舞水河怀化城区段水质现状研究

对舞水河怀化城区段水质分丰水期、平水期、枯水期3个时期进行了实地调查与监测,并利用单项和综合评价法对水质进行了评价,得出舞水河怀化城区段水质符合国家Ⅲ类水质标准,但其支流太平溪水体污染严重,对舞水河水质有一定的影响。因此,进一步加强对舞水河尤其是其支流太平溪的治理,对怀化市建设生态宜居城市意义重大。

四棱豆新品种湘棱豆3号的选育

湘棱豆3号是采用NaN3与EMS复合诱变剂处理中翼1号种子,经过连续6代选育而成的四棱豆新品种。该品种生长势强,侧枝多,结荚能力强;中早熟,果荚绿色、扁平形,嫩荚不易纤维化,肉质脆嫩,品质好;豆荚长为20.8 cm,宽3.3 cm,厚1.6 cm;适宜春末夏初播种,田间对立枯病、根腐病和病毒病的抗性与中翼1号相当,一般嫩荚产量约为990 kg.(667 m2)-1。适宜湖南及其周边区域种植。

四棱豆新品种湘棱豆2号的选育

以四棱豆中翼1号为母本,K0000026为父本进行杂交,分离世代通过连续6代的系统选育,育成适宜春末夏初栽种的耐热四棱豆新品种湘棱豆2号。该品种侧枝多,主蔓及侧枝均可结荚,连续坐果能力强,耐热,豆荚四棱柱形,棱上有宽3～5mm具皱波状齿的翅,荚色深绿、有光泽,品质好,豆荚长20cm左右,宽3cm,单荚质量35～45g,产量高,鲜荚平均每667m2产量达547.5kg。

鱼腥草转录组SSR位点信息分析及其多态性研究

目的分析鱼腥草Houttuynia cordata转录组中的SSR位点信息,并设计简单重复序列(SSR)引物,以期为鱼腥草分子标记辅助育种提供有力工具。方法利用MISA工具筛选了鱼腥草转录组测序获得的63 954条unigenes,对其SSR位点信息进行了分析;在此基础上利用Primer 3设计SSR引物,并随机选择50对SSR引物对16株不同来源的鱼腥草进行多态性扩增分析。结果在鱼腥草的转录组中,共搜索到4 800个SSRs,分布于4 413条unigenes,SSR位点出现频率为7.51%。SSRs位点中三核苷酸重复是主要类型,占总SSRs的41.54%;其次是单核苷酸重复基序(占27.35%)。SSRs所包含的重复基元中,单核苷酸重复基元A/T是优势重复基元类型,占总SSRs的27.0%。利用Primer3共设计出3 068对SSR引物。随机选择50对引物进行PCR扩增,其中43对(86.0%)扩增出清晰、可重复的条带,且表现出多态性。利用UPGMA作图,将16个样品分为2类。结论鱼腥草转录组中SSR位点出现频率高,类型丰富;大量的SSR为其遗传多样性分析和遗传图谱构建奠定基础。

金樱子多糖的体外免疫活性研究

目的探讨金樱子多糖(RLP)的体外免疫调节活性。方法将不同浓度的RLP溶液分别加入到脾淋巴细胞或腹腔巨噬细胞体外培养体系中,考察RLP对细胞增殖、免疫因子的影响。结果 RLP能明显促进脾淋巴细胞的体外增殖和IL-2、NO的产生,提高NOS与蛋白激酶G的表达;同时促进腹腔巨噬细胞TNF-α的生成。结论 RLP具有良好的体外免疫增强作用。

鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶1基因克隆与表达分析

目的克隆鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶1(DXS1)基因并分析其表达差异。方法根据已经获得的鱼腥草DXS1转录本序列设计1对引物,采用RT-PCR方法获得DXS1基因cDNA序列并对DXS1蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析,并预测了该蛋白功能;利用实时荧光定量PCR方法检测了DXS1基因在鱼腥草的地下茎、地上茎、叶、花中的表达情况。结果克隆获得的DXS1基因长为2 172 bp,编码723个氨基酸。生物信息学预测DXS1蛋白不含跨膜区,不含信号肽,具有定位肽。DXS1基因在鱼腥草的花中表达丰度最高,其次是叶片,再次是地下茎,地上茎中表达量最低。结论首次从鱼腥草中克隆了DXS1基因,为进一步阐明该基因在鱼腥草萜类化合物代谢途径中的重要作用奠定基础。

鱼腥草乙酰辅酶A酰基转移酶基因克隆、表达及生物信息学分析

目的通过克隆鱼腥草乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-Co A C-acetyltransferase,AACT)基因c DNA全长,并展开生物信息学分析和表达分析,为解析鱼腥草萜类次生代谢产物的生物合成机制奠定基础。方法采用RT-PCR方法获得AACT基因c DNA序列并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR方法检测了AACT基因在鱼腥草的地下茎、地上茎、叶、花中的表达情况。结果克隆获得的AACT基因c DNA全长为1 218 bp,编码405个氨基酸。生物信息学预测AACT蛋白不含跨膜区,不含信号肽。AACT基因在鱼腥草地上茎中的表达量最高,达到1.49,其次是地下茎0.96,花和叶中的表达量相对较低,分别为0.20和0.10。结论首次从鱼腥草中克隆了AACT基因,为进一步阐明该基因在鱼腥草萜类化合物代谢途径中的重要作用奠定基础。

陆英HMGS基因cDNA克隆、不同器官中的差异表达及生物信息学分析

目的克隆陆英Sambucus chinensis 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶(HMGS)基因并分析其差异表达。方法采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法获得HMGS基因c DNA序列并对HMGS蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析,并预测了该蛋白功能;利用RT-PCR方法检测了HMGS基因在陆英的根状茎、地上茎、叶、花中的表达情况。结果克隆获得的HMGS基因c DNA全长为1 401 bp,编码466个氨基酸。生物信息学预测HMGS蛋白无跨膜区,不含信号肽。HMGS基因主要在陆英的花和根状茎中表达较高,在叶中表达相对较低。结论首次从陆英中克隆了HMGS基因,为进一步阐明该基因在陆英萜类化合物代谢途径中的重要作用奠定基础。

鱼腥草查耳酮合成酶1基因cDNA克隆、差异表达及其蛋白质序列分析

目的克隆鱼腥草查耳酮合成酶1(CHS1)基因并分析其蛋白质序列。方法根据已经克隆的植物CHS基因的保守序列设计一对引物,以鱼腥草总RNA为模板,采用RT-PCR和SON-PCR的方法快速获得CHS基因序列并连接到pMD18-T Simple载体上,阳性克隆经PCR检测后进行测序。结果得到一段1 188 bp的序列,序列分析表明,该片段编码395个氨基酸,与其他高等植物CHS基因氨基酸序列同源性在62.3%以上,生物信息学分析表明,该蛋白含有CHS家族的特征多肽序列"RLMMYQQGCFAGGTVLR"和"GVLFGFGPGL",不含信号肽序列。相对荧光定量PCR分析表明,CHS1基因在花中的表达量最高,其次是地上茎,再次是地下茎,叶片中表达量最低。结论首次从鱼腥草中克隆了CHS1基因,为有效利用该基因奠定了基础。

忽地笑鳞茎中总生物碱含量的月动态变化

采用紫外分光光度法测定了不同月份忽地笑鳞茎中总生物碱含量,为确定适宜的采收时间提供实验依据。结果表明,忽地笑鳞茎中总生物碱含量随生长发育时期或月份不同存在一定差异,其中11月的最高,12月次之,1月的最低,最高值与最低值相比,约为2.6倍,差异达极显著水平(P<0.01)。精密度、稳定性实验及回收率等方法学考察表明,紫外分光光度法测定忽地笑鳞茎中总生物碱含量效果好,稳定性强,方法可靠。综合忽地笑鳞茎中总生物碱含量、中药材产量和土地利用率等因素考虑,以11月底前后采收比较适宜。

HPLC测定接骨草中的绿原酸

建立一种测定接骨草中绿原酸的高效液相色谱方法。采用索氏提取，WondaSil C-18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，327nm检测波长，流动相为0．05mol／L磷酸二氢钾：甲醇=75：25，0．8mL／min流速，柱温为室温，进样量为20μL．绿原酸在0—18μg·mL^-1（r=0.9999）范围内线性关系良好．HPLC分析方法通过精密度实验、重复性实验、稳定性实验、加样回收实验等方法学考察符合分析要求，本方法操作简便、快速、准确，可用于接骨草绿原酸含量的测定．接骨草全草及不同部位的绿原酸含量由高到低依次为：花、叶、果、全草、茎、根状茎，为更合理地利用接骨草提供实践依据．

鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因克隆与差异表达

目的克隆鱼腥草1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR)基因,并分析其差异表达。方法采用RT-PCR方法获得DXR基因c DNA序列,并对DXR蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析,并预测了该蛋白功能;利用实时荧光定量PCR方法检测了DXR基因在鱼腥草的地下茎、地上茎、叶、花中的表达情况。结果克隆获得的DXR基因长为1 416 bp,编码471个氨基酸。生物信息学预测DXR蛋白不含跨膜区,不含信号肽。DXR基因在鱼腥草的叶片中表达丰度最高,其次是地下茎,再次是地上茎,花中表达量最低。结论首次从鱼腥草中克隆了DXR基因,为进一步阐明该基因在鱼腥草萜类化合物代谢途径中的重要作用奠定基础。