β1整合素及细胞骨架结构对Gi蛋白心肌细胞内构型的影响

采用免疫荧光双标记、免疫电镜等方法观察胚胎干细胞系及小鼠胚胎心肌细胞中多种G蛋白细胞内构型特点及其与细胞骨架锚蛋白之间的相关性。结果发现Gi在野生型胚胎干细胞和小鼠胚胎心肌细胞内呈网状分布 ,且与细胞骨架蛋白分布一致。而在 β1整合素基因敲除胚胎干细胞中Gi则呈近似于弥漫样分布 ,与细胞骨架蛋白的分布无相关性。在G2 0 1N细胞 ,Gi又恢复其特有的网样分布。细胞骨架解聚剂可模拟 β1整合素基因敲除所造成的Gi构型改变。提示

β_1整合素基因缺失对G_i蛋白分布的影响

目的 了解跨膜蛋白 β1整合素对信号分子G蛋白细胞内构型的影响 ,为进一步研究 β1整合素在信号传导中的作用打下基础 .方法 采用荧光双标记及重叠合显微镜分析技术 ,观察野生型胚胎干细胞系 (D3细胞 ) ,β1整合素基因敲除胚胎干细胞 (G2 0 1细胞 ) ,β1整合素基因敲除后再植入胚胎干细胞 (G2 0 1N)及小鼠胚胎心肌细胞中多种G蛋白 (Gαs,Gαi1-3 ,Gαo,Gαi/o/t/z)细胞内构型特点和差异 .结果 Gαs,Gαo,Gαi/o/t/z在上述几种细胞系中均呈弥漫性分布 ,未能发现明显差异 ,与此不同的是Gαi1-3 在D3细胞源性心肌细胞内呈网状分布 ,在非心肌细胞内呈线条状分布 ,而在G2 0 1细胞中Gi 上述特异性构型被打乱 ,呈近似于弥漫样分布 ,值得注意的是在β1整合素基因重新恢复的G2 0 1N细胞Gi构型又呈网样或线条样分布 ,与野生型胚胎干细胞中Gi 的构型相一致 .结论 β1整合素能够影响信号分子Gi蛋白的细胞内定位 ,推测β1整合素可通过改变Gi 的分布而影响Gi