β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶5靶向调控膜联蛋白A2促进神经母细胞瘤细胞侵袭迁移

目的探讨β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶5(B3GNT5)对神经母细胞瘤(NB)细胞侵袭迁移的影响及作用机制。方法利用公共数据库分析B3GNT5与NB患者高/低风险、MYCN扩增及预后的关系。收集武汉儿童医院普外科7例NB和2例节神经细胞瘤组织标本,采用免疫组织化学、实时定量荧光聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测组织和NB细胞系中B3GNT5的表达。构建B3GNT5干扰和过表达的SK-N-BE和SH-SY-5Y细胞系,Transwell检测对细胞迁移侵袭的影响,Western blot检测转移相关蛋白。应用质谱技术、免疫共沉淀、靶基因干扰实验探讨潜在分子机制。两组间比较采用t检验。结果数据库分析显示B3GNT5表达与NB患儿总体生存率和无事件生存率呈负相关[风险比(HR)=13.480、3.900,P<0.01];高危组和MYCN扩增组中的表达显著高于低危组和MYCN非扩增组(10.040±1.206比9.206±0.893、10.960±0.705比9.166±0.933,t=8.816、14.900,P<0.01)。B3GNT5干扰组SK-N-BE细胞迁移(78.980±6.591)和侵袭(39.830±7.310)的数量低于对照组(131.000±6.607、72.000±6.117,t=23.720、14.320,P<0.01)。B3GNT5与膜联蛋白A2结合,B3GNT5干扰组膜联蛋白A2糖基化水平低于对照组(0.217±0.076比0.470±0.071,t=4.192,P<0.05)。干扰膜联蛋白A2,B3GNT5过表达的SK-N-BE细胞迁移(91.780±6.873)和侵袭(99.110±7.435)的数量低于对照组(188.900±7.727、197.200±8.363,t=39.860、36.730,P<0.01)。结论B3GNT5靶向促进膜联蛋白A2糖基化修饰介导NB细胞侵袭迁移。