Janus激酶信号转导及转录激活因子通路磷酸化水平在干细胞移植治疗大鼠局灶脑缺血/再灌注神经损伤中的作用

目的探讨Janus激酶信号转导及转录激活因子(JAK-STAT)信号通路在Neurogin2基因(Ngn2)诱导的神经潜能骨髓间充质干细胞(Ngn2-MSCs)移植治疗大鼠局灶性脑缺血/再灌注(MCAO)损伤中的作用。方法体外培养大鼠MSCs细胞, 并将Ngn2基因通过慢病毒转染MSCs细胞;20只SD大鼠按照随机数字表法分为两组, 制备大鼠MCAO模型, 分别设为Ngn2-MSCs移植组、Ngn2-MSCs+JAK-STAT通路抑制剂(AG490)移植组。干细胞移植后0、12、24、48、60、72、90 h进行神经缺陷症状评分单因素方差分析, 蛋白质印迹法(Western blot)检测STAT3及磷酸化STAT3蛋白表达水平, 并采用两均数成组设计资料t检验分析。原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测脑缺血再灌注区细胞凋亡水平并采用单因素方差分析。结果 Ngn2转染MSCs后, Ngn2-MSCs细胞表现出向神经细胞分化的潜能, Western blot检测提示干细胞移植后脑组织JAK-STAT3信号通路12 h开始STAT3蛋白磷酸化激活, 48 h达到高峰, 90 h后逐渐下降, 均高于0 h(12 h:t=4.780, 48 h:t=6.991, 90 h:t=4.578, P均<0.05)。实验组细胞凋亡数量48 h[(20.5±2.1)个/高倍镜视野]及其他时间点均低于对照组(组间F=13.372, P<0.05), 神经缺陷评分(2.51±0.16 48 h及之后时间点)均低于对照组(组间F=6.990, P<0.05)。结论干细胞移植治疗大鼠脑缺损损伤中, JAK-STAT3通路磷酸化激活与神经损伤相关, 抑制JAK-STAT3通路磷酸化水平可以降低细胞移植区细胞凋亡水平, 提高干细胞移植存活率, 从而起到神经保护作用。

大黄素联合泼尼松对阿霉素肾病大鼠肾组织转化生长因子-β1表达的研究

目的观察大黄素联合泼尼松干预下阿霉素诱导的肾病综合征大鼠尿蛋白定量变化、肾组织病理改变及肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的改变,探讨大黄素联合泼尼松对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用及其机制。方法SD雄性大鼠随机分成4组:对照组(CTR组)、阿霉素肾病组(ADR组)、激素治疗组[GC组、泼尼松12 mg/(kg·d)]、大黄素联合泼尼松治疗组[EMD组、大黄素100 mg/(kg·d)+泼尼松12 mg/(kg·d)]。采用一次性尾静脉注射阿霉素(6 mg/kg)建立阿霉素肾病大鼠模型。观察大鼠造模前1 d,造模后第7、14、21、28天时24 h尿蛋白定量变化。造模后28 d处死大鼠,测血生化指标,取肾组织观察肾脏病理改变,免疫组织化学染色检测肾组织中TGF-β1的表达水平。方差齐时组间比较采用One-way ANOVA检验,组间两两比较采用SNK法。方差不齐时采用Welch法和Brown-forsythe法。结果造模前1 d,4组大鼠之间24 h尿蛋白定量无明显差异(F=0.016,P>0.05);14 d时24 h尿蛋白定量:ADR组[(87.82±20.83)mg]、GC组[(88.05±22.41)mg]和EMD组[(84.67±31.35)mg]均高于CTR组[(9.34±2.92)mg],差异有统计学意义(F=31.200,P<0.05);造模后28 d时24 h尿蛋白定量:ADR组[(281.38±36.14)mg]、GC组[(182.39±45.85)mg]和EMD组[(141.26±35.72)mg]均高于14 d时,但GC组和EMD组均低于ADR组(F=108.699,P<0.05),EMD组又低于GC组(F=98.312,P<0.05)。造模后28 d血清白蛋白:GC组[(21.02±2.08)g/L]和EMD组[(20.46±2.24)g/L]均高于ADR组[(15.22±2.91)g/L,F=17.907,P<0.05];血总胆固醇:GC组[(3.57±0.31)mmol/L]和EMD组[(3.72±0.16)mmol/L]均低于ADR组[(5.07±0.19)mmol/L,F=4.124,P<0.05];EMD组与GC组血清白蛋白、血总胆固醇差异无统计学意义(F=159.166,P>0.05);4组间血尿素氮、血肌酐差异无统计学意义(F=0.188,P>0.05)。大鼠肾脏病理改变:4组大鼠光镜下肾小球基本正常;ADR组可见肾组织系膜细胞增多,系膜基质扩张,部分球囊粘连;肾小管上皮细胞肿胀,可见空泡变性,管腔闭塞,管腔内可见蛋白管型,间质有炎性细胞浸润;GC、EMD组大鼠系膜基质扩张,球囊粘连等肾组织病变较ADR组明显减轻。免疫组织化学结果:大鼠肾组织TGF-β1的表达GC组(54.69±5.54)、EMD组(48.55±6.10)和ADR组(80.38±8.04)均较CTR组(23.23±7.03)增强,而GC、EMD组均低于ADR组,差异有统计学意义(F=121.066,P<0.05);EMD组又低于GC组,差异有统计学意义(F=121.066,P<0.05)。结论大黄素和泼尼松联合应用能显著减少ADR诱导肾病大鼠尿蛋白的排泄量,肾功能及肾脏病理损伤程度亦较单用泼尼松明显改善。大黄素联合泼尼松对ADR诱导肾病大鼠肾脏保护作用的机制可能与下调肾组织中TGF-β1的表达有关。