芳香开窍药对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障影响的实验研究

目的:研究麝香、冰片、安息香和苏合香4味芳香开窍药对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障结构与功能的影响。方法:线栓法制备局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,透射电镜观察缺血侧半球额顶区皮质血脑屏障的超微结构,ELISA法测定缺血侧脑组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的含量。结果:电镜结果显示,模型和溶媒组大鼠缺血侧半球额顶区皮质区域毛细血管内皮细胞、星型胶质细胞及神经元均出现不同程度的损伤,内皮细胞间的紧密连接打开,基膜溶解,细胞水肿较为严重。冰片(200 mg.kg-1)组大鼠的3种细胞结构基本正常,紧密连接结构较清晰,多数细胞器无显著异常表现;麝香(66.6 mg.kg-1)组大鼠毛细血管内皮细胞和星型胶质细胞结构基本规则,但神经元内的电子分布不均匀;苏合香(1.332 g.kg-1)组大鼠星型胶质细胞结构基本正常,但毛细血管内皮细胞和神经元均呈现不同程度的水肿表现;安息香(1.0 g.kg-1)组大鼠毛细血管内皮细胞和星型胶质细胞水肿明显,部分神经元有轻微水肿现象。此外,冰片能显著降低缺血侧脑组织中VEGF含量,但对MMP-9影响不明显;麝香有降低VEGF与MMP-9含量的趋势;苏合香与安息香的作用不明显。结论:芳香开窍药对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障结构的损伤有一定保护作用,作用机制可能与下调VEGF,MMP-9水平有关,其中冰片作用为优,麝香次之,苏合香和安息香作用较弱。

芳香开窍药对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障通透性的影响

目的观察4味芳香开窍药(冰片、麝香、苏合香、安息香)及其不同提取部位对脑缺血再灌注损伤小鼠血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法结扎小鼠双侧颈总动脉30min再灌注1h后,小鼠尾静脉注射伊文思蓝(Evans blue,EB)250mg.kg-1,采用甲酰胺浸泡,荧光法测定小鼠脑组织中EB含量以评价药物对缺血再灌注损伤小鼠BBB通透性的影响。结果冰片全药(200 mg.kg-1)、麝香全药与麝香石油醚提取部位(66.6 mg.kg-1)能显著性降低脑缺血再灌注损伤模型小鼠脑组织中EB含量;苏合香生药(1.33 2 g.kg-1)、安息香生药与石油醚提取部位(1 g.kg-1)有降低EB含量的趋势。结论麝香、冰片能对抗不完全缺血再灌注损伤模型小鼠血脑屏障通透性的异常增高,表现出对病理状态下血脑屏障功能的保护作用。苏合香与安息香的作用强度弱于麝香、冰片。该类药物对病理状态下血脑屏障功能的保护效应是其用于治疗缺血性脑病的药理学基础之一。实验结果亦提示药物的脂溶性部位可能是其作用于脑组织的物质基础。

远志、厚朴配伍对其活性成分在大鼠肠段吸收的影响

目的研究远志和厚朴配伍对其活性成分细叶远志皂苷,远志口山酮Ⅲ,和厚朴酚,厚朴酚在大鼠不同肠段的吸收影响。方法采用在体单向肠灌流模型,用重量法校正灌流液体积,通过HPLC-DAD测定肠灌流液中的被测成分质量浓度,以及P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)抑制剂对吸收的影响。结果配伍组细叶远志皂苷在空肠、结肠的Ka、Papp值均显著低于远志组(P<0.05,P<0.01),远志口山酮Ⅲ在各肠段的Ka、Papp值与远志组比较均有减小趋势;配伍组和厚朴酚、厚朴酚的Ka、Papp值与厚朴组比较均有增大趋势。加入不同P-gp抑制剂盐酸维拉帕米后,各组中细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ和厚朴酚的Ka值和中、高浓度组中厚朴酚的Ka值均显著高于空白组(P<0.05,P<0.01)。加入MRP2抑制剂吲哚美辛后,各组中细叶远志皂苷及中、高浓度组中远志口山酮Ⅲ的Ka、Papp值均极显著高于空白组(P<0.01),和厚朴酚与厚朴酚的Ka、Papp值均有高于空白组的趋势。结论厚朴能抑制远志中细叶远志皂苷、远志口山酮Ⅲ在空肠和结肠的吸收,但受P-gp和MRP2外排影响,提示两成分可能是P-gp和MRP2的底物;而远志能促进厚朴中和厚朴酚、厚朴酚的吸收,但均不是P-gp和MRP2的底物,远志和厚朴配伍不宜与P-gp和MRP2酶抑制剂同用。

厚朴汁炮炙远志对和厚朴酚、厚朴酚及细叶远志皂苷的影响

目的考察用厚朴汁炮炙远志药液与单味药液中指标成分的量。方法采用HPLC检测法,Boston Green C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),检测各药液中和厚朴酚、厚朴酚及细叶远志皂苷的量。结果优选出的厚朴汁炙远志药液所含和厚朴酚及厚朴酚分别为0.073、0.111 mg/g,厚朴单味药液中和厚朴酚及厚朴酚分别为0.100、0.153mg/g,二者比较,炮制品药液中的酚性物质略有降低;而炮制品药液中的细叶远志皂苷为3.843 mg/g,远志单味药液中的量为2.653 mg/g,二者比较,炮制品药液中的细叶远志皂苷略有升高,但不显著。结论炮制对指标性成分无显著影响。

基于网络药理学分析牛黄治疗缺血性脑卒中的作用机制

目的探索牛黄治疗缺血性脑卒中的潜在靶点及信号通路。方法基于TCMSP、PubChem Compound-NCBI、GeneCards、KEGG、DisGeNET基因-疾病关联等数据库,检索牛黄主要活性成分的作用靶点及缺血性脑卒中的靶基因,绘制活性成分-作用靶点网络图、构建作用靶点蛋白-蛋白相互作用网络(PPI),得出牛黄与缺血性卒中两者共同的作用靶点,并将牛黄的作用靶点进一步行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析。结果得到牛黄活性成分的作用靶点60个,缺血性脑卒中的靶点基因260个,两者共同的作用靶点8个,分别为:HMGCR、PPARA、CYP2C19、ESR1、ESR2、MMP1、MAPT、CASP3。GO功能富集分析和KEGG通路富集结果提示,牛黄治疗缺血性脑卒中与甾体激素的生物合成、代谢通路、神经活性配体-受体相互作用有关。结论初步预测牛黄治疗缺血性脑卒中可能通过靶向HMGCR、CYP2C19、ESR1、ESR2、CASP3、CYP11、CYP17、CYP19八个关键蛋白及甾体激素的生物合成、代谢相关通路起作用,仍需进一步药理实验验证。

中药对神经血管单元的保护作用研究进展

神经血管单元(NVU)概念的提出将缺血后脑保护的目标从过去单一的神经保护提升到对神经细胞、血管及胶质等整体结构式的保护,为缺血性脑损伤的基础研究及治疗提供了新方向。中药具有多组分、多靶点、多环节、多途径的全面保护及整体调节的优势和特点,正好符合NVU治疗策略的要求。文章主要对具有神经血管单元保护作用的中药及复方研究进展进行综述,以期为今后中药治疗缺血性脑卒中的临床研究提供一定参考。

芳香开窍药对脑缺血再灌注损伤大鼠保护作用机制的研究

目的:研究麝香、冰片、安息香和苏合香四味芳香开窍药对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用机制。方法:线栓法制备局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,观察药物对大鼠术前、缺血2h再灌注4h、10h、22h时体温的影响;比色法测定大鼠缺血2h再灌注22h后血清NO含量与NOS活性;ELISA法测定缺血侧脑组织中IL-1β和IL-6含量。结果:冰片(0.2g/kg)能明显抑制大鼠缺血2h再灌注4h、10h、22h时体温的异常升高,麝香(66.6mg/kg)和苏合香(1.332g/kg)仅在再灌注后4h时明显抑制体温升高,安息香(1.0g/kg)作用不明显。麝香、冰片和苏合香能显著降低模型动物血清NO含量,麝香、冰片还能显著抑制血清NOS活性。冰片、麝香能显著降低缺血侧脑组织IL-1β、IL-6含量,苏合香和安息香的作用不明显。结论:芳香开窍药对脑缺血再灌注损伤大鼠有一定的保护作用,其中麝香、冰片作用为优,其次苏合香,安息香作用较弱,作用机制可能与抑制炎症介质释放减轻炎症损伤及抗NO神经毒性有关。冰片对模型动物体温升高的良好抑制作用,从一个侧面反映了该药区别于其他三味药物的"寒凉"之性。

厚朴炙远志炮制品的安神和祛痰作用研究

目的:考察厚朴炙远志炮制品对小鼠的镇静催眠、镇咳祛痰作用的影响。方法:采用戊巴比妥钠协同小鼠催眠实验与小鼠自主活动实验,对比炮制品与单味远志、单味厚朴之间的镇静催眠药效;采用氨水诱导法致小鼠咳嗽实验和小鼠气管酚红排泌的祛痰实验,对比炮制品与单味远志、单味厚朴之间的镇咳祛痰药效。结果:与空白组相比,优选出的炮制品高剂量(30g/kg)能显著增强对小鼠戊巴比妥钠协同催眠的作用,并显著抑制小鼠自主活动,极显著延长小鼠的咳嗽潜伏时间及减少小鼠咳嗽的次数,并显著增加小鼠气管的酚红吸光度,炮制品的药效在7.5g/kg至30g/kg的范围内成剂量依赖关系。结论:优选出的厚朴炙远志炮制品具有镇静催眠、镇咳祛痰作用。

远志-厚朴配伍对厚朴酚、和厚朴酚胃肠代谢的影响

目的:研究远志配厚朴对大鼠在胃液-肠液-血浆中不同时间厚朴酚、和厚朴酚含量的影响。方法:利用甲醇沉淀蛋白处理胃、肠液及血浆样品,采用HPLC测定,色谱条件为Synergi Hydro-RP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-水(51∶49)为流动相,流速1 mL.min-1,检测波长294 nm,柱温30℃。结果:厚朴组及远志配厚朴组大鼠胃肠液中均测得厚朴酚与和厚朴酚,且配伍组各时间点胃液中的酚类物质含量明显高于单味厚朴组;给药150～480 min时段肠液中的含量高于厚朴组;血浆中仅测得和厚朴酚,配伍组于给药60～480 min时段血浆中和厚朴酚含量高于厚朴组,并有推迟吸收趋势。结论:远志配伍厚朴后,可能因远志的助溶效应使胃肠液中的厚朴酚与和厚朴酚含量增加,从而发挥缓解远志胃肠动力障碍作用。首次采用此法,对厚朴缓解远志胃肠动力障碍的胃肠吸收机制开展了探索性研究,具有一定新意。

合成冰片对非孕大鼠离体子宫平滑肌运动的影响

目的:研究合成冰片对非孕大鼠离体子宫平滑肌运动的影响及其作用机制,为临床安全合理使用冰片提供参考。方法:采用BL-420生物机能实验系统,观察不同浓度冰片对非孕大鼠离体子宫平滑肌的影响;并观测一定浓度冰片对缩宫素、氯化乙酰胆碱、阿托品等工具药对子宫平滑肌的部分影响机制。结果:①冰片对非孕大鼠离体子宫平滑肌呈先兴奋后抑制的作用,且抑制作用随浓度递增而增强,当冰片的终浓度为3.92×10-2mg/ml时,子宫平滑肌呈现明显的松弛状态。②冰片2.63×10-2mg/ml能明显对抗缩宫素引起的收缩张力、峰面积、频率增加(P<0.01);再次加入缩宫素能明显增强冰片后的子宫平滑肌的收缩频率(P<0.01)。③冰片2.63×10-2mg/ml能显著对抗氯化乙酰胆碱引起的收缩张力、峰面积、频率增加(P<0.01),再次加入氯化乙酰胆碱,对冰片后的子宫平滑肌没有明显影响;冰片2.63×10-2mg/ml能协同阿托品进一步抑制子宫平滑肌的张力、峰面积(P<0.05)、频率(P<0.01),加入氯化乙酰胆碱,对阿托品与冰片处置后的离体子宫平滑肌未能产生显著性兴奋作用。结论:冰片对非孕大鼠离体子宫平滑呈现显著抑制作用,并能抑制缩宫素、乙酰胆碱所致的子宫平滑肌兴奋,有拟阿托品样作用,推测冰片通过部分阻断抗利尿激素受体和完全阻断M受体而发挥抑制效应。