鼠神经生长因子联合脑源性神经营养因子诱导人脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化

背景:作者在前期研究中发现鼠神经生长因子具备诱导脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化的能力,为进一步探讨提高诱导效率的方法,拟尝试使用多种细胞生长因子进行联合诱导。目的:探讨鼠神经生长因子联合脑源性神经营养因子在体外条件下对人脐血间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化的作用。方法:复苏获赠的原代人脐血间充质干细胞并进行体外扩增培养,取第5代脐血间充质干细胞分为5组,其中前4组为预诱导组,在加入成纤维生长因子和表皮生长因子预诱导24 h后,再用鼠神经生长因子、脑源性神经营养因子及二者联合对脐血间充质干细胞进行诱导,对照组仅使用等量细胞培养基培养;最后一组为非预诱导组,先用细胞培养基培养24 h后,再加入鼠神经生长因子和脑源性神经营养因子进行联合诱导。倒置显微镜下观察诱导后细胞形态变化,并用免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达,实时荧光定量PCR技术检测神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白在m RNA水平的相对表达量。结果与结论:(1)脐血间充质干细胞形态为大小不一的长梭形、纺锤形,经诱导后细胞胞体逐渐回缩变圆,并向一侧或多侧发出突起,呈现出神经元样细胞改变;(2)免疫细胞化学及实时荧光定量PCR结果显示各实验组细胞均阳性表达神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白,联合诱导组神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性率及二者m RNA表达量均高于单独诱导组、对照组以及非预诱导组;(3)鼠神经生长因子和脑源性神经营养因子均能诱导脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化,二者在诱导过程中具有协同作用,联合使用能够有效提高诱导效率。

鼠神经生长因子体外诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化

背景:脐血间充质干细胞是从胎儿脐血中分离出的一种成体干细胞,具有分化为类神经元的潜能,可用于多种神经系统疾病的治疗。如何有效诱导脐血间充质干细胞向类神经元分化一直是干细胞领域的研究热点,具有很高的科学研究价值。目的:探讨鼠神经生长因子在体外条件下对脐血间充质干细胞向类神经元诱导分化的作用。方法:复苏人脐血间充质干细胞,体外扩增培养并观察细胞形态特征,绘制细胞生长曲线。取第5代脐血间充质干细胞,分别加入质量浓度为50,100,150,200μg/L的鼠神经生长因子培养液作为诱导组,另设不加任何诱导剂的空白对照组,每日倒置显微镜下观察细胞形态变化并拍照记录,诱导7 d后采用免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,使用Image-Pro Plus 6.0软件计算NSE、GFAP阳性表达率。结果与结论:(1)脐血间充质干细胞复苏后活性达90%以上,形态为大小不一的长梭形、纺锤形,其生长曲线呈"S"型,第3-6天为细胞对数生长期;(2)经鼠神经生长因子诱导后细胞形态出现典型类神经元样改变,而对照组细胞形态无明显变化;(3)免疫细胞化学法显示鼠神经生长因子诱导后细胞NSE、GFAP均呈阳性表达,其中100μg/L鼠神经生长因子诱导组的NSE、GFAP阳性表达率最高,相比其他鼠神经生长因子诱导组差异有显著性意义(P<0.05),而对照组无NSE、GFAP阳性细胞;(4)结果表明,鼠神经生长因子在体外能够诱导脐血间充质干细胞分化为类神经元,100μg/L为较合适的诱导质量浓度。