耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染新型控制策略研究新进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)是临床常见的多重耐药菌之一,被称为“超级细菌”。随着MRSA耐药机制的不断进化,通过传统抗生素治疗MRSA感染的困难不断增加。近年来,针对MRSA感染的新型控制策略从各个层面不断深入。纳米材料的独特结构具有抗菌活性,也可作为一种高效的抗菌药物输送载体。光动力疗法通过光激活光敏剂(photosensitizer,PS)与分子氧或底物作用产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)促进细胞氧化应激。中草药多种机制的抗菌特性已经被广泛证实。免疫疗法在对抗MRSA的免疫逃逸机制、多价疫苗和混合抗体的使用取得了突破。以mecA基因为代表的基因靶点正在不断被发掘。靶向硫醇依赖的氧化还原系统(thiol-dependent redox system,TDRS)尤其是硫氧还蛋白系统(thioredoxin system,Trx system)的新型候选抗菌化合物将是未来充满潜力的生力军。本文将MRSA的新型控制策略进行综述和展望。

Lgals3在分枝杆菌感染与肉芽肿形成过程中的作用及机制研究

目的:研究宿主Lgals3分子在分枝杆菌感染与肉芽肿形成过程中的作用及机制。方法:检测Lgals3在H37Rv气溶胶感染的小鼠、家兔肺组织及临床结核病(TB)患者样本中的表达与分布;运用CRISPR/Cas9技术构建lgals3基因全身敲除(lgals3^(−/−))小鼠,并建立lgals3^(−/−)小鼠海分枝杆菌(Mm)尾静脉感染模型,观察小鼠尾组织损伤与脓肿形成,比较尾部大体病变;HE染色观察小鼠尾组织病理学变化及肉芽肿形成差异;抗酸染色观察细菌分布;小鼠尾组织匀浆铺板接种于7H10-OADC培养基后比较菌载量;免疫组化和图像分析技术观察比较小鼠尾组织中Lgals3和TGF-β、MMP-9的表达与分布。结果:H37Rv气溶胶感染的小鼠、兔子肺组织及临床结核患者肉芽肿区域中Lgals3呈强阳性表达。应用CRISPR/Cas9技术成功获得lgals3^(−/−)小鼠;Mm感染后,lgals3^(+/+)小鼠尾组织出现明显的渐进性脓肿及溃疡,而lgals3^(−/−)小鼠仅出现散在的小面积脓肿,且差异具有统计学意义(P<0.01)。HE染色观察发现lgals3^(+/+)小鼠感染Mm后伴随明显炎症细胞浸润,且形成典型肉芽肿样病变,而lgals3^(−/−)小鼠仅有少量炎症细胞分布。组织匀浆铺板计数发现,相较于lgals3^(+/+)小鼠,lgals3^(−/−)小鼠菌载量显著降低(P<0.01)。免疫组化和图像分析技术发现,lgals3^(+/+)小鼠感染Mm后Lgals3在肉芽肿区域内呈弥散分布,TGF-β和MMP-9表达上调并呈强阳性表达;lgals3^(−/−)小鼠仅检测到少量TGF-β和MMP-9。结论:Mm感染可诱导宿主Lgals3的表达,并在TGF-β和MMP-9协同作用下促进肉芽肿形成,帮助细菌逃避早期宿主免疫应答。

尿路致病性大肠杆菌与宿主相互作用的研究进展

泌尿系感染(UTI)是泌尿外科常见的感染性疾病,通常由尿路致病性大肠杆菌(UPEC)引起。UPEC入侵及定殖于尿路上皮细胞,造成泌尿系感染以及复杂的宿主免疫清除和病原体免疫逃逸,包括物理屏障的防御、中性粒细胞迁移、募集和吞噬以及细胞因子的分泌等。病原体与宿主之间复杂的免疫反应与免疫逃避是疾病发生发展的关键,也是UTI治疗的基础。本文针对最新的UTI中宿主-尿路致病大肠杆菌相互作用作一综述。

蜂毒肽与依布硒啉对金黄色葡萄球菌的协同作用与机制研究

目的研究蜂毒肽(Melittin,Mel)与依布硒啉(Ebselen,EbSe)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的协同抗菌活性和机制。方法96微孔板实验结合分光光度法(visible spectrophotometry,UV-vis)检测蜂毒肽-依布硒啉的抗金黄色葡萄球菌作用;电子显微镜(electron microscopy,EM)观察蜂毒肽-依布硒啉处理后金黄色葡萄球菌的细胞形态。通过5,5′-二硫代双(2-硝基苯甲酸)[5,5′-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid),DTNB]获得电子后显色的能力,观察蜂毒肽-依布硒啉对细菌硫氧蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)活性的影响。通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测蜂毒肽-依布硒啉对细菌胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)产量的影响;使用活性氧清除剂二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)复测上述指标。结果蜂毒肽与依布硒啉具有协同杀菌作用,可协同抑制金黄色葡萄球菌TrxR,显著上调金黄色葡萄球菌胞内活性氧产量。DTT挽救实验证明蜂毒肽-依布硒啉对细菌造成损伤是通过活性氧途径实现。结论蜂毒肽可通过协同依布硒啉靶向金黄色葡萄球菌TrxR,上调胞内活性氧的大量产生,介导细菌死亡。

Tet1对海分枝杆菌感染过程中宿主炎症反应及肥大细胞活化的影响

目的:探讨Tet1分子在海分枝杆菌(Mm)感染小鼠过程中对宿主炎症反应及肥大细胞活化的影响。方法:SPF级Tet1野生型(Tet1^(+/+))和Tet1基因敲除小鼠(Tet1^(-/-))尾静脉接种相同数量的Mm,建立小鼠尾静脉感染模型。观察记录小鼠尾部大体病变,取鼠尾组织匀浆铺板培养比较菌载量;HE染色观察组织病理学变化,抗酸染色检测细菌分布;甲苯胺蓝染色观察小鼠尾组织中肥大细胞的分布及形态差异;免疫组化检测肥大细胞活化标志物类胰蛋白酶和5羟色胺(5-HT)的表达及分布差异。结果:尾静脉接种Mm后,Tet1^(+/+)小鼠尾组织出现渐进性脓肿和明显溃烂,而Tet1^(-/-)组小鼠尾巴仅发生散在性小面积肿胀;菌落计数发现Tet1^(+/+)小鼠细菌负荷逐渐增加,而Tet1^(-/-)小鼠菌载量显著降低(P<0.01);组织病理学观察发现,Tet1^(+/+)小鼠尾组织中大量炎症细胞浸润,表皮及真皮层胶原纤维断裂,且形成肉芽肿样病变,而Tet1^(-/-)小鼠镜下观察仅有炎症细胞散在分布;抗酸染色可见红色杆菌分布;甲苯胺蓝染色观察Tet1^(-/-)小鼠大多数肥大细胞结构完整,而Tet1^(+/+)小鼠尾组织中大量肥大细胞不完整且有颗粒物质释放;免疫组化染色发现类胰蛋白酶和5-HT的表达在Tet1^(+/+)小鼠中明显增加,而在Tet1^(-/-)小鼠尾组织中阳性信号很弱。结论:Tet1缺失可降低肥大细胞的活化与脱颗粒,并缓解Mm感染介导的炎症反应及组织病理损伤。

发动蛋白抑制剂dynasore的功能及在疾病治疗中的研究进展

发动蛋白(dynamin)超家族存在于所有细胞生命活动中,在胞膜构成、肌动蛋白束和先天免疫等方面发挥重要作用。发动蛋白作为该家族的主要成员,是一种多结构域的机械化学鸟苷三磷酸酶(guanosine triphosphatase,GTPase)蛋白,对鸟嘌呤核苷酸具有低亲和力、高基础水解率,能自组装成高阶螺旋结构^([1]),在包膜重塑、膜裂变和跨高尔基体出芽等作用中发挥着重要作用^([2])。

细菌性阴道病和阴道菌群的最新研究进展

阴道微生物群是一个复杂而动态的微生态系统,在女性月经周期和整个生命周期中不断发生波动。一个健康的阴道微生物群主要由乳酸杆菌组成,它能产生各种抗菌化合物。细菌性阴道病(Bacterial Vaginosis, BV)是一种阴道微生物菌群失调所致的一种阴道炎性疾病,是全球育龄妇女中高度流行的下生殖道疾病,BV的发生受多种因素影响。本文通过细菌性阴道病状态下阴道微生物群的不同变化及其影响因素的相关研究,综合性叙述了细菌性阴道病和阴道菌群的相关性。

斑马鱼chac1基因的表达特征及其在髓系造血中的功能研究

为探索chac1基因(ChaC glutathione specific gamma-glutamylcyclotransferase 1)在早期胚胎发育中的功能,本研究以斑马鱼(Danio rerio)为研究对象首先分析了斑马鱼Chac1蛋白的序列特征并用qRT-PCR检测了chac1在斑马鱼胚胎不同发育阶段和成鱼不同组织中的表达模式,通过CRISPR/Cas9基因编辑技术在chac1基因的三个外显子上设计了3条sgRNA并通过测序及qRT-PCR检测其敲除效率。苏丹黑染色3 dpf(days post fertilization)野生型和chac1突变型斑马鱼幼鱼的中性粒细胞数量;qRT-PCR检测突变斑马鱼髓系造血相关因子。结果显示:chac1是母源基因,在受精后0~3 hpf(hours post fertilization)时其表达量较高,之后随着母本基因的影响逐渐变小,chac1的mRNA表达量下降;在斑马鱼成鱼中,其在肌肉、卵巢、脑中高表达;此外,突变型斑马鱼较野生型斑马鱼相比,其苏丹黑染色阳性信号更多;chac1突变后髓系造血转录调控因子pu.1的mRNA水平上调。综上,chac1为母源基因,其缺失会促进早期中性粒细胞的发育并伴随着髓系造血转录调控因子pu.1的上调。

肺炎克雷伯菌ST23流行株皮肤脓肿感染及肥大细胞动态变化观察

为了解肺炎克雷伯菌(KP) ST23型流行株经小鼠皮肤脓肿感染后的脓肿形成过程及肥大细胞动态变化。本研究将60只SPF级C57BL/6小鼠随机分为3组:PBS对照组、KP常规感染组与免疫抑制KP感染组,同时取20只My D88KO小鼠接种KP作为免疫功能缺失感染组。除对照组外所有感染组小鼠均分别皮下接种50μL ST23型KP菌株悬液(5×10~8cfu/只),对各组小鼠皮肤变化进行时相性观察;同时取各组小鼠皮肤组织进行组织病理学检查;采用免疫组化技术分析比较肥大细胞在小鼠体内释放的主要介质的分布与变化。结果显示,所有接种KP的小鼠皮肤均有典型脓肿形成,并且随着感染时间延长,皮肤脓肿体积逐渐增大;接种KP的正常C57BL/6小鼠皮肤脓肿较快自愈,而My D88KO小鼠皮肤脓肿自愈延后;组织病理学显示感染KP后常规组与免疫抑制剂处理的小鼠真皮层胶原纤维消失,大量炎性细胞浸润,脓肿区域有明显的肥大细胞及主要炎性介质的分布;同时显示My D88KO组小鼠皮肤有明显的组织病理损伤;而PBS对照组各方面均正常。本研究建立了KP小鼠皮肤脓肿感染模型,可为进一步研究KP皮肤感染的病原特性和发病机制等提供小动物模型。

白藜芦醇抗骨肉瘤细胞增殖及增强其免疫原性的研究

目的:探讨白藜芦醇(RES)对骨肉瘤K7M2细胞增殖的抑制作用和增强其免疫原性的潜力。方法:RES处理细胞,MTT法检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡和细胞周期;RT-qPCR检测细胞Mcl-1、Xiap、Kras、Bcl-2、CyclinE1、Bax和Caspase-3 mRNA表达水平;Western blot检测细胞Mcl-1、Xiap、Kras、Bcl-2、CyclinE1、Bax和Caspase-3的蛋白表达情况;流式检测体内外K7M2细胞MHC分子表达情况。结果:RES能抑制K7M2细胞增殖;诱导细胞凋亡;阻滞细胞周期进程;降低K7M2细胞中Mcl-1、Xiap、Kras和Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平,增强CyclinE1、Bax和Caspase-3的mRNA和蛋白表达水平;另外,RES在体内外均能增强K7M2细胞系MHC分子的表达水平。结论:RES对骨肉瘤K7M2细胞有显著的增殖抑制作用,且在体内外均显著增强K7M2细胞的免疫原性,RES具有治疗骨肉瘤的潜力。

依布硒啉的药理作用及临床应用的研究进展

依布硒啉(ebselen,EbSe)是一种人工合成的脂溶性含硒有机小分子化合物,具有广泛的生理药理活性。EbSe作为含硒化合物的典型代表,研究者们对其展开了最为深入的研究。早期研究证明,EbSe能通过清除细胞内氧自由基,抑制脂质过氧化等过程维持多种组织的生理活性。近年来的研究发现,EbSe的含硒基团可影响底物的蛋白质半胱氨酸残基活性,使其潜在的应用范围不断扩大,并在人体多个系统的疾病治疗中表现出优良的潜在应用前景。此外,最新研究证实,EbSe还在对抗多重耐药菌的感染中显示出强大的活性。基于此,本文将EbSe多样的药理活性及其相关临床应用的最新研究进展进行简要综述,以期给科研与临床工作者提供一些参考。

白藜芦醇抑制荷骨肉瘤小鼠肿瘤生长的机制研究

目的:探讨白藜芦醇(RES)抗荷骨肉瘤小鼠移植瘤生长的作用及其机制。方法:构建小鼠移植瘤模型,RES注射给药,每日观察体重及瘤体变化,RT-qPCR检测肿瘤细胞Xiap、Kras、Mcl-1、Bcl-2、CyclinE1、BAX基因的表达,Western blot检测相应蛋白表达;流式细胞术检测体内外肿瘤细胞PD-L1表达,以及移植瘤组织中CD8+T细胞、NK细胞、NKT细胞、MDSCs和Treg细胞数量。结果:RES能抑制小鼠移植瘤生长;在体外增强而在体内降低了肿瘤细胞表面PD-L1表达;下调肿瘤细胞Xiap、Kras、Mcl-1、Bcl-2、CyclinE1 mRNA及相应蛋白的表达,提高BAX mRNA及相应蛋白表达水平;增加肿瘤组织中CD8+T细胞、NK细胞、NKT细胞百分比,降低MDSCs和Treg细胞百分比。结论:RES能显著抑制荷骨肉瘤小鼠移植瘤生长,其机制与调控细胞凋亡和细胞周期相关基因和蛋白表达有关;同时,RES能调节移植瘤中多种免疫细胞发挥抗肿瘤效应。

嵌合抗原受体基因修饰的NK细胞治疗实体瘤的研究进展

随着嵌合抗原受体基因修饰的T(CAR-T)细胞疗法在血液肿瘤领域的成功应用,CAR技术引起了广泛的关注。自然杀伤(NK)细胞作为先天免疫系统的重要效应细胞,用CAR修饰NK细胞(CAR-NK)同样有治疗恶性肿瘤的潜力,特别是在实体瘤方面。CAR-NK细胞疗法在治疗胶质母细胞瘤、卵巢癌和乳腺癌等实体恶性肿瘤方面的研究已经开展且展现出一定的治疗效果。

AZIN-1小分子抑制剂抗非小细胞肺癌活性研究

目的研究鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(AZIN-1)小分子抑制剂对非小细胞肺癌的抑制作用及机制。方法通过CCK-8法检测A549细胞增殖;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染)分析A549细胞凋亡;蛋白质免疫印迹实验检测A549细胞内鸟氨酸脱羧酶(ODC)、鸟氨酸脱羧酶抗酶-1(AZ-1)和AZIN-1的表达;流式细胞术(PI单染)分析A549细胞周期;高效液相色谱法检测A549细胞内总多胺含量。结果AZIN-1小分子抑制剂能够显著抑制A549细胞的增殖,使细胞发生G0/G1周期阻滞,并诱导A549细胞发生凋亡,显著抑制AZIN-1和ODC的表达,干扰细胞内多胺代谢,降低细胞内总多胺含量。结论AZIN-1小分子抑制剂对A549细胞具有显著的生长抑制作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡和干扰多胺代谢有关。

转录调节因子FOXN1异常表达引起相关疾病的研究进展

自发现FOXN1缺乏症以来,FOXN1在胸腺发育和皮肤生长中的作用愈来愈受重视。FOXN1是胸腺上皮和T细胞发育的主要调节因子,是维持胸腺发育、功能和稳态的基础。在皮肤中,FOXN1对角质形成细胞和毛囊细胞的分化起关键作用,但潜在的分子机制仍有待进一步阐明。

胸腺上皮细胞发育分化的信号通路研究进展

胸腺微环境是决定T细胞增殖、分化和选择性发育的重要条件。胸腺上皮细胞(TECs)是胸腺微环境最重要的组分。已有研究报道调控TECs发育分化的相关信号通路,本文从细胞内分子NF-κB及其信号通路、细胞外信号分子Bmp、Wnt、Shh、FGF及其相应信号通路和其他类信号通路RA、Notch等3个方面阐述了不同的信号通路对TECs发育分化的作用。明确以上信号通路对TECs作用,将有助于寻找合适靶点促进退化TECs的增殖,从而促进衰老胸腺的重建。

N-杂环卡宾金属配合物抗肿瘤和抗菌活性的研究进展

自Arduengo在1991年首次成功分离到稳定的游离N-杂环卡宾化合物(NHC)以来,其作为过渡金属配合物新型配体的研究得到迅猛发展。NHC金属配合物除了在催化、合成和材料等方面得到广泛应用外,在治疗方面的应用也值得特别关注。近年来研究发现,NHC-金属配合物在抗肿瘤和抗微生物方面展现出良好的生物活性,具有巨大应用前景。基于此,本文就NHC-金(Au)、NHC-银(Ag)、NHC-钯(Pd)、NHC-铂的抗恶性肿瘤增殖活性及NHC-Au、NHC-Ag、NHC-Pd的抗微生物活性进行简要综述。

细菌感染与胸腺结构和功能变化的研究进展

胸腺是负责T细胞发育分化成熟的中枢免疫器官,除了增龄性胸腺衰退,临床放疗及化疗、感染及肿瘤等因素也是导致胸腺变化的重要原因,胸腺变化包括胸腺结构,胸腺细胞数量与组成以及胸腺功能的变化。本文着重对细菌感染导致的胸腺变化及其相应机制进行综述,并对减轻感染引起的胸腺损伤的策略进行小结,以期为预防或逆转感染引起的胸腺损伤提供一定的临床参考。

胸腺上皮细胞特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型的鉴定及免疫学特征观察

目的构建并鉴定胸腺上皮细胞(thymic epithelial cells,TECs)特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型,评价其免疫学特征。方法采用小鼠胚胎干细胞(ES细胞,embryonic stem cells)打靶基因敲除技术,得到F0代的GSK-3β^(flox/flox)(GSK-3β^(f/f))小鼠;再采用Cre-LoxP系统进行小鼠的繁殖;PCR鉴定,筛选出基因型为GSK-3β^(f/f)FoxN1-Cre^(+/-)(GSK-3β^(-/-))小鼠,即为在TECs特异性敲除GSK-3β基因的小鼠。观察基因敲除鼠的一般生物学特征、繁殖能力和子代存活率。应用HE染色、流式细胞术及免疫荧光技术,比较基因敲除鼠和野生型小鼠免疫器官结构、胸腺、脾及外周血中免疫细胞比例及增殖能力差异。结果成功构建TECs特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型。与野生型(wild type,WT)小鼠相比,GSK-3β^(-/-)小鼠一般生物学特征无明显差异,子代存活率>90%;衰老进程中GSK-3β^(-/-)小鼠胸腺比WT小鼠体积大,胸腺指数高,胸腺细胞数量多;脾中的初始T细胞及近期迁移细胞数量也显著多于WT小鼠。结论成功构建了TECs特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型。为研究GSK-3β基因在TECs的功能和作用机制提供了很好的研究模型。

冠心病相关基因研究进展

冠心病(coronary heart disease,CHD)是世界范围内致死率和致残率居首位的复杂性疾病。大量研究表明,冠心病是多个基因协同作用的,由遗传因素、环境因素或二者共同引发的表型呈间断分布的复杂性疾病。遗传因素显著影响冠心病的发生发展,其病理分子机制复杂,因此,对于冠心病易感基因的研究已经成为了深入了解冠心病发病机制的重要途径。本文综述了冠心病相关易感基因雄激素依赖性TFPI调节蛋白(androgen-dependent TFPI regulating protein,ADTRP)、载脂蛋白(apolipoprotein,Apo)基因家族、脂肪因子、炎症细胞因子等与冠心病发病机制之间的关联性。