基于Toll样信号通路探讨强精片改善少弱精子症大鼠的作用机制

目的探讨中药强精片(QJP)通过调控睾丸Toll样信号通路改善解脲支原体感染及环磷酰胺诱导两种少弱精子症大鼠模型生精功能的作用机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为5组,正常对照组(NC组)、解脲支原体感染少弱精子症组(UU组)、环磷酰胺少弱精子症组(CTX组)、强精片干预解脲支原体感染少弱精子症组(UU+QJP组)、强精片干预环磷酰胺少弱精子症组(CTX+QJP组),每组8只。造模后NC、UU、CTX组给予生理盐水灌胃,UU+QJP组、CTX+QJP组给予强精片0.45 g/(kg·d)灌胃,均给药4周。记录大鼠一般状态、睾丸附睾湿重,测定精子数量;HE染色观察睾丸及附睾结构变化;测量血清性激素水平;免疫组织化学染色分析睾丸Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MYD88)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)蛋白表达;RT-PCR测定TLR4、MYD88、TRAF6 mRNA表达。结果与NC组比较,CTX、UU组的大鼠一般状态较差,HE染色显示生精细胞不同程度减少,免疫组化显示TLR4、MYD88表达增多,TRAF6表达减少,CTX+QJP组及UU+QJP组有所改善。与NC组比较,UU组、CTX组精子总数、A+B级精子、A+B+C级精子、促黄体激素(LH)、睾酮(T)水平、TRAF6 mRNA表达下降(P<0.05),卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E_(2))水平、TLR4、MyD88 mRNA表达增加(P<0.05)。与UU组和CTX组比较,UU+QJP组和CTX+QJP组精子密度、A+B级精子、A+B+C级精子、LH、T水平、TRAF6 mRNA表达增加(P<0.05),FSH、E_(2)水平、TLR4、MyD88mRNA表达下降(P<0.05)。结论强精片可改善解脲支原体感染以及环磷酰胺所致少弱精子症大鼠的精子水平,其机制可能与调控睾丸中Toll样信号通路的关键靶点TLR4、MYD88、TRAF6有关。

强精片对睾丸支持细胞Toll样受体信号通路的作用

目的探讨强精片对睾丸支持细胞(SC)Toll样受体(TLRs)信号通路的作用。方法制备解脲支原体(UU)感染SC模型,分为模型组(空白血清)、强精片组(强精片含药血清)、TAK242组(TLR4抑制剂TAK242),另设正常SC采用空白血清培养为空白组。采用RT-q PCR和Western Blot分别检测TLR4、胞内下游分子髓样分化因子(My D88)、肿瘤坏死因子受体相关因6(TRAF6)、核因子κB(NF-κB)的mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光技术检测NF-κB的核转位情况。结果与空白组比较,模型组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κB mRNA和蛋白表达、p NF-κB蛋白表达以及NF-κB核转位比例增加(P<0.05)。与模型组比较,强精片组TLR4、TRAF6 mRNA及蛋白表达降低,MyD88、NF-κB、p NF-κB蛋白表达及NF-κB核转位比例降低(P<0.05);TAK242组MyD88、TRAF6 mRNA及蛋白表达、NF-κB及pNF-κB蛋白表达及NF-κB核转位比例降低(P<0.05)。与TAK242组比较,强精片组TRAF6 mRNA表达升高,pNF-κB蛋白表达及NF-κB核转位比例降低(P<0.05)。结论强精片可抑制TLR4/MyD88/TRAF6/NF-κB信号通路,作用与TLR4抑制剂TAK242相近。