外泌体递送角蛋白8小干扰RNA调控下咽癌细胞对5-FU敏感性研究

目的探究下咽癌患者血清源性外泌体中角蛋白8(KRT8)小干扰RNA(si-KRT8)对人咽鳞状细胞癌FaDu细胞株5-氟脲嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响和作用机制。方法收集下咽癌患者肿瘤组织以及治疗后耐药患者的血清、肿瘤组织以及癌旁组织。构建FaDu的5-FU耐药细胞株(FaDu/R)用于后续实验。超速梯度离心法分离患者血清中的外泌体并利用透射电镜及蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)技术进行鉴定,利用电转染技术将si-KRT8封装至外泌体(Exosome@si-KRT8)中,后续用于处理细胞。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及WB方法检测KRT8分别在不同组织、电转染后外泌体及不同处理条件下FaDu细胞中的表达水平。CCK-8、原位末端转移酶标记技术及迁移侵袭技术和WB检测Exosome@si-KRT8对FaDu/R细胞活力、凋亡及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。结果下咽癌耐药组织及FaDu/R细胞中的KRT8表达水平相较于癌旁组织和肿瘤组织以及正常FaDu细胞均升高(t=15.79,P<0.01)。分离的患者血清外泌体呈现双层膜结构,且CD63和TSG101蛋白均表达,电转染si-KRT8后,外泌体中KRT8表达量下降(t=6.70,P<0.01)。Exosome@si-KRT8能够抑制FaDu/R细胞中KRT8的蛋白表达水平(t=123.50,P<0.01)。与5-FU组及5-FU+Exosome组相比,Exosome@si-KRT8能够抑制FaDu/R细胞的活力(t=17.07,P<0.01),促进其凋亡水平,并且抑制FaDu/R细胞耐药相关蛋白的表达(t P-gp=103.20,t MDR1=238.60,P<0.01)。此外,Exosome@si-KRT8还能抑制FaDu/R细胞的迁移侵袭能力(t=42.30,t=122.00,P<0.01),并在促进E-cadherin的表达同时抑制N-cadherin的表达水平(t=130.80,t=83.90,P<0.01)。结论下咽癌患者血清来源的外泌体封装si-KRT8能够增强下咽癌细胞的化疗敏感性,且其作用机制可能与抑制细胞上皮间质转化有关。

miR-4497靶向TMEM88通过PI3K/AKT信号通路调控下咽癌FaDu细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨microRNA-4497(miR-4497)在下咽癌患者化疗前后血清外泌体中的表达及对人咽鳞状细胞癌FaDu细胞株(简称FaDu细胞)增殖和凋亡的作用机制。方法收集2021年6月~2022年12月于连云港市第一人民医院确诊的7例局部晚期下咽癌患者,给予TPF方案辅助化疗2个周期,分别抽取患者化疗前后的外周血,采用测序技术检测化疗前后两组血清外泌体miRNA,并对其中差异表达的miRNA进行生物信息学分析。通过转染技术下调miR-4497的表达,提取FaDu细胞外泌体。分别利用CCK-8、EdU、流式细胞术和Western blot实验检测FaDu细胞外泌体来源miR-4497对FaDu细胞的增殖和凋亡情况。数据库miRDB、miRWalk、miR2Target和TargetScan联合预测miR-4497潜在靶点,分析下调TMEM88的表达并同时抑制miR-4497的表达对FaDu细胞增殖和凋亡的影响。根据测序预测分析KEGG通路图,Western blot实验验证FaDu细胞内p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT的表达。结果与化疗前相比,化疗后下咽癌患者外周血血清外泌体中miR-4497的表达明显降低。FaDu细胞中miR-4497的表达明显高于人鼻咽上皮细胞系NP69及人鼻咽癌细胞系6-10B和HONE-1(F=109.3,P<0.01)。与转染miR-4497 inhibitor的FaDu细胞外泌体共培育抑制FaDu细胞增殖,促进细胞凋亡,Bax蛋白表达升高(t=84.69,P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(t=31.11,P<0.01)。数据库预测抑癌基因TMEM88可能是miR-4497的靶向。荧光素酶报告基因检测证实TMEM88与miR-4497存在结合位点。使用外泌体来源的miR-4497 inhibitor与TMEM88低表达的FaDu细胞共培育,观察到细胞增殖能力回升,p-PI3K和p-AKT表达降低(t=91.54,P<0.01;t=58.30,P<0.01)。结论FaDu细胞外泌体来源miR-4497可通过下游靶点TMEM88激活PI3K/AKT信号通路,调控FaDu细胞的增殖和凋亡。

新辅助化疗在中晚期下咽癌治疗中的应用进展

下咽癌属于头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的一种。中晚期下咽癌需采用以手术、放疗、化疗和免疫治疗为主的综合方案治疗。关于中晚期下咽癌患者喉功能的保留情况,国内外的治疗原则有一定差异。国内目前尚没有统一的下咽癌诊疗指南。近年来,越来越多的医学中心推荐以新辅助化疗治疗中晚期下咽癌。当前,国外已有医学中心将诱导化疗敏感后行放疗或同步放化疗作为晚期咽喉癌保留喉功能的首选治疗方法。本文通过文献复习对新辅助化疗在中晚期下咽癌治疗中的应用进展作一综述。

Logistic回归分析喉癌术后肺部感染的影响因素及防治措施

目的采用Logistic回归分析喉癌术后肺部感染的影响因素,为临床制定对应性防治措施提供有效信息。方法选取连云港市第一人民医院2017年7月—2021年3月211例喉癌患者作为研究对象,根据术后是否发生肺部感染分为研究组(40例)与对照组(171例)。收集两组临床资料,采用Logistic回归分析喉癌术后肺部感染的影响因素。结果单因素方差分析,年龄、临床分期、合并糖尿病、术前2周应用抗菌药物、术前白蛋白水平、使用呼吸机、手术时间、留置胃管、气管导管拔除时间是喉癌术后肺部感染的影响因素(P<0.05);Logistic回归分析,年龄≥60岁、术前2周应用抗菌药物、使用呼吸机、手术时间≥4 h、留置胃管、气管导管拔除时间≥12 d是喉癌术后肺部感染的独立危险因素,术前白蛋白水平≥25 g/L是喉癌术后肺部感染的独立保护因素(P<0.05);似然比卡方检验显示模型建立具有统计学意义;Wald卡方检验显示模型构建有效;Hosmer-Lemeshow拟合优度检验显示模型拟合效果较好;利用7个独立危险因素建立的Logistic回归模型,根据概率值,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,对211个样本进行内部验证,结果显示,该模型预测喉癌术后肺部感染的曲线下面积(AUC)为0.902,95%CI为0.850~0.953,敏感度为87.50%,特异度为83.63%。结论喉癌术后肺部感染的影响因素较多,根据高危因素构建Logistic回归模型能够及早预测术后肺部感染风险,为临床及时制定防治措施提供可靠依据。

下咽鳞状细胞癌组织claudin-1和MMP-9的表达及与临床病理特征及预后的关系研究

目的:研究下咽鳞状细胞癌组织紧密连接蛋白1(claudin-1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法:选取2015年1月-2017年3月我院收集的75例下咽鳞状细胞癌组织标本进行研究,同期选取60例癌旁正常黏膜组织标本作为对照。采用免疫组织化学法检测claudin-1、MMP-9在下咽鳞状细胞癌组织与癌旁正常黏膜组织中的表达差异,分析claudin-1、MMP-9阳性表达与临床病理特征关系;Spearman相关性分析癌组织claudin-1与MMP-9的相关性。对患者进行5年随访,分析claudin-1、MMP-9表达与预后的关系。结果:下咽鳞状细胞癌组织claudin-1、MMP-9阳性表达率高于癌旁正常黏膜组织(P<0.05)。claudin-1、MMP-9阳性表达与下咽鳞状细胞癌患者组织分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。经Spearman相关性分析显示,下咽鳞状细胞癌组织中claudin-1阳性表达与MMP-9阳性表达呈正相关(rs=0.463,P<0.05)。术后随访5年,2例失访,73例患者获得随访。Kaplan-Meier生存曲线显示,claudin-1阳性表达患者的5年生存率为35.71%,低于阴性表达患者的66.67%(P<0.05),MMP-9阳性表达患者的5年生存率为34.85%,低于阴性表达患者的57.14%(P<0.05)。结论:下咽鳞状细胞癌组织中claudin-1、MMP-9阳性表达升高,其表达与组织分化程度、淋巴结转移和预后不良有关,两者呈正相关,可能发挥协同作用促进肿瘤发生发展。