牛支原体贵州分离株P33基因的克隆及遗传进化分析

为了解牛支原体贵州分离株的遗传进化情况,对其P33基因进行PCR扩增,扩增产物克隆至pMD19-T载体,筛选阳性克隆质粒进行基因序列和同源性分析,构建遗传进化树。结果:牛支原体贵州株P33基因PCR产物长度约690 bp(命名为GZ-Mb),与湖北株HB0801、Hubei-1同源性为99.6%,且在同一进化分支。结论:牛支原体贵州株P33基因与湖北株同源性最高,亲缘关系最近。

牛支原体的分离培养与分子生物学鉴定

为查明贵州省平坝区某养殖场牛发病死亡的原因,采集病死牛的肺脏组织进行病原分离培养、实时荧光定量PCR鉴定、普通PCR扩增及基因测序分析。结果:在改良Frey氏固体培养基表面生长出“煎蛋”样菌落;实时荧光定量PCR检测结果为支原体感染阳性;普通PCR扩增及基因测序,分离菌株与各牛支原体参考株的同源性均高达95.6%,且处于同一进化分支。结论:综合诊断发病牛为牛支原体感染。