素代谢调控的白藜芦醇对MNNG诱导子宫内膜癌变的抑制作用

目的 考察白藜芦醇(Res)是否可能通过调控雌激素内稳态,进而抑制MNNG诱导小鼠子宫内膜的癌变。方法采用MNNG诱导EC小鼠模型,将小鼠随机分为Control组、Res组、MNNG组、MNNG+Res组。HE染色观察组织病理情况;qPCR检测Ccnd1、CK-19、Erbb2 mRNA的表达;LC-MS/MS检测小鼠血清和子宫中E1、E2、2-MeOE1、4-MeOE1、2-MeOE2、4-MeOE2、16α-OHE1、2-OHE1、4-OHE1、2-OHE2和4-OHE2的含量。结果 MNNG组小鼠子宫内膜腺体增多、拥挤,局灶形成筛孔;MNNG+Res组小鼠子宫内膜腺体减少,趋于正常。与Control组相比,MNNG组Ccnd1、Erbb2 mRNA表达明显升高,MNNG+Res组明显降低。MNNG组小鼠的血清和子宫组织中,2-MeOE2、2-MeOE1和4-MeOE1含量明显下降,4-OHE2含量明显增加,给予Res治疗后,血清中4-MeOE1含量明显升高,子宫组织中2-MeOE2和2-MeOE1含量明显升高,4-OHE2在血清和子宫组织中含量均明显降低。结论 EC小鼠体内雌激素内稳态失衡,Res可以上调雌激素代谢产物2-MeOE2的含量,降低4-OHE2的含量,抑制EC的发生发展。

PI3K抑制剂对2型糖尿病小鼠脑组织中乙酰胆碱酯酶表达的影响

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂对2型糖尿病小鼠脑组织中乙酰胆碱酯酶(Ach E)表达的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法将16只自发性2型糖尿病模型动物db/db小鼠随机分为抑制组和模型组各8只,分别腹腔注射溶于5%DMSO中的PI3K抑制剂LY294002 3 mg/kg和相同体积的5%DMSO溶液;将6只同周龄非糖尿病动物db/m小鼠作为正常对照组,腹腔注射相同体积的生理盐水。各组小鼠连续给药7 d,取血和肾脏组织;比色法检测血糖,HPLC法检测血清丙二醛(MDA),酶底物法测定大脑皮质Ach E,Western blotting法检测大脑皮质中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)及其下游蛋白70 k D核糖体S6蛋白激酶(p70S6K)磷酸化水平。结果与正常对照组比较,模型组血糖和血清MDA水平均增高(P均<0. 01);与模型组比较,抑制组血清MDA水平降低(P <0. 05),而血糖水平无明显变化。模型组大脑皮质中Ach E表达量为0. 957±0. 089,高于正常对照组的0. 508±0. 222(P <0. 05);模型组大脑皮质中Ach E表达量(0. 506±0. 161)低于模型组(P <0. 05),而与正常对照组差异无统计学意义。与正常对照组比较,模型组大脑皮质中m TOR和p70S6K磷酸化水平均增加(P均<0. 05);与模型组比较,抑制组大脑皮质中m TOR和p70S6K磷酸化水平降低(P <0. 05或<0. 01)。结论 PI3K抑制剂LY294002可降低2型糖尿病小鼠脑组织中Ach E表达水平,该作用可能与其降低氧化应激水平从而抑制mTOR相关通路的活性有关。

万古霉素血药浓度对糖尿病患者抗感染疗效和不良反应的影响

目的探讨万古霉素血药浓度对糖尿病患者抗感染疗效与发生不良反应的关系。方法收集徐州医科大学附属医院2020年6月~2020年12月糖尿病患者中使用万古霉素抗感染的病例资料,并统计稳态万古霉素的血药浓度及其不良反应,以及临床药师对不良反应的干预情况,最终统计患者不良反应的转归情况并分析万古霉素引起糖尿病患者出现不良反应的原因。结果57例糖尿病患者应用万古霉素抗感染的平均血药浓度(谷浓度)(15.40±5.39)μg/ml,其中,血药浓度低于10μg/ml为未达标组,共12例(21.05%),平均血药浓度(8.45±1.04)μg/ml;血药浓度10~20μg/ml为达标组,共31例(54.39%),平均血药浓度为(14.86±2.96)μg/ml;血药浓度高于20μg/ml为超标组,共14例(24.56%),平均血药浓度(22.55±1.96)μg/ml。出现不良反应的病例均在超标组,其中出现严重过敏反应6例(10.53%),皮肤损害3例(5.26%),肾功能损害2例(3.51%),神经系统损害2例(3.51%)。结论糖尿病患者使用万古霉素相对于非糖尿病患者更容易发生不良反应。糖尿病患者使用万古霉素发生不良反应主要原因是血药浓度超标。最常见的不良反应是过敏反应,患者合并使用升压药物会伴随严重的肾脏损伤,应加强对患者的肾功能检测。临床药师应当结合检验科肾脏学相关指标进行临床合理用药的指导。

基于新型比色探针的分光光度法测定β-淀粉蛋白寡聚体的含量

基于制备的包载葡萄糖信号分子的聚乙烯亚胺(PEI)功能化介孔二氧化硅纳米粒子(PEI-MSN)以及mAPOE多肽标记的金纳米粒子(mAPOE-AuNPs),通过将竞争置换反应与比色分析技术联合,构建了一种能够对β-淀粉蛋白寡聚体(Aβo)高效检出的新型简单比色探针(PEI-MSN/mAPOE-AuNPs)。将负电荷的mAPOE-AuNPs静电吸附在正电荷PEI-MSN表面,然后将葡萄糖包载进入介孔二氧化硅纳米粒子(MSN)孔隙并封堵。当Aβo存在此体系时,由于Aβo与mAPOE多肽之间的特异性作用力大于mAPOE-AuNPs与PEI-MSN之间的静电作用,导致mAPOE-AuNPs与PEI-MSN分离,PEI-MSN内包载的葡萄糖分子从MSN的孔隙中释放出来,然后利用二硫化钼纳米片(MoS2NSs)的过氧化物酶活性,对释放出来的葡萄糖进行比色分析,从而间接实现对Aβo的光学检测。Aβo标准曲线的线性范围为1.0~20 nmol·L^(-1),检出限为0.4 nmol·L^(-1)。按照标准加入法进行回收试验,回收率为98.0%~110%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.9%~2.7%。