基于网络药理学研究一贯煎治疗肝纤维化的有效成分及作用机制

背景中药复方具有多成分综合调节的特点,在肝纤维化防治中显示出独特的优势.一贯煎始载于魏之琇所著《续名医类案》,是滋阴疏肝的著名方剂,能够改善肝纤维化症状,研究其抗肝纤维化机制有助于药物开发和推广.目的通过网络药理学探究一贯煎治疗肝纤维化的机制并实验验证.方法利用文献和TCMSP数据库收集一贯煎成分及靶点,GeneCard、OMIM数据库收集肝纤维化疾病靶点.通过STRING数据库构建一贯煎-肝纤维化蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI)子网络,应用重启随机游走算法获得关键基因,通过DAVID数据库进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析及京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析.动物实验验证,18只SD大鼠随机分为正常组、模型组、一贯煎组.模型组、一贯煎组大鼠采用腹腔注射50%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))橄榄油溶液造模6周,正常组注射等量橄榄油.造模结束后一贯煎组每天灌胃一贯煎溶液(6.67 g/kg)共4 wk,其他组灌胃等量蒸馏水,取血和肝脏.全自动生化仪检测血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST).HE、Masoon染色观察肝脏病理学变化.Western blot法和qRT-PCR法检测肝脏关键蛋白表达水平和mRNA转录水平.结果筛选得到一贯煎成分52个,潜在作用靶点186个,肝纤维化疾病靶点1080个,得到一贯煎治疗肝纤维化的关键基因,其中亲和度前10的基因为STAT6、SRC、MAPK3、STX1A、EP300、STAT3、PLG、CTNNB1、CDKN1B、CANX,亲和度前50的基因KEGG富集得到PI3K-Akt信号通路、FoxO信号通路等134条.动物实验结果发现,一贯煎能够改善CCL4肝纤维化大鼠肝功能和减轻纤维化,降低α-肌动蛋白表达,促进信号转导和转录激活因子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)磷酸化,提高过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator activated receptor-γ,PPAR-γ)、白细胞分化抗原163(cluster of differentiation 163,CD163)蛋白表达和精氨酸酶1、白细胞分化抗原206、CD163mRNA转录水平,降低白细胞介素6的mRNA转录水平.结论一贯煎治疗肝纤维化作用涉及多个成分、多条信号通路,其中包括STAT6/PPAR-γ通路.