人CD4^+CD25^+调节性T细胞的体外培养扩增

目的建立人CD4+CD25+Treg细胞的分离和体外扩增方法,并检测扩增细胞的表型及体外免疫抑制功能。方法免疫磁性分离(MACS)方法分离人CD4+CD25+Treg细胞,加入刺激因子与之共培养扩增,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测细胞的活性和纯度,流式细胞法检测细胞主要表型标记,实时定量PCR检测Treg核心标记Foxp3的表达,混合淋巴细胞反应试验分析其免疫抑制功能,ELISPOT方法检测产生细胞因子的细胞数目。结果扩增2～3周的CD4+CD25+Treg细胞数目达到新鲜细胞的3500倍,活性>97%,纯度>96%;扩增的细胞与新鲜的细胞保持了相似的表型、Foxp3表达,其抑制功能略强于新鲜的CD4+CD25+Treg细胞,其差异具有统计学意义(71%vs51%,P<0.05),可能与其产生抑制性细胞因子的细胞数目增加有关。结论本实验室创建的分离和体外扩增人CD4+CD25+Treg细胞的方法,可以大量扩增出高纯度、有活力且不影响其抑制功能的Treg细胞,解决了CD4+CD25+Treg细胞数目少的问题。