案例教学法结合临床路径在神经外科实习带教中应用的研究

目的:研究案例教学法结合临床路径教学在神经外科实习带教中的效果。方法:将2010年9月-2011年5月在温州医学院附属慈溪医院实习的五年制本科实习生50人随机分为实验组(25人)和对照组(25人),实验组实施案例教学法结合临床路径教学;对照组采用传统的方式教学,2周实习结束后比较两组学生的兴趣满意度调查结果和出科考试成绩。结果:案例教学法结合临床路径组出科考成绩和满意度调查结果均明显优于传统组(P<0.05)。结论:案例教学法结合临床路径在实习带教中可明显提高教学效果,是一种较好的临床神经外科实习教学模式。

鼠神经生长因子诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

目的:观察鼠神经生长因子(mNGF)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞分化的影响。方法:4周龄健康SD大鼠60只,按随机数字表法分为治疗组(n=30)和正常对照组(n=30)。治疗组在常规培养的基础上加入浓度为0.1μg/mL mNGF作为诱导液。将培养的第3代BMSCs制成单细胞悬液,诱导后3d,观察细胞形态变化,行神经元特异性烯醇酶(NSE)免疫荧光检测,计算阳性率。结果:正常对照组细胞仅有少量NSE的表达,治疗组细胞表达NSE阳性率较对照组细胞显著增加(P<0.01)。结论:mNGF可诱导大鼠BMSCs向神经元样细胞分化。

Neurogenin2基因调控许旺细胞转分化为神经元

背景:Neurogenin2(Ngn2)基因调控星形胶质细胞分化为神经元已被实验证实,这提示许旺细胞也可能通过基因调控分化为神经元。目的:研究Neurogenin2基因调控大鼠许旺细胞向神经元分化的可行性。方法:体外培养、纯化及鉴定大鼠许旺细胞,然后用含绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体系统将Neurogenin2基因转染导入许旺细胞中,最后用含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和脑源性细胞生长因子的无血清DMEM诱导培养许旺细胞2周。显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学检测髓磷脂碱性蛋白及神经元特异性烯醇化酶。结果与结论:许旺细胞转染导入Neurogenin2基因并诱导分化后,免疫荧光检测发现12.56%的细胞表达神经元标志性蛋白神经元特异性烯醇化酶,而对照组均未发现表达神经元标志性蛋白神经元特异性烯醇化酶。Neurogenin2基因植入可使大鼠许旺细胞表达神经元标志性蛋白神经元特异性烯醇化酶,提示该基因可调控许旺细胞转分化为神经元。

神经生长因子对重型颅脑损伤患者血清特异性烯醇化酶和超敏C反应蛋白水平的影响及疗效观察

目的探讨神经生长因子对重型颅脑损伤患者血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)和超敏C反应蛋白(hsCRP)水平的影响及疗效观察。方法选择68例重型颅脑损伤患者,随机分为观察组和对照组。两组患者均予以常规内科治疗(保持呼吸道通畅、降低颅内压、止血、维持水电质平衡及营养支持等),有手术指征的及时手术治疗。治疗组在此治疗的基础上加用神经生长因子18μg皮下注射,每日1次,疗程2周。观察两组治疗后的效果及药物不良反应,并比较治疗前后血清NSE和hs-CRP水平的变化。结果治疗2周后,观察组和对照组患者格拉斯哥昏迷评分[(12.45±1.81)、(10.48±1.37)分]均较治疗前[(7.52±1.34)、(7.49±1.38)分]明显改善(P<0.01或P<0.05),观察组的改善幅度大于对照组(P<0.05);两组患者血清NSE和hs-CRP水平[(18.76±4.68)μg/L、(28.56±6.71)μg/L、(11.68±3.67)mg/L、(17.58±4.11)mg/L]均较治疗前[(35.89±7.52)μg/L、(35.94±8.01)μg/L、(25.64±5.34)mg/L、(25.19±5.62)mg/L]明显下降(P<0.05或P<0.01),观察组下降幅度大于对照组(P<0.05)。两组患者药物不良反应发生率比较差异无统计学意义(χ2=0.18,P>0.05)。结论神经生长因子治疗重型颅脑损伤患者能有效地提高治疗效果,具有良好的脑保护作用,其作用机制与降低血清NSE和hs-CRP水平密切相关。

急性乙醇中毒对大鼠颅脑损伤后神经系统的影响及其氧自由基损伤机制的研究

目的 探讨急性乙醇中毒对大鼠颅脑创伤后神经系统的影响及其氧自由基损伤机制.方法 Feeney法制作大鼠重型颅脑损伤模型,乙醇灌胃法建立急性乙醇中毒模型.48只雄性SD大鼠随机分为单纯急性乙醇中毒组（A组）、单纯颅脑创伤组（B组）、急性乙醇中毒合并颅脑创伤组（C组）和假手术组（D组）各12只.在伤后1、6、24、72h进行行为学评分;在伤后72h,各组随机取其中6只在麻醉下经心脏灌注4%多聚甲醛固定脑组织,TUNEL法测凋亡细胞数;其余6只快速断头取水肿带脑组织,测定脑组织内SOD活性及MDA含量.结果 C组大鼠的行为学评分最低,恢复最慢;其脑组织内MDA含量最高,SOD含量最低;其神经细胞凋亡最多.结论 急性乙醇中毒可加重颅脑创伤后氧自由基的损害,增加神经细胞的凋亡,影响神经功能的恢复.

组织工程脊髓支架材料:聚乳酸-羟基乙酸最佳孔径的筛选

背景:细胞支架是细胞生长的载体,其孔径是影响组织工程脊髓疗效的重要因素之一。目的:通过将神经干细胞与不同孔径的聚乳酸-羟基乙酸(poly lactic-co-glycolic acid,PLGA)支架体外复合培养,筛选确立组织工程脊髓支架材料的最佳孔径。方法:取传第1代的神经干细胞悬液50μL(细胞数1010L-1),分别种植在孔径200～300μm、400～500μm的PLGA支架上复合培养7d,得到两种组织工程脊髓。30只大鼠均建立脊髓损伤模型,造模后分为3组,分别在脊髓缺损处立即填塞上述两种组织工程脊髓,空白对照组在缺损处不进行材料移植。倒置相差显微镜及电镜下观察神经干细胞在PLGA支架中的生长增殖与分布,MTT检测两种组织工程脊髓所含神经干细胞的相对数量,采用BBB运动功能评分比较不同孔径的组织工程脊髓的移植疗效。结果与结论:镜下神经干细胞在各孔径材料上均紧密贴附并增殖分化,组织相容性良好。共培养7d后,孔径200～300μmPLGA支架组、孔径400～500μmPLGA支架组的吸光度值基本相似(P>0.05),说明PLGA支架的孔径大小对培养的神经干细胞增殖数量无明显影响。移植第4周与空白对照组比较,孔径200～300μmPLGA支架组、孔径400～500μmPLGA支架组大鼠的神经功能均有不同程度恢复,BBB运动功能评分均明显升高(P<0.05),且孔径200～300μm的PLGA支架其移植效果更好。

新型超顺磁性氧化铁在干细胞活体示踪中的应用研究

目的:研究超顺磁性氧化铁(superpara-magnetic iron oxide,SPIO)标记干细胞的效率及其在磁共振活体示踪中的应用价值。方法:以3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTS)修饰Fe2O3配制成SPIO,用SPIO转染标记骨髓间充质干细胞(MSCs),对标记后的MSCs行普鲁士蓝染色鉴定、MTT测试细胞相对数量。最后将标记后的MSCs移植入大鼠脑内,磁共振(MRI)扫描示踪显示。结果:普鲁士蓝染色可直接显示SPIO高效率标记MSCs,MTT测试表明SPIO标记对MSCs增殖数量及其活力无明显影响,MRI检查发现脑内移植的SPIO标记MSCs在T2上呈明显的低信号。结论:APTS修饰Fe2O3配制而成的新型SPIO对细胞无明显毒性,没有多聚赖氨酸(PLL)等转染剂仍可直接高效率标记MSCs,MRI活体显影示踪效果良好。

亚低温对急性重型颅脑损伤患者血清C反应蛋白浓度的影响

目的:通过动态观察亚低温对急性重型颅脑损伤患者血清C反应蛋白(CRP)浓度的影响,探讨亚低温在急性重型颅脑损伤治疗中的作用。方法:将120例急性重型颅脑损伤患者(观察组)随机分为亚低温组和常规组。亚低温组在常规治疗的基础上加用亚低温治疗,直肠温度维持在33～35℃,持续3～5 d。所有患者于入院6 h内及入院后第2～6天应用速率放射比浊法动态检测血清CRP浓度,结合临床表现及伤后1个月格拉斯哥预后评分(GOS评分)进行比较分析。将本院体检的正常成年人30例作为对照组。结果:观察组血清CRP浓度明显高于对照组(P<0.05);亚低温组血清CRP浓度明显低于常规组(P<0.05);观察组中预后恶劣组血清CRP浓度明显高于预后良好组(P<0.05)。结论:急性重型颅脑损伤后血清CRP浓度升高,早期应用亚低温能够降低血清CRP浓度,保护神经功能,改善预后。

右美托咪啶在高血压脑出血患者术后镇静镇痛中的应用

高血压脑出血（Hypertensive intracerebral hemorrhage，HICH）患者术后疼痛、躁动、血压波动大是造成术后颅内压增高的常见原因，常导致患者预后不佳[1]。右美托咪啶是一种高选择性α2肾上腺素能受体激动剂，镇静、镇痛效果较好，且无呼吸抑制作用。近年来，我院将右美托咪啶用于HICH患者术后的镇静和镇痛，取得良好效果，现报道如下。

破裂颅内动脉瘤急诊介入栓塞治疗189例临床分析

目的 探讨应用血管内介入栓塞技术治疗急性期颅内破裂动脉瘤的临床疗效.方法 对以蛛网膜下腔出血（SAH）为首发症状的侣9例（198个）颅内动脉瘤早期（出血后3d内）采用血管内介入栓塞治疗.患者术前Hunt-Hess分级l-II级105例,m级48例,Ⅳ级34例,Ⅴ级2例;均采用电解或水解脱式微弹簧圈栓塞治疗,其中32例宽颈动脉瘤采用球囊瘤颈成型弹簧圈栓塞术,16例宽颈或者梭形动脉瘤采用支架辅助弹簧圈栓塞术.1例假性动脉瘤单纯采用带膜支架植入闭塞,1例载瘤动脉单纯采用球囊闭塞,2例动脉瘤采用胶水或者胶水加弹簧圈栓塞.结果 198个颅内动脉瘤完全致密栓塞166个,不完全致密栓塞21个,不完全栓塞10个,栓塞失败1个;术中发生出血6例.术后发生再出血2例,死亡3例.结论 对Hunt-Hess分级Ⅰ～Ⅳ级的患者实施急诊介入治疗安全可靠,可避免动脉瘤再次破裂出血,防止或减少并发症,明显降病死率和致残率.

新型超顺磁性氧化铁在雪旺细胞移植后活体示踪中的应用研究

目的:研究一种新型超顺磁性氧化铁(Superparamagnetic iron oxide,SPIO)在雪旺细胞(SCs)标记及磁共振(MRI)活体示踪中的应用。方法:以二巯基丁二酸修饰三氧化二铁(Fe2O3)配制成一种新型SPIO,用于标记SCs。实验组用SPIO标记SCs,对照组不用SPIO标记,每组各10个样本。对标记后的SCs行普鲁士蓝染色鉴定、MTT测试细胞相对数量。最后将标记后的SCs移植入大鼠脑内,MRI扫描活体示踪。结果:普鲁士蓝染色发现该SPIO可高效率标记SCs,MTT测试表明实验组与对照组的雪旺细胞相对数量无统计学差异(P>0.05),MRI检查发现脑内移植的SPIO标记SCs在T2相上呈明显的低信号。结论:通过二巯基丁二酸修饰Fe2O3获得了新型SPIO,该新型SPIO对细胞增殖及活力无明显影响,不需要转染剂仍可高效率标记SCs,MRI活体显影示踪效果良好。

同期同侧脑室-腹腔分流术加颅骨缺损修补术24例疗效分析

交通性脑积水合并颅骨缺损是颅脑损伤开颅去骨瓣减压术后常见的并发症之一，发生率可高达28％，远高于未去骨瓣的颅脑损伤患者。浙江大学医学院附属第二医院神经外科于2007年7月至2009年6月收治此类患者24例，采用同期同侧脑室-腹腔（V—P）分流术加颅骨缺损修补术治疗，疗效满意，现报道如下。

急性颅脑损伤后垂体前叶激素的动态变化及意义

目的探讨急性颅脑损伤患者垂体前叶激素水平的变化与颅脑损伤程度及预后的关系。方法随机抽取90例颅脑损伤患者作为观察组,采用酶联免疫定量分析法动态检测伤后第1、3、5、7、14、30d血清催乳素(PRL)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成激素(LH)和促甲状腺激素(TSH)水平;30例正常人作对照组,损伤程度采用GCS评分评估,预后采用GOS评分评估。结果观察组血清PRL、FSH、LH较对照组显著升高(P<0.05),TSH较对照组略降低(P>0.05);观察组血清PRL、FSH、LH水平伤后升高(72h内尤为明显),后逐渐降低,血清TSH的水平伤后略降低,后逐渐回升;GCS评分较低者垂体前叶激素变化幅度较大;预后恶劣的颅脑损伤患者垂体前叶激素变化幅度较大。结论急性颅脑损伤后血清垂体前叶激素PRL、FSH及LH水平明显升高,变化程度与颅脑损伤严重程度及预后有关。

颅脑损伤后脑组织中水通道蛋白4表达的变化

目的研究颅脑损伤后水通道蛋白4(AQP-4)在脑组织中表达的变化及其临床意义。方法对27例颅脑损伤患者行开颅手术,将术中取得的挫伤水肿脑组织(损伤组)和颞极减压获得的相对正常脑组织(对照组)进行AQP-4的免疫组化和real-time PCR检测。结果损伤组各时点挫伤水肿脑组织AQP-4的表达量均明显高于对照组(均P<0.05);损伤24h后周围水肿脑组织中的AQP-4表达量显著升高。结论颅脑损伤后脑水肿的形成和发展与AQP-4的异常表达密切相关。

颅脑创伤后大鼠脑组织自噬表达变化及渥曼青霉素保护作用的研究

目的探索颅脑创伤后大鼠脑组织自噬表达变化及渥曼青霉素的保护作用,为临床治疗脑外伤提供实验依据。方法将120只健康成年雄性SD大鼠随机分为3组[假手术组(A组)、颅脑创伤组(B组)、渥曼青霉素治疗组(C组)],每组40只。B、C组使用PinPoint^(TM)精密颅脑创伤撞击器、直径4mm的打击头制作中度创伤性脑损伤模型,其中C组于建模前10min侧脑室注入渥曼青霉素(0.5μg/kg),B组注入含有二甲基亚砜(DMSO)的PBS(25μl/kg);A组暴露硬脑膜但不撞击,建模前注入含有DMSO的PBS(25μl/kg)。采用Western blot检测自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ,p62)表达水平,应用大鼠行为学评分观察大鼠颅脑创伤后神经功能的变化,采用干湿法检测脑组织含水量。结果与A组相比,B组和C组大鼠在颅脑创伤后24、72、168h脑组织LC3-Ⅱ表达水平增加,p62表达水平减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与B组相比,C组大鼠在颅脑创伤后24、72、168h脑组织LC3-Ⅱ表达水平减少,p62表达水平增加,差异均有统计学意义(均P<0.05);伤后72、168h脑组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低(均P<0.05)。颅脑创伤后48、72h,C组大鼠行为学评分均高于B组(均P<0.05)。颅脑创伤后72h,B组和C组脑组织含水量均较A组明显增加(均P<0.05),但C组较B组明显减少(P<0.05)。结论渥曼青霉素能明显抑制颅脑创伤后过度的自噬反应,减轻脑水肿,改善大鼠神经功能。

早期肠内营养对急性重型颅脑损伤患者血清C反应蛋白浓度的影响

目的 通过动态观察早期肠内营养（EEN）对急性重型颅脑损伤患者血清C反应蛋白（CRP）浓度的影响,探讨EEN在急性重型颅脑损伤治疗中的作用.方法 将120例急性重型颅脑损伤患者随机分为EEN组和早期肠外营养（PN）组.入院48h内给予不同方法的营养支持.所有患者于入院6h内及入院后第2、4、6、8、14天应用速率放射比浊法动态检测血清CRP浓度.并将体检的正常成年人30例作为对照组.结果 EEN和PN组血清CRP浓度明显高于对照组（P＜0.05）;EEN和PN组伤后第2天血清CRP浓度达到峰值,随着时间推移两组患者血清CRP浓度均呈下降趋势,但EEN组下降幅度更明显,伤后第4、6、8及14天EEN组血清CRP含量均明显低于PN组（P＜0.05或0.01）.结论 急性重型颅脑损伤后血清CRP浓度升高,EEN可保护重型颅脑损伤患者的胃肠道黏膜,减轻其全身炎症反应,改善神经功能.

应用Roy理论对非首次化疗病人适应性分析

目的应用Roy适应模式提高非首次化疗病人的适应性。方法根据Roy适应模式的4个层面,即生理、自我概念、角色适应、相互依赖,自行设计适应性问卷对非首次化疗病人进行调查。结果非首次化疗病人不适应方面表现为:生理层面为恶心、呕吐;自我概念层面为适应外形情况;角色适应层面为对自己的能力产生怀疑并产生退缩和依赖心理;相互依赖层面为对家属的依赖性增强。结论根据Roy适应模式分析非首次化疗病人的适应性,以便进行针对性护理,改善化疗病人的适应性,提高化疗效果和病人的生存质量。

MAPKs信号阻断剂U0126对大鼠颅脑损伤后水通道蛋白4和脑水肿影响的研究

目的研究水通道蛋白4（AQP4）在颅脑损伤性大鼠脑内的表达，及丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信号转导通路阻滞剂U0126对其表达的影响。方法Feeney法制作大鼠重型颅脑损伤模型，大鼠尾静脉注射药物U0126，免疫电镜观察AQP4的分布，测定脑组织含水量。并采用免疫组化法和荧光定量PCR检测AQP4的表达。免疫组化法测定预先经尾静脉给予U0126后MAPKs信号通路关键蛋白细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）和cAMP反应元件结合蛋白（CREB）的磷酸化水平，同时观察U0126对脑水肿和AQP4表达的影响。结果假手术组AQP4表达较低，在损伤后表达升高，脑组织含水量增加，给予U0126后AQP4的表达和脑组织含水量降低，同时ERKl／2磷酸化水平和CREB的磷酸化水平降低。结论颅脑损伤后AQP4表达上升，脑水肿明显，给予U0126可阻断MAPKs信号通路．抑制AQP4的表达，减轻脑水肿。

脑出血患者抵抗素基因+299G>A位点多态性分析

目的揭示浙江地区汉族脑出血患者抵抗素基因+299G>A位点单核苷酸多态性与血浆抵抗素及C-反应蛋白水平的相关性。方法选取344例高血压性基核出血患者和344例年龄及性别均配对的健康体检者,入院时或体检时抽取外周血提取DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段多态性分析基因型,同时采用ELISA法检测脑出血患者血浆抵抗素及C-反应蛋白浓度,统计分析其相关性。结果酶切后可见抵抗素基因+299G>A位点有GG、GA和AA 3种基因型。健康体检者等位基因G和A的频率分别为64.8%和35.2%,基因型GG、GA和AA的频率依次为41.9%、45.9%和12.2%。脑出血患者等位基因G和A的频率分别为69.3%和30.7%,基因型GG、GA和AA的频率依次为为49.1%、40.4%和10.5%。经Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验,脑出血患者及健康体检者各基因型频率均符合遗传平衡。经卡方检验,脑出血患者及健康体检者各基因型差异无统计学意义(P=0.159)。GG、GA和AA基因型脑出血患者血浆抵抗素浓度依次为(23.9±7.2)ng/ml、(26.4±7.2)ng/ml和(26.9±9.7)ng/ml,血浆C-反应蛋白浓度依次为(7.5±2.2)mg/L、(8.3±2.7)mg/L和(8.4±3.0)mg/L。采用方差检验,GG基因型患者血浆抵抗素和C-反应蛋白浓度均显著低于GA和AA基因型患者(P均<0.05),而GA和AA基因型患者血浆抵抗素和C-反应蛋白浓度差异无统计学意义(P均>0.05)。采用多元线性回归分析,脑出血患者入院时血浆抵抗素浓度与C-反应蛋白浓度显著正相关(t=7.032,P<0.001)。结论浙江地区汉族脑出血患者抵抗素基因+299G>A位点单核苷酸多态性与血浆抵抗素和C-反应蛋白浓度显著相关,可能参与脑出血炎症反应。