ELISpot:一种新的检测人类HLA-Ⅰ抗体的方法

目的 :建立一种新的检测人类HLA Ⅰ类抗体方法———酶联免疫斑点法 (ELISpot)。方法 :以鼠B细胞系HB95为模型 ,建立一系列特异性ELISpot检测HLA Ⅰ类抗体的参数 ,包括HLA抗原的来源、包被抗体最适宜浓度的选择、B细胞最适宜孵化时间 ,同时以经EBV转化的敏感NTP患者B细胞系为干扰因素 ,检验该方法的敏感性和特异性。结果 :以B细胞溶胞体作为HLA抗原来源 ,当抗原浓度为 0 2 5mg/ml时 ,相同细胞密度下所获得的斑点频数均高于其它三种抗原浓度 (0 12 5、0 5和 1 0mg/ml,P <0 0 5 ) ;当包被抗体浓度为 1 8mg/ml、稀释度为 1∶12 5时 ,相同孵育时间下所获得的斑点频数高于其它稀释浓度 (1∶2 5 0、1∶5 0 0和 1∶10 0 0 ,P <0 0 5 ) ;且在抗体稀释度相同情况下 ,B细胞孵育时间为 2 4小时所获得的斑点最清晰、背景着色最浅、最容易被分析仪器识别。此外 ,当同时加入经EBV转化的人B细胞时 ,所获得的斑点频数与单纯加鼠B细胞相似 ,无明显差异 (P >0 0 5 )。结论 :当B细胞溶胞体作为HLA抗原且浓度为 0 2 5mg/ml、包被抗体浓度为 1 8mg/ml且稀释度为 1∶12 5、B细胞孵育时间为 2 4小时时 ,该ELISpot方法能特异地、敏感地、可信地检测人HLA Ⅰ类抗体。