僵蚕溶茧酶抑制剂的纯化与抗肿瘤活性研究

目的分离纯化僵蚕溶茧酶抑制剂(Jiangcan cocoonase inhibitor,JCCI),研究其体内外对人肝癌SMCC-7721细胞增殖的抑制活性。方法依次应用以家蚕溶茧酶为配体的亲和色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱、Superdex 75快速蛋白液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC),从僵蚕粗蛋白提取物的85%硫酸铵沉淀物中分离纯化JCCI。以Edman降解法测其N端氨基酸序列。应用MTT法与荷瘤裸鼠模型,检测其体内外抑制SMCC-7721细胞增殖与生长活性。结果JCCI相对分子质量为13973.63,其N端前10个氨基酸序列为VRNKRQSNDD。抑制剂动力学分析结果表明,JCCI是溶茧酶的非竞争性抑制剂,米氏常数(Km)平均值为76.50,二者物质的量之比为1∶1。JCCI可显著抑制SMCC-7721肝癌细胞体外增殖与体内荷瘤裸鼠的肿瘤生长,体外给药36 h的半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC_(50))为260.52μg/mL,JCCI抑制率与剂量线性相关。结论JCCI是一种首次从僵蚕中分离纯化的具有抗肿瘤活性的丝氨酸蛋白酶抑制剂。